广东省H1和H3亚型猪流感病毒抗体血清学调查

为了解广东省规模化猪场H1和H3亚型猪流感病毒的流行情况,采用ELISA检测方法对采集于广东省14个市的28个规模化猪场的1 015份猪血清进行H1亚型和H3亚型猪流感病毒的抗体检测。结果表明,H1亚型抗体总阳性率为40.9%,猪场阳性率高达92.9%(26/28);H3亚型抗体总阳性率为16.8%,猪场阳性率为78.6%(22/28)。其中粤西和珠三角地区H1亚型抗体阳性率分别为49.6%和45.4%,H3亚型抗体阳性率分别为14%和20.8%;而粤东和粤北地区H1亚型抗体阳性率分别为2.7%和12%,H3亚型抗体阳性率分别为6.3%和0。说明在广东省被调查的猪场中,H1和H3猪流感病毒的感染较为普遍,其中H1型感染率高于H3型。广东省SIV流行情况存在明显的地域性差异。     

2014年-2015年粤北规模猪场H1亚型猪流感血清学调查与分析

为调查粤北地区规模化猪场H1亚型猪流感病毒的流行和感染情况,采用H1亚型猪流感抗体检测试剂盒检测2014年-2015年采自粤北25个未进行SIV免疫的规模化猪场的376份猪血清.结果表明,2014年和2015年H1亚型猪流感感染总抗体率分别为13.04％和14.58％,而 1月~3月的感染抗体阳性率分别为19.05％和25.00％.该地区H1亚型猪流感感染抗体阳性率相对较低,表现出一定的区域性特征,1月~3月感染抗体阳性率均明显高于其他月份,该地区冬季抗体阳性率相对较高.     

中国猪源HSN1和H9N2亚型流感病毒的分离鉴定

猪是禽流感病毒"禽-猪-人"传播链中重要的中间宿主,了解猪流感的疫情动态将为动物流感及人流感的疾病预测及防制提供重要依据.1999～2001年间进行的血清学和病毒学监测发现我国猪群存在大范围的H1和H3亚型猪流感感染(李海燕等,2002).2002～2003年,我们进一步对来自全国14个省市的1936份血清进行了H9亚型猪流感的检测,同时在广东、福建等省进行了H5亚型猪流感的检测.2002年辽宁、广东、山东及重庆猪血清中出现H9亚型流感抗体,阳性率分别为7.3%、6.8%、5.1%和1.6%.2003年采集的猪血清H9亚型流感抗体均为阴性,同时发现广东、福建两省2003年出现H5亚型流感阳性猪群,阳性率分别为4.7%和8.2%.从2001～2003年收集和送检的样品中分离鉴定了6株H9N2亚型和2株H5N1亚型猪流感病毒,部分序列分析发现H9和H5亚型猪流感病毒均与我国分离的禽流感病毒高度同源.本研究进一步确证了我国猪群中存在H9N2亚型流感病毒,并且首次发现我国猪群已出现H5N1亚型流感病毒,为人类流感及动物流感的防制敲响了警钟.对这两个亚型流感病毒所具有的公共卫生和兽医公共卫生危害性应予以高度重视.     

宁夏猪流感血清学调查

采用血凝抑制试验对宁夏22个县(区、市)43个规模猪场、10个屠宰场、197个散养户的1710份猪血清样品进行了猪流感病毒H1、H3亚型抗体的检测。结果显示,被调查的样品中,H1亚型抗体阳性率为11.81%,H3亚型抗体阳性率为0.46%,H1+H3亚型抗体阳性率为0.35%。表明在所调查的宁夏猪场中,猪流感病毒的感染较为普遍,大部分猪场都曾被H1、H3亚型感染。     

石河子垦区规模猪场H1N1亚型猪流感血清学调查

为了解石河子垦区规模猪场猪流感病毒H1N1亚型(SIV)感染情况,采集石河子垦区6个规模猪场血清,采用血清学方法进行HIN1亚型猪流感病毒抗体检测,同时调查混合感染情况。结果:186份血清样品H1N1亚型SIV抗体阳性率为27.42%(51/186),6个猪场感染阳性率为50%(3/6);51份阳性血清中,82.35%(42/51)感染了猪肺炎支原体(Mhp),80.39%(41/51)感染了猪圆环病毒2型(PCV2),29.41%(15/51)感染了猪胸膜肺炎放线杆菌(APP),50.98%(26/51)感染了副猪嗜血杆菌(HPS),62.74%(32/51)感染了猪链球菌2型(SS2)。说明垦区部分规模猪场存在H1N1亚型SIV感染情况,且混合感染情况比较严重。     

广东部分地区H1和H3亚型猪流感抗体监测和病毒分离

从广东省17个未免疫猪流感病毒(SIV)疫苗的规模化猪场和3个肉联厂的待屠宰猪群中采集2 155份血清样品,采用ELISA方法进行猪流感的血清学调查。结果发现,种猪和肉猪H1亚型猪流感抗体阳性率分别为39.6%(329/830)和37.6%(498/1325),H3亚型抗体阳性率分别为10.8%(90/830)和4.6%(61/1325),H1+H3阳性率分别为5.2%(43/830)和1.8%(25/1325)。从281份猪鼻拭样品和肺样品中分离并鉴定出5株猪流感病毒,其中H1N1亚型3株,H3N2亚型和H1N2亚型各1株。     

广东云浮部分猪场猪流感血清学调查与分析

从广东云浮市猪场采集39个猪场种公猪、后备和经产母猪血清1506份,用微量血球凝集抑制(HI)试验监测H1、H3、H5、H9亚型猪流感抗体。结果表明:所监测猪场大部分猪群存在H1亚型猪流感抗体,场阳性率为71.79%(28/39),猪群血清抗体阳性率在22.2～100%之间,总阳性率为59.07%(890/1506);部分猪群存在H3亚型猪流感抗体,场阳性率为74.35%(29/39),猪群血清抗体阳性率在5～100%之间,总阳性率为67.75%(1020/1506);未监测到H5、H9亚型猪流感抗体的存在。     

宁夏猪流感血清学调查

采用血凝抑制试验对宁夏22个县（区、市）43个规模猪场、10个屠宰场、197个散养户的1710份猪血清样品进行了猪流感病毒H1、H3亚型抗体的检测。结果显示,被调查的样品中,H1亚型抗体阳性率为11．81％,H3亚型抗体阳性率为0．46％,HI＋H3亚型抗体阳性率为0．35％。表明在所调查的宁夏猪场中,猪流感病毒的感染较为普遍,大部分猪场都曾被H1、H3亚型感染。     

广东部分规模猪场猪流感血清学监测结果与分析

从广东省9市17县采集28个规模猪场种公猪、后备和经产母猪血清627份,用微量血球凝集抑制(HI)试验监测H1、H3、H5、H9亚型猪流感抗体。结果表明:所监测猪场大部分猪群存在H1亚型猪流感抗体,场阳性率为75%(21/28),猪群血清抗体阳性率在8%～100%之间,总阳性率为46.09%(289/627);部分猪群存在H3亚型猪流感抗体,场阳性率为28.57%(8/28),猪群血清抗体阳性率在10%～95%之间,总阳性率为12.76%(82/627);未监测到H5、H9亚型猪流感抗体的存在。     

东莞市H1N1亚型猪流感抗体血清学调查

为了解东莞市猪群感染H1N1亚型猪流感病毒的情况,2015~2017年在东莞市猪养殖场采集猪血清937份,采用ELISA方法进行H1N1亚型猪流感抗体检测,抗体阳性数411份,抗体阳性率为43.86%,其中2015~2017年的抗体阳性率分别为62.83%、57.08%、26.06%。结果表明,东莞市养殖场的猪群普遍存在H1N1亚型猪流感病毒的感染,分析3年的感染抗体阳性率,2015~2017年有下降的趋势可能与猪流感流行的毒株有关。     

猪流感病毒H1、H3、N1、N2亚型分型 RT-PCR方法的建立

根据GenBank中H1N1和H3N2亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(neuraminidase,NA)和M基因保守序列,分别设计合成了5对特异性引物,利用RT-PCR技术对SIV的型和亚型进行鉴定。结果表明,该方法的型RT-PCR可以检测出10⁴ EID₅₀病毒量所提取的RNA;H1、H3、N1和N2的亚型RT-PCR均可以检测出10⁴ EID₅₀病毒量所提取的RNA。除每对特异性引物所对应的亚型外,对其他亚型及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)的检测均为阴性,应用该方法对临床样品进行检测,其结果与病毒分离结果符合率为100%。结果表明,该方法特异性好、敏感性高,有望成为SIV的一种特异、敏感、快速的分型检测方法,为猪流感分子流行病学的调查奠定了良好的基础。     

Serological and virological surveillance of swine H1N1 and H3N2 influenza virus infection in two farms located in Hubei province, central China

Swine influenza viruses H1N1 and H3N2 have been reported in the swine population worldwide. From June 2008 to June 2009, we carried out serological and virological surveillance of swine influenza in the Hubei province in central China. The serological results indicated that antibodies to H1N1 swine influenza virus in the swine population were high with a 42.5% (204/480) positive rate, whereas antibodies to H3N2 swine influenza virus were low with a 7.9% (38/480) positive rate. Virological surveillance showed that only one sample from weanling pigs was positive by RT-PCR. Phylogenetic analysis of the hemagglutinin and neuraminidase genes revealed that the A/Sw/HB/S1/2009 isolate was closely related to avian-like H1N1 viruses and seemed to be derived from the European swine H1N1 viruses. In conclusion, H1N1 influenza viruses were more dominant in the pig population than H3N2 influenza viruses in central China, and infection with avian-like H1N1 viruses persistently emerged in the swine population in the area.     

天津地区猪流感血清学调查

2002年-2005年期间,采用血凝抑制试验对天津市10个区县44个养猪场进行了猪流感病毒抗体检测,结果75%的被调查猪场抗体检测结果有阳性,检测的648份血清样品中,69.6%为阳性。流感病毒抗体亚型调查结果显示该地区流行的猪流感病毒主要为H1和H3亚型,抗体阳性率分别为55.4%和39.4%。部分猪群中存在抗H9亚型流感病毒抗体,阳性率为5.4%,但未发现H5亚型流感病毒抗体。此外,部分猪群中同时存在2种或3种亚型(H1,H3和H9)流感病毒的抗体,表明这些猪曾经同时被2种或3种不同亚型的流感病毒感染。     

Novel swine influenza virus subtype H3N1 in Italy

To date, three subtypes of swine influenza viruses, H1N1, H1N2, and H3N2 have been isolated in Italy. In 2006, a novel swine influenza virus subtype (H3N1) was isolated from coughing pigs. RT-PCR performed on lung tissues, experimental infection in pigs with the novel isolate, and cloning the virus by plaque assay confirmed this unique H and N combination. The novel isolate was also antigenically and genetically characterized. Genetic and phylogenetic analysis showed that the complete HA gene of the H3N1 strain has the highest nucleotide identity to three Italian H3N2 strains, one isolated in 2001 and two in 2004, whereas the full length NA sequence is closely related to three H1N1 subtype viruses isolated in Italy in 2004. The remaining genes are also closely related to respective genes found in H1N1 and H3N2 SIVs currently circulating in Italy. This suggests that the novel SIV could be a reassortant between the H3N2 and H1N1 SIVs circulating in Italy.     

H1、H3亚型猪流感病毒双重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

为建立一种快速、准确地检测H1和H3亚型猪流感病毒（swine influence virus,SIV）的方法,根据H1和H3亚型SIV血凝素（hemagglutinin,HA）基因保守序列,分别设计2对特异性引物和2条TaqMan探针,建立双重实时荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法敏感性高,可检测到最低拷贝数为10²拷贝/μL;重复性良好,重复孔Ct值的变异系数均在5%以下;特异性好,除H1和H3亚型SIV外,H4、H5、H7、H9亚型SIV、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒、伪狂犬病病毒检测均为阴性;在田间样品中成功检出1株H1和1株H3亚型SIV,检出率为1.16%。该方法准确、快速、灵敏、特异,可为H1、H3亚型SIV的快速鉴别检测及流行病学调查提供有效的技术手段。     

Development and Application of Duplex Real-time RT-PCR Assay for Detection of H1 and H3 Subtype Swine Influenza Viruses

To establish a rapid, accurate method to diagnose and detect H1 and H3 subtype swine influenza viruses (SIV) at the same time, the specific primers and TaqMan probes were designed according to the conserved region of the HA gene of H1 and H3 subtype SIV. A duplex Real-time RT-PCR assay was developed for detection of H1 and H3 subtype SIV. The results showed that the Real-time RT-PCR could detect 10² copies/μL of H1 and H3 subtype SIV, the sensibility was well. Coefficient of variation of Ct value between repeating groups were all below 5%, the repeatability was favorable. The results were negative for the detection of H4, H5, H7, H9 subtypes SIV, classical swine fever virus, porcine reproductive and respiratory syndrome virus, foot and disease virus and pseudorabies virus, the specificity was fine. One sample was H1 subtype SIV, and one sample was H3 subtype SIV, by the established assay, the positive rate was 1.16%. The method was highly accurate, rapid, sensitive and specific, and could provide a method for rapid detection and epidemiological investigation of H1 and H3 subtype SIV.     

H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体IPMA检测方法的建立

本试验旨在建立一种针对检测抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验（immunoperoxidase monolayer assay,IPMA）筛选方法。通过优化MDCK细胞接毒量、细胞接毒后培养时间、封闭液的种类和工作浓度、工作时间等各个反应条件,并对建立的IPMA筛选方法的特异性、敏感性和重复性进行评价。结果显示,建立的IPMA检测方法的最优反应条件为MDCK细胞接毒10^2.63 TCID₅₀/100 μL H1N1亚型猪流感病毒,37℃培养24 h,含3‰ H₂O₂的甲醇室温固定15 min,5%脱脂乳37℃封闭2 h,50 μL杂交瘤细胞上清作为一抗,37℃孵育2 h,羊抗鼠HRP-IgG二抗37℃孵育1 h。所建立的IPMA方法能特异性地检测H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体,与猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV2）和猪瘟病毒（CSFV）阳性血清不发生交叉反应;其敏感性检测结果显示,可检测1：3 200的HI=2^-9标准H1N1猪阳性血清;批间和批内重复性试验结果较好。综上所述,本试验成功建立了抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的IPMA检测方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性好,为生产鉴定H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体提供了一种简便、实用、有效的检测手段。     

1株H1N1亚型猪流感病毒的全基因组特征及其对小鼠的致病性

旨在了解河南省猪流感病毒的流行情况及其遗传进化和基因组特征。2018年4月，从河南省某一出现疑似流感症状猪群中采集鼻拭子样品150份用于分离病毒，对分离病毒的全基因组进行序列测定和分析。同时感染6周龄BALB/c小鼠，研究其对小鼠的致病性。结果显示，获得1株H1N1亚型病毒[命名为A/swine/Henan/NY20/2018（H1N1）]。遗传进化表明，其HA和NA基因属于欧亚类禽H1N1分支，PB2、PB1、PA、NP和M基因属于2009甲型H1N1分支，NS基因属于经典H1N1分支。HA蛋白的裂解位点序列为PSIQSR↓GL，具有低致病性流感病毒的分子特征，在小鼠肺和鼻甲有效复制并能引起肺组织病理学变化。本研究分离到1株3源重排H1N1亚型病毒，对小鼠呈现一定致病力，提示应进一步加强对SIV的监测。