检测p53基因诊断犬乳腺恶性肿瘤的初步研究

研究犬乳腺恶性肿瘤p53基因在体内的表达,探讨其与犬乳腺肿瘤恶性程度的相关性。根据GenBank中犬p53基因序列以及文献报道的高度保守区域,设计1对引物,同时以GAPDH基因序列作为内参,将临床采集的犬乳腺肿瘤组织进行p53基因PCR检测,分析p53基因的表达量变化趋势。结果表明,良性肿瘤组织p53基因的表达量极小;恶性肿瘤组织中的表达量随着其恶化程度明显增高。由此可推断,检测p53基因的表达量可作为诊断犬乳腺肿瘤、判断肿瘤恶化程度及预后的一个重要指标。     

p53基因与肿瘤形成

肿瘤抑制基因的研究已经成为继癌基因之后肿瘤遗传学、分子生物学领域的前沿和热点,尤其是抑癌基因p53越来越被人们重视。研究表明正常的p53,又称野生型p53,在细胞损伤后的修复过程中发挥重要作用。正常p53的功能像"分子警察"一样监视着基因组DNA的完整性。在细胞发生DNA损伤时,p53蛋白能使细胞分裂终止在G1/S期,以使细胞有足够的时间修复损伤,恢复正常状态。若不能修复,野生型p53还能启动细胞的凋亡过程从而引发细胞的程序性死亡,阻止具有癌变倾向的突变细胞产生。而突变型p53基因会导致肿瘤的发生,大多数肿瘤与p53的突变有关。文章着重阐述了p53的表达与突变、p53的稳定调节及p53的转录调控等。     

p53基因及其在家禽肿瘤性疾病应用研究进展

抑癌基因p53作为一种转录因子,通过调控其靶基因在应激反应中启动的不同生物学过程,包括细胞凋亡、细胞周期阻滞或衰老等,发挥其在肿瘤抑制中的作用。近年人类医学对p53基因进行研究的较多,但是动物医学文献中有关p53基因的研究报道相对较少。论文就国内外对p53基因及其编码产物的结构、作用机制、应用、检测等方面的研究进展以及在禽病中的表达和应用进行综述,为家禽肿瘤性疾病的诊治提供参考。     

湖北省禽白血病自然病例的病理学诊断及p53和Bcl-2基因表达情况的观察

应用组织病理学和SABC免疫组织化学技术,对湖北省武汉市的2批14日龄和33日龄疑似禽白血病肉鸡进行了病理学诊断,并观察了病鸡肝肿瘤组织中p53基因和Bcl-2基因的表达情况。剖检可见病鸡肝、肾、脾均不同程度肿胀,组织病理学检查在肝、肾、心等脏器可见散在或聚集成团的骨髓瘤细胞,胞浆内充满球形的嗜酸性颗粒;在病鸡肝肿瘤组织中p53和Bcl-2基因均呈阳性表达,诊断为J亚群禽白血病（ALV-J）,提示p53基因和Bcl-2基因与肉鸡J亚群禽白血病有关。     

44例犬乳腺肿瘤的病理学分析及p53和HER-2的蛋白表达

为了对犬乳腺肿瘤分类,分析表皮生长因子受体-2(HER-2)与p53的过表达在肿瘤类型上的差异及影响,对所收集的犬乳腺肿瘤标本,进行石蜡切片、H.E.染色,划分肿瘤的病理类型,应用免疫组织化学法检测犬乳腺肿瘤中HER-2基因与p53基因的表达情况。结果 44例犬乳腺肿瘤病理组织切片中,共观察到纤维腺瘤、叶状肿瘤、导管乳头状瘤、浸润性导管癌、浸润性小叶癌(腺泡型)、小叶癌、黏液癌、髓样癌伴随淋巴细胞浸润、混合样癌9种类型;42例犬乳腺肿瘤的免疫组化结果中,HER-2在良性肿瘤中无表达,在恶性肿瘤中的表达率为38.9%,p53在犬乳腺肿瘤中的表达可达78.6%,而在恶性肿瘤中的表达率100%。结论 HER-2与p53的过表达有肿瘤类型的差异性。     

科技

正上海兽医所发现p53基因的作用近日,中国农业科学院上海兽医研究猪呼吸道传染病创新团队研究发现,肿瘤抑制因子p53具有抵抗单增李斯特菌感染的作用。该项研究通过比较单增李斯特菌对p53基因敲除小鼠和正常小鼠的致病性,发现p53基因敲除小鼠的死亡率和病理变化程度均显著高于正常对照组小鼠。细胞感染试验进一步证实了p53可以抑制单增李斯特菌在细胞内的感染     

p53调控Nfkbiz基因表达的研究

核因子-κB（NF-κB）在炎症反应中起着关键的促进作用,并且受其他多种因素的调节。Nfkbiz基因编码的IκB？蛋白是IκB家族成员之一,在炎症反应中起着调节NF-κB的作用。本研究采用荧光实时定量PCR分析Nfkbiz基因的表达情况,发现在p53特定刺激源作用下Nfkbiz基因mRNA丰度显著降低。分析Nfkbiz基因序列,发现其基因中存在可能的p53反应元件,通过构建荧光素酶报告质粒及双荧光素酶报告试验和染色质免疫共沉淀试验,证明Nfkbiz基因中含有p53反应元件并且受p53蛋白调节。以上结果初步证明Nfkbiz是受p53蛋白负向调控的靶基因。     

Tet-On系统调控p53稳定表达的H1299细胞系的建立与应用

应用Tet-on系统和H1299细胞,建立了p53诱导表达的H1299细胞系p53-Tet H1299,p53表达受强力霉素(doxycycline,Dox)调控,存在一定的剂量依赖性。诱导表达的p53蛋白有很好的核定位能力和转录活性,能显著上调p21、TLR3、Bax等多种p53转录激活的下游靶基因表达,同时还可显著抑制水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)的复制,说明p53-Tet H1299可作为研究p53抗病毒作用的细胞模型。p53诱导表达细胞系的建立为进一步研究p53抗病毒作用机制、转录调控基因的筛选及其他生物学功能研究提供了很好的研究工具。     

鸡p53抑制传染性法氏囊病病毒复制及gga-miR-2127对其调控的分子机制

传染性法氏囊病(IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的一种高度危害养鸡业的传染病。肿瘤抑制蛋白p53能够抑制多种病毒的复制,但对IBDV复制的影响仍然不清楚。本研究以IBDV为模式病毒,采用体外感染模式,在IBDV感染的DF-1细胞中,p53的表达水平和活性均显著升高。p53过表达可以抑制IBDV的复制,并激活鸡体抗病毒天然免疫基因(IPS-1、IRF3、PKR、OAS、Mx)的表达水平上调;抑制p53的表达则得到相反的结果;表明p53可以激活鸡体的抗病毒天然免疫反应发挥抗IBDV感染作用。利用生物信息学方法和双荧光素酶报告系统分析发现,gga-miR-2127可以作用于p53 mRNA的3'UTR;荧光定量RT-PCR和免疫印迹分析表明gga-miR-2127可以使p53的蛋白水平表达降低,但mRNA水平没有变化;gga-miR-2127过表达可以使鸡体的抗病毒天然免疫基因表达降低,IBDV复制水平升高。本研究表明:gga-miR-2127可以作用于p53 mRNA的3'UTR调控p53的表达从而影响其下游抗病毒天然免疫基因的表达来发挥抗IBDV感染的作用。     

冬虫夏草菌丝粗多糖对SP2/0细胞凋亡和p53表达的影响

观察冬虫夏草菌丝粗多糖对SP2／0细胞凋亡诱导和p53基因表达的影响。在体外用粗多糖处理SP2／0细胞,MTT法检测其对肿瘤细胞增殖抑制作用,Hochest33342荧光染色观察细胞凋亡的形态学变化,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞的周期,实时荧光定量PCR检测p53基因的表达情况。结果发现,与对照组相比,冬虫夏草粗多糖可抑制SP2／0细胞增殖,诱导出现典型凋亡形态变化,电泳出现特有梯形条带,引起细胞周期阻滞,使p53基因的表达明显改变。这提示冬虫夏草粗多糖对SP2／0细胞生长的抑制,可能与诱导凋亡和声53基因表达的改变有关。     

Expression of p63 in the mouse primordial germ cells

Proteins encoded by p63 gene a have structural similarity with tumor suppressor p53, and were thought to induce cell cycle arrest and apoptosis during development. The p63 proteins are also expressed in the basal cells of many epithelial tissues in the adult, and supposed to play important roles in maintaining the epidermal stem cells. Previously, we reported the p63 expression in the testis of mouse embryos, suggesting their involvement in the growth arrest and apoptosis of testicular germ cells (Nakamuta and Kobayashi, J. Vet. Med. Sci. 65:853-856). In this study, we investigated the timing of this p63 expression in the germ cells during migration and colonization to the gonads. Immunohistochemical analysis of mice from embryonic day (E) 7.5 to E12.5 demonstrated that p63 positive reactivity was seen as early as E8.5 when the founder cells of germ cells, primordial germ cells (PGCs), were located in the hind gut epithelium, but PGCs were negative for p63 at E7.5 when they first appeared. p63 is expressed as six isoforms, resulting from alternative splicing at C-terminus and by the use of two promoters that generate variations at N-terminal end. RT-PCR analyses suggested that different types of p63 mRNAs were likely to be expressed in PGCs during development. These results imply that p63 may be involved in the regulation of PGC development by controlling the gene expression required for their migration and colonization to the gonads.     

家禽免疫器官内细胞凋亡及其凋亡相关基因调控研究进展

细胞凋亡是生物界广泛存在的一种重要的生命过程,是多细胞动物为调节机体发育、维护内环境稳定、有基因调控的细胞主动性死亡过程。在细胞凋亡的分子生物学研究过程中,发现已有多种基因参与细胞凋亡的调控,其中包括Bcl-2家族和Bax、p53、Fas和FasL等。家禽免疫器官胸腺、脾脏和法氏囊内存在着自然凋亡现象,许多学者用物理性、化学性和生物性因素诱导了家禽免疫器官细胞凋亡,证实了细胞凋亡相关基因参与了家禽免疫器官内细胞凋亡的调控。     

Immunohistochemical evaluation of p53 expression with different antibodies in malignant canine tumours with or without p53 gene mutation

Six monoclonal antibodies and a polyclonal antibody (CM1) were used to investigate the overexpression of p53 protein by immunohistochemistry (IHC) in six sarcomas and 21 mammary carcinomas from 27 dogs. IHC was compared with p53 gene mutation analysis performed on the same samples. Only the monoclonal PAb240, PAb421 and the CM1 antibodies were able to detect expression of canine p53 protein. CM1 was found to give the highest concordance (8/11) between positive expression of the p53 protein by IHC and the presence of a gene mutation. In the samples that were negative for p53 expression by IHC, but contained a p53 gene mutation according to DNA analysis, the mutation often affected the epitopes that could have been recognized by these antibodies. Only one out of 16 tumours without a p53 gene mutation had a weakly positive IHC result. These findings indicate that in these two types of canine tumours, IHC – particularly with CM1 – can detect many alterations in p53 expression owing to a gene mutation. False‐positive results were very infrequent.     

糖原组学研究进展——β-葡聚糖的结构和功能的研究进展

糖原组学是研究糖类的结构及其功能特性特别是糖类发挥作用的生物学机制的一门新型学科，将成为生命科学研究中的新热点。多糖及其缀合物在生命活动过程中贮存着各种生物信息，在细胞内外之间传递各种物质。目前，β-葡聚糖的研究是该领域研究最为广泛的糖类，其中研究最早的是香菇多糖，因为它具有免疫活性和抗肿瘤作用；作者对多糖的生物学地位以及β-葡聚糖的结构及其与生物学功能的关系的研究进展作一简述。葡聚糖的生物活性与其分子量、溶解度、黏度、支化度、链构象及结晶度有关，β-葡聚糖具有多种不同的构象，一重和三重螺旋是其存在的主要高级结构形式。     

抗素的研究进展

从抗素的发现、家族成员、结构、生物学功能、基因表达调控等方面论述了抗素在生物化学和遗传学方面的最新研究进展。认为抗素的浓度与胰岛素活性紧密相关；抗素基因的表达受多种激素、药物、营养状态的调控；其功能与糖代谢、脂代谢及动脉硬化的形成有关。