规模化养殖场猪繁殖障碍性疫病的实验室诊断

为对发生在贵阳市某规模化养猪场的一起猪繁殖障碍性疫病进行确定性诊断，采集病死猪的血清和病料样本进行实验室诊断。结果：猪细小病毒、猪圆环病毒2型和猪伪狂犬病病毒PCR阳性检出率依次为45.45%(5/11)、45.45%(5/11)和54.55%(6/11)。结果表明，本次疫病是由猪细小病毒、猪圆环病毒2型和猪伪狂犬病病毒混合感染所致。     

热辅快速生物发酵分解工艺无害化处理病死猪尸体效果评估

为评估热辅快速生物发酵分解工艺无害化处理病死猪尸体的处理效果,利用病毒分离培养、RT-PCR(PCR)等方法对热辅快速生物发酵分解工艺处理的病死猪尸体样品进行病原检测,通过处理前及处理后病原微生物检出率的对比,对该工艺无害化处理病死猪尸体的效果进行评估。结果显示,除猪瘟病毒外,猪圆环病毒、伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪链球菌等常见病原微生物在处理72h后均能被杀死,说明经热辅快速生物发酵分解工艺无害化处理病死猪尸体基本达到了无害化处理要求。     

猪流行性腹泻病病毒的分离鉴定

猪流行性腹泻病,是造成养猪业经济损失严重的传染病之一。本文是针对某养猪场的病死猪进行临床症状观察、病理剖检,通过病毒的分离培养及RT-PCR鉴定,确诊病死猪病原为猪流行性腹泻病毒应加强对猪流行性腹泻病的诊断及监控。     

猪乙型脑炎病的诊断

猪乙型脑炎又称流行性乙型脑炎、日本脑炎,是由流行性乙型脑炎病毒引起的一种急性、人畜共患的自然疫源性传染病。作者对某养殖户的病死猪进行临床症状观察,病理剖检及实验室诊断,通过病毒分离及鉴定,确诊病死猪为乙型脑炎病毒感染。鉴于养殖户中该病的存在及对养猪业的危害,建议加强对猪乙型脑炎病的诊断及监控。     

实际生产中化制法无害化处理病死猪的病毒杀灭效果

为评估实际生产应用中化制法无害化处理病死猪尸体杀灭病毒的效果,选取3个应用化制法工艺处理病死猪尸体的规模化猪场,采集无害化处理前和处理后的样品,利用实时荧光定量PCR（FQ-PCR）检测方法和病毒分离培养法,对无害化处理前后的样品进行非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒Ⅱ型、猪伪狂犬病毒、口蹄疫病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒与猪流行性腹泻病毒等9种病毒的核酸检测,通过处理前后病原核酸检出情况的对比,评估该工艺在实际生产应用中病毒杀灭效果。结果显示：化制法处理前病死猪尸体样品中的部分病原可在细胞培养物中检出且可增殖传代,说明存在活病毒;而处理后样品的细胞培养物中均检不出病原核酸,说明病原均被彻底杀灭。结果表明,在实际生产应用中,化制法无害化处理病死猪尸体可彻底杀灭病毒,达到了无害化处理目标。     

1例藏香猪伪狂犬病、猪圆环病毒病与附红细胞体病混合感染的诊治

为对送检的发病藏香猪病死因进行确诊,本试验采用常规PCR、RT-PCR及荧光定量PCR方法,并结合流行病学调查、临床诊断及病理剖检等实验室检测对送检病料进行诊断,结果显示病死猪心脏、肺脏充血出血,肺脏肉变,气管内充满白色泡沫,全身淋巴结出血;荧光定量PCR方法检测猪圆环病毒呈阳性,PCR方法检出猪伪狂犬病病毒特异性条带,未见猪传染性胸膜肺炎放线杆菌、猪肺炎支原体条带,RT-PCR方法未扩增出猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒特异性条带;血液涂片染色镜检可见猪附红细胞体。结果表明病死猪为猪伪狂犬病、猪圆环病毒病与猪附红细胞体病混合感染,采用经实验室诊断给出的综合防治方案治疗后,疫情得到控制。本次病例的诊治为养猪业可能发生的猪伪狂犬病、猪圆环病毒病、猪附红细胞体病的混合感染提供了有效的防治方法和借鉴经验。     

猪细小病毒病诊断技术研究进展

猪细小病毒病是由猪细小病毒(PPV)感染引起的猪的重要传染病之一。该病主要感染母猪特别是初产母猪及血清学阴性经产母猪,导致母猪流产、产死胎、畸形胎、木乃伊胎及病弱仔猪等,而感染母猪本身无明显症状。该病呈地方性流行,严重地影响着养猪业的发展。由于猪细小病毒常与其他病毒如猪圆环病毒2型和猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染,导致断奶仔猪多系统衰竭综合征。临诊上本病与猪伪狂犬病、猪乙型脑炎和猪布鲁氏菌病的症状极为相似,故仅靠临诊确诊较为困难。目前对本病的诊断方法主要有临床诊断、病原学诊断、血清学诊断以及分子生物学诊断等。特别是分子生物学诊断方法以其灵敏度高、特异性强而被人们所重视。主要针对该病近年来诊断方法的研究进展进行阐述,从而为猪细小病毒病的诊断提供参考。     

猪细小病毒检测技术研究进展

猪细小病毒是引起母猪繁殖障碍的重要病原之一,给养猪业带来巨大经济损失。本文对猪细小病毒检测技术研究进展予以综述,以期为猪细小病毒病诊断及防制提供参考。     

昆明某猪场猪高致病性蓝耳病的诊断和预防

云南省昆明市某猪场2016年1月频发育肥猪死亡,保育猪生长发育不良、高热、厌食以及母猪繁殖障碍等为主要临床症状的疾病。为了查明该猪场猪只致病原因,笔者通过对病死猪进行临床诊断、病理剖检,以及采集病料进行猪圆环病毒2型、猪冠状病毒以及猪高致病性蓝耳病病毒的RT-PCR检测。检测结果显示,从病死猪只肺脏、脾脏等器官组织中扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒目的条带,与阳性目的条带相吻合,结合临床症状以及病理剖检结果分析,该猪场病死猪为猪繁殖与呼吸综合征病毒感染所致。     

2017年河南省病死猪常见病原分布调查

为了解河南省病死猪常见病原分布规律,采用横断面研究方法,对2017年河南省病死猪常见病原分布情况进行调查。以病死猪聚集地——无害化处理厂为采样单元,按病死猪体重进行分层抽样,采集不同阶段病死猪的扁桃体、淋巴结、肺脏、肝脏、脾脏、肾脏等样品进行猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、口蹄疫病毒（FMDV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪细小病毒（PPV）、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）、副猪嗜血杆菌（HPS）和弓形虫（TP）的病原学检测,并对检测结果进行时间、空间和群间分布分析。结果显示：共检测样品526份,未检出FMDV、TGEV和PEDV,其他7种病原的检出率在0.76%~58.17%之间;春夏季节检出的病原种类较多,检出率也较高,秋冬季较少;不同区域病原种类分布情况差异较大,豫西检出病原种类最少,豫中检出病原种类最多,不同区域内各病原检出率差异较大;不同体重猪群的病原种类数量有差异,体重越小,检出病原种类越多。调查结果表明,河南省常见猪病病原复杂,不同区域、不同季节、不同生长阶段猪群的病原流行情况并不一致,需通过加强监测,制定相应的防控措施。     

Development of hybridization probes on the basis of recombinant DNA to identify porcine parvoviruses and rotaviruses

Porcine parvovirus (PPV) and porcine rotavirus (PRV) infections can be diagnosed, and the diagnosis greatly contributes to their control. For the diagnosis of PPV and PRV of pigs recombinant DNA were obtained which could be used as hybridization probes. Homology between PPV-RNA and cloned cDNA was confirmed, and the ability of plasmid probes to detect PRV was demonstrated. Hybridization with preparations of both PPV-infected cells and purified PPV gave positive reproducible results. The results are useful as an experience for the development of a sandwich hybridization system for PPV detection.     

猪细小病毒BQ-C毒株VP2基因的鉴定及表达

本研究从临床发病猪采集病料,以PK15传代细胞进行病毒分离,通过PCR、血液凝集试验(HA)和电镜鉴定为1株猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV),命名为BQ-C。对分离的毒株进行测序,结果显示该毒株与GenBank登录的PPV BQ株同源性为100%。为获得该毒株结构蛋白VP2基因的表达产物,将VP2基因片段插入到原核表达载体pET-30a(+),得到表达重组质粒。经双酶切和测序鉴定,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。SDS-PAGE结果表明,获得的重组蛋白分子质量约为71.5 ku,与预期大小相符。Western blotting结果显示获得的重组蛋白能与PPV阳性血清特异性结合,表明重组蛋白具有良好的反应原性。结果表明,本研究成功分离了1株PPV BQ-C株,且表达的VP2重组蛋白可用于PPV血清学诊断和疫苗的研发。     

猪细小病毒研究进展

猪细小病毒 (PPV)是引起母猪繁殖障碍的主要病原体之一。 PPV最早是从培养细胞中发现并分离得到的一种小 DNA病毒。PPV按照其致病性与组织嗜性大致可以分为 4个类型。研究表明 ,PPV不仅是引起母猪繁殖障碍的主要病原体之一 ,而且能够引起多种猪病。PPV基因组为单股负链 DNA,大小约为 50 0 0 bp,基因组有两个主要的开放阅读框架 ,基因组共编码 3种结构蛋白和两种非结构蛋白 ,即 VP1、VP2、VP3和 NS1、NS2。VP2蛋白是主要的免疫原性蛋白 ,可以诱导机体产生强烈的免疫反应 ,NS1蛋白是 PPV基因组本身编码的反式激活蛋白 ,对PPV早期和晚期的转录发挥着重要作用 ,另外有研究表明 ,NS1蛋白是具有多种功能的锚定蛋白 ,在 PPV体外感染过程中具有重要功能。随着对猪细小病毒研究的不断深入 ,目前已经在猪细小病毒病原学、诊断与防制以及分子生物学方面取得了进展。     

猪繁殖呼吸综合征与猪细小病毒多重聚合酶链式反应检测方法的研究

本研究根据GenBank已发表PRRSV N基因序列和PPV NP2基因序列,设计2对引物,在单一PCR基础上,对多重PCR反应条件进行了优化,初步研究了一种PRRS与PPV多重PCR检测方法,即通过一次PCR反应,可同时扩增出PRRSV 202bp和PPV 751bp的特异性片段,该方法适合于PRRSV和PPV联合检测和鉴别诊断,具有较高的实用价值,为临床进一步研究提供参考。     

Detection of Porcine Circovirus Type 2, Porcine Parvovirus and Porcine Pseudorabies Virus from Pigs with Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome by Multiplex PCR

Multiplex PCR was established to detect porcine circovirus type 2 (PCV-2), porcine parvovirus (PPV) and porcine pseudorabies virus (PRV) and applied to samples from 137 piglets exhibiting clinical signs of postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS). PCV-2 DNA was detected from all samples. Moreover, 43 samples were positive for PPV but negative for PRV; 11 samples were positive for PRV but negative for PPV; and 35 samples were positive both for PPV and PRV. These results suggests that PCV-2 co-infection with PRV and PPV may play an important role in PMWS. Also, multiplex PCR is an appropriate candidate method for diagnosis of PCV-2, PRV and PPV simultaneously in field cases.     

猪细小病毒NS1基因低温诱导表达及间接ELISA方法的建立

利用PCR技术从猪细小病毒的DNA模板中扩增了NS1的基因片段,将PCR产物克隆至pET32c载体,将构建好的重组质粒pET32c-NS1,转入表达宿主茵BL21中,利用低温诱导表达的方法,避免了包涵体的形成.West-ern-blot结果显示,表达产物有良好的生物活性.纯化后的重组蛋白作为抗原,包被酶标板,建立了检测猪细小病毒特异性抗体的间接ELISA方法.抗原最佳包被质量浓度为2.5 mg/L、血清最佳稀释度为1∶200.表达的NS1蛋白可作为免疫诊断试剂用于检测PPV,且能很好的区别灭活疫苗免疫猪和自然感染猪.     

猪伪狂犬病毒和猪细小病毒双重PCR方法的建立及初步应用

目的本研究旨在建立一种适用于临床样品和动物源性生物制品中猪伪狂犬病毒和猪细小病毒同时检测的双重PCR技术。方法针对猪伪狂犬病毒(PRV)的gE基因和猪细小病毒(PPV)的VP2基因的保守区域分别设计引物。结果经条件优化后,所建立的双重PCR方法能特异性地检测出样品中的PRV(581bp)和PPV(202bp)。结论本方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性,适用于临床样品中对PRV和PPV的同时检测,也可用于猪源性生物制品的检测。     

猪细小病毒分子生物学与核酸探针的研究进展

猪细小病毒( Porci ne parvovi rus,PPV) 是引起猪繁殖障碍的主要病原之一,近年来PPV感染呈扩大上升趋势,给养猪业造成了巨大的经济损失。各国的研究者加强了PPV基因组结构和蛋白质的研究。随着分子生物学的发展,核酸探针以其敏感性和特异性成为快速诊断PPV的一种方法。     

猪细小病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备及抗原捕捉ELISA方法的建立

为制备猪细小病毒VP2蛋白单克隆抗体(McAb),建立检测猪细小病毒的抗原捕捉ELISA方法 (AC-ELISA),本研究以原核表达的重组VP2蛋白作为免疫原,免疫6周龄BALB/c雌鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经间接ELISA方法筛选,成功获得了2株能稳定分泌抗猪细小病毒VP2蛋白的McAb,命名为3C4、5F8。以多克隆抗体作为捕获抗体、单克隆抗体5F8作为检测抗体,通过双抗夹心ELISA各个反应条件的优化,建立检测猪细小病毒抗原捕捉ELISA方法。该方法与日本乙脑病毒(JEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)均不发生交叉反应;与RT-PCR相比较,符合率、敏感性和特异性分别为93.6%、90.9%、94.4%。本研究建立的猪细小病毒AC-ELISA有良好的重复性、敏感性和特异性,可应用于猪细小病毒感染的早期诊断。     

Indications, management, and outcome of long-term positive-pressure ventilation in dogs and cats: 148 cases (1990-2001)

OBJECTIVE: To determine outcome of positive-pressure ventilation (PPV) for 24 hours or longer and identify factors associated with successful weaning from PPV and survival to hospital discharge in dogs and cats. DESIGN: Retrospective case series. ANIMALS: 124 dogs and 24 cats that received PPV for 24 hours or longer. PROCEDURES: Medical records were reviewed for signalment, primary diagnosis, reason for initiating PPV, measures of oxygenation and ventilation before and during PPV, ventilator settings, complications, duration of PPV, and outcome. Animals were categorized into 1 of 3 groups on the basis of the reason for PPV. RESULTS: Group 1 patients received PPV for inadequate oxygenation (67 dogs and 6 cats), group 2 for inadequate ventilation (46 dogs and 16 cats), and group 3 for inadequate oxygenation and ventilation (11 dogs and 2 cats). Of the group 1 animals, 36% (26/73) were weaned from PPV and 22% (16/73) survived to hospital discharge. In group 2, 50% (31/62) were weaned from PPV and 39% (24/62) survived to hospital discharge. In group 3, 3 of 13 were weaned from PPV and 1 of 13 survived to hospital discharge. Likelihood of successful weaning and survival to hospital discharge were significantly higher for group 2 animals, and cats had a significantly lower likelihood of successful weaning from PPV, compared with dogs. Median duration of PPV was 48 hours (range, 24 to 356 hours) and was not associated with outcome. CONCLUSIONS AND CLINICAL RELEVANCE: Results suggested that long-term PPV is practical and successful in dogs and cats.