非洲马瘟概况综述

介绍了非洲马瘟病原学、流行病学、临床症状、病理变化、诊断及疫苗研究情况,分析了非洲马瘟防控现状,提出了防控非洲马瘟的目标及措施,为我国防范非洲马瘟疫情提供依据。     

非洲马瘟疫苗研究进展

本文对非洲马瘟的病毒特性、临床症状和检测方法进行概述,重点对非洲马瘟的传统疫苗和新型疫苗的研究进展进行了详细综述,以期为非洲马瘟疫苗的相关研究提供参考。     

非洲马瘟病毒分子生物学研究进展

非洲马瘟病毒属呼肠病毒科环状病毒属,有9个血清型,是一种有10个节段(L1~L3,M4~M6,S7~S10)的双链RNA病毒,编码10个蛋白(VP1~VP7和NS1,NS2,NS3/NS3A)。VP2蛋白在病毒的各蛋白中变异率最大,有15个抗原位点,是病毒的血清型特异性抗原,能与病毒的中和抗体发生反应;VP7蛋白在病毒的各蛋白中最保守,是病毒的血清群特异性抗原。NS1蛋白在感染细胞中形成病毒特异性微管结构;NS3蛋白在病毒各蛋白中变异率位居第二,系统进化分析将NS3分成3个进化群(α,β和γ)。该病毒的分子生物学诊断技术主要有RT-PCR和核酸探针技术。     

一株1型非洲马瘟疫苗毒种的初步鉴定

为做好非洲马瘟疫苗的储备性研究,以更好应对我国周边地区非洲马瘟疫情传入风险,对中国兽医微生物菌种保藏管理中心的一株1型非洲马瘟病毒鼠脑组织毒进行了复壮和细胞适应性培养,并对其病毒含量、特异性、对小鼠毒力等进行测定。结果显示,该毒种在Vero细胞连续传代至F10代后病变产生明显,病毒含量可稳定在10^6.5 TCID₅₀/0.1mL以上;对小鼠毒力表现稳定,细胞适应毒也可达10^6.5 LD₅₀/0.1mL。根据OIE参考引物进行RT-PCR鉴定,序列比对证实该毒株为血清1型,与泰国毒株THA2020/01拥有99.7%的同源性。血清学试验结果表明,该毒株可被非洲马瘟1型特异性血清中和。本研究获得了一株Vero细胞适应毒,可作为良好的疫苗毒株候选株,适用于规模化生产,为疫苗储备奠定良好基础。     

非洲马瘟病毒、西尼罗病毒和马冠状病毒的基因芯片检测技术研究

为探索建立马病病毒基因芯片检测方法,采用人工拼接的方式拼接了非洲马瘟病毒(ASHV)核酸序列,通过分子克隆技术获得西尼罗病毒(WNV)和马冠状病毒(ECV)的特异基因片段。用芯片点样仪逐点分配到处理过的玻片上,制备成检测芯片。以拼接、克隆的核酸序列为模板通过多重不对称RT-PCR进行特异性扩增和荧光标记后滴加到芯片上进行杂交,对杂交结果进行扫描检测和计算机软件分析。结果显示,制备的基因芯片可同时检测和鉴别上述3种病毒,ECV质粒样品、WNV质粒样品检测灵敏度为10²拷贝;AHSV质粒样品检测灵敏度为10⁴拷贝。其他病毒材料未出现荧光信号,验证了本方法的特异性。证明基因芯片技术可快速、准确和灵敏地同时进行多种病毒的检测。     

非洲马瘟病毒RT-LAMP检测方法的建立

为了建立非洲马瘟病毒(AHSV)环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测方法,基于AHSV VP7基因保守序列,设计2对特异性扩增引物。通过对反应体系中各组分浓度,反应温度及时间的优化,建立了快速、灵敏的AHSV RT-LAMP检测方法,并对该方法特异性、灵敏度、重复性进行探索。结果表明,在63℃恒温下反应45min,便可进行高效率的特异性扩增。反应产物经琼脂糖凝胶电泳和染料可视化鉴定,能够快速有效检测AHSV。用建立的方法检测马属动物易感的4种疫病病原,结果均为阴性,证实具有较高的特异性。灵敏度是RT-PCR的1 000倍。建立了AHSV RT-LAMP检测方法,具有快速、特异、灵敏、操作简单、设备要求低的特点,适合用于现场AHSV快速检测。     

浅谈非洲马瘟综合防控措施

2020年泰国爆发非洲马瘟疫情后,我国处于泰国的边境邻国位置,因此也加强了马属动物相关产品的出入境检验检疫工作以及应急监控措施.本文对非洲马瘟的病原、流行病学特征、疫苗研制以及疾病防控等方面进行阐述,使读者提高对非洲马瘟的认识,以期为马属相关行业提供非洲马瘟的相关防控建议.     

African Horse Sickness Fever in Vaccinated Horses: Short Communication

Our investigation has shown that multiple vaccinations with inactivated African horse sickness (AHS) vaccines containing all 9 serotypes and produced at the Central Veterinary Research Laboratory in Dubai, UAE, protect horses from AHS. However, the immunization did not prevent African horse sickness fever (AHSF) in approximately 10% of the vaccinated horses despite high enzyme-linked immunosorbent assay and virus neutralizing antibodies. African horse sickness fever is a very mild form of AHS with similar clinical signs. From all 6 horses which had developed AHSF, no virus was isolated from EDTA blood withdrawn during the acute phase of infection. Despite high neutralizing antibodies, serotype 9 was detected by polymerase chain reaction in 4 of them. All 6 horses recovered within 72 hours, after they developed mild clinical signs of AHS.     

非洲马瘟间接ELISA方法的建立及初步应用

为建立检测非洲马瘟间接酶联免疫吸附试验方法,利用重组杆状病毒感染昆虫细胞表达出具有良好抗原性的VP7蛋白,将感染VP7重组杆状病毒的昆虫细胞裂解液作为包被抗原,通过优化包被抗原浓度、二抗稀释度等,建立了检测非洲马瘟的间接ELISA方法,并进行了初步运用。结果表明,直接利用真核细胞表达VP7蛋白的昆虫细胞裂解液作为包被液可成功建立检测非洲马瘟的间接ELISA方法。     

非洲马瘟病毒VP7基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达

为了获得具有天然活性的非洲马瘟病毒重组VP7蛋白,制备针对非洲马瘟VP7蛋白的单克隆抗体及建立快速抗体检测方法,本试验通过PCR扩增、胶回收纯化后经Xba Ⅰ和Hind Ⅲ特异性酶切,将VP7基因克隆于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTB,经PCR、酶切、测序鉴定后,成功构建了携带VP7基因的重组质粒pFastBacHTB-AHSV-VP7。该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态细胞,经抗生素、PCR筛选,获得转座的杆粒Bacmid-AHSV-VP7,并在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒,再感染Sf9昆虫细胞,收获表达产物。表达产物经Western blotting分析表明,VP7重组蛋白得到表达,其分子质量大小约为45 ku,且具有良好的生物活性。     

禽大肠杆菌病疫苗研究进展

禽致病性大肠杆菌(APEC)是引起家禽多种肠外疾病如气囊炎、心包炎、肝周炎、蜂窝织炎及败血症的主要人畜共患病原菌.在过去的数十年间,试验了多种不同类型的疫苗用于本病的控制.鉴于APEC血清型较多且不同血清型之间缺乏交叉免疫保护,故生产上使用的APEC疫苗研究进展缓慢.作者对不同类型APEC疫苗进行了综述并提出未来的研究方向.     

猪繁殖与呼吸综合征疫苗研究现状

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是一种对养猪业危害严重的传染病,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)为有囊膜的单股正链RNA病毒,且具有高度的变异性,有美洲型和欧洲型两个血清型。猪肺泡巨噬细胞(PAM)、恒河猴胎肾细胞系MA-104及源于MA-104的传代细胞系(如Marc-145、CL-2621、HS.2H和CRL-1171)对PRRSV敏感。预防该病的常规疫苗有灭活疫苗和弱毒疫苗两种。通常以特定种毒在适当细胞系中培养增殖,经灭活或致弱,加入佐剂制得相应疫苗。灭活疫苗交叉保护性差,但使用安全;弱毒疫苗抗体产生快、持续时间长、保护力强,但源毒能在猪群中持续存在而有安全隐患。     

鼠疫疫苗研究进展

鼠疫具有高度传染性和致病性,早期的预防很重要.免疫接种是预防鼠疫的重要措施之一.传统的鼠疫疫苗包括灭活疫苗、减毒活疫苗.随着生物技术的发展,使得亚单位疫苗和核酸疫苗应运而生,并成为研究的热点.论文综述了当前鼠疫疫苗的应用现状和新型疫苗的开发研究概况.     

猪瘟疫苗研究进展

猪瘟是猪的一种高度接触性传染病 ,由于其造成巨大的经济损失 ,故而为清除本病作了很多工作。猪瘟疫苗的接种是控制猪瘟的重要手段。猪瘟疫苗包括灭活苗、弱毒苗及基因工程疫苗。猪瘟兔化弱毒苗因其优良的免疫原性是目前猪瘟防治应用最为广泛的疫苗之一。基因工程疫苗是目前猪瘟疫苗研究的热点领域 ,其包括亚单位疫苗、合成肽苗、活载体苗、核酸疫苗等。值得一提的是猪瘟病毒标记疫苗研究近年来发展迅速 ,目前已出现商品化的亚单位标记疫苗 ,可使猪瘟疫苗接种和自然感染区别更为简单、快捷。本文就猪瘟疫苗的发展及应用作了简要介绍     

非洲马瘟病毒VP7蛋白研究进展

非洲马瘟(African horse sickness, AHS)是由非洲马瘟病毒(African horse sickness virus, AHSV)引起的一种通过库蜢等昆虫传播的、主要感染马科动物的传染病。我国是世界动物卫生组织认可的非洲马瘟无疫国,随着AHS疫情在东南亚的传播,增大了疫情传入我国的风险。AHSV编码了7种结构蛋白(VP1～VP7),其中VP7是病毒内衣壳蛋白的主要组成部分,在AHSV 9个血清型中高度保守,常作检测的靶标。此外,VP7蛋白的自组装特点对于AHSV亚单位疫苗和病毒样颗粒疫苗(VLP)的研究有基础性作用。对当前AHSV VP7蛋白相关研究进展进行了综述,以期为AHSV检测方法及疫苗等研究提供参考。