O、A、Asia1型口蹄疫病毒胶体金定量检测免疫层析方法的建立

旨在建立口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)抗原血清型的快速分型和定量的检测方法,利用双抗体夹心法,将口蹄疫病毒的兔抗及豚鼠抗体作为标记胶体金与NC膜检测带的原料,分别制备出检测O、A、Asia 1血清型的3种层析试纸卡.通过对标定的抗原标准品146S检测,拟合出定量标准曲线...     

口蹄疫灭活疫苗抗原稳定性研究进展

口蹄疫是一种感染牛、羊和猪等偶蹄动物、具有高度传染性的动物疫病。疫苗免疫是控制该病的关键措施之一,口蹄疫灭活疫苗在口蹄疫流行地区广泛使用。灭活疫苗中,完整口蹄疫病毒粒子(146S粒子)是至关重要的免疫抗原,它的数量和稳定性决定了疫苗的免疫效果。不同血清型,甚至同型不同毒株的口蹄疫病毒粒子稳定性不同,146S粒子在一定温度、酸、碱条件下容易分解为五聚体(12S粒子),导致疫苗免疫效力大幅下降。近年来口蹄疫病毒结构及其稳定性的分子基础研究取得了一定进展,为研究口蹄疫病毒稳定性提高疫苗质量,开发新型口蹄疫空衣壳疫苗提供了重要的理论基础。本文简要介绍了口蹄疫病毒结构基础、稳定性研究方法和研究进展。为同行了解口蹄疫病毒结构与免疫的关系,评价新型疫苗提供一些参考信息。     

口蹄疫病毒基因工程疫苗研究进展

口蹄疫 (FootandMouthDisease ,FMD)是偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病 ,被国际兽医局列为头号A类传染病。该病传播途径多、传播速度快 ,曾多次在世界发生大流行。虽然该病的死亡率不高 (幼畜除外 ) ,但造成动物生产性能下降 ,扑杀动物花费大量的人力、物力和财力 ,影响国际贸易 ,经济损失惨重。如 1997年我国台湾、2 0 0 0年日本和韩国、2 0 0 1年英国暴发的FMD可以说给该地区或该国畜牧经济以致命的打击[1] 。为此 ,世界各国非常重视FMD的研究。口蹄疫病毒 (FootandMouthDiseaseVirus ,FMDV)属于小RNA病毒科 ,口蹄…     

口蹄疫病毒病毒样颗粒研究进展

口蹄疫病毒病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是不含口蹄疫病毒RNA的空衣壳结构,由口蹄疫病毒的4种结构蛋白体外自组装形成的,形态上与天然病毒粒子相似,具有很强的免疫原性和生物学活性。文章介绍了口蹄疫病毒衣壳的组装、口蹄疫病毒VLPs在国内外的研究进展和影响VLPs形成的因素,并对VLPs在疫苗研制等方面的应用前景作了展望。     

口蹄疫146S病毒粒子IgG的纯化及其免疫活性的鉴定

用口蹄疫146S病毒粒子(FMDV 146S)免疫家兔产生抗体,待血清效价达到1：64以上分离血清;通过饱和硫酸铵盐析沉淀、Sephadex G-25除盐和DEAE-cellul08e层析等方法纯化血清IgG;用间接ELISA方法检测纯化后的血清IgG免疫活性。证明用离子交换层析法纯化兔抗口蹄疫146S病毒粒子血清IgG效果良好。     

口蹄疫嵌合病毒疫苗的研究

口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）ＶＰ１（１３２－１５９位残基）的Ｇ－Ｈ环是病毒粒子表面的主要特征，它在疫苗效力，抗原变异和细胞结合中起着主要作用。我们用ＦＭＤＶ的感染性ｃＤＮＡ构建一种Ａ血清型病毒，在该病毒中，其Ｇ－Ｈ环被Ｏ或Ｃ血清型病毒的同源序列取代。这种嵌合病毒的复制滴度高，并表现与野毒相似的噬斑形态。由此证明，Ｇ－Ｈ环可在血清型之间交换。单克隆抗体分析表明，环内所含抗原表位可被转移至嵌合体，并保持由Ａ     

口蹄疫病毒灭活的研究

将兔体传代的Ｏ型口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）适应ＢＨＫ２１细胞培养，该细胞毒的ＴＣＩＤ５０达７－７．６。在ＰＨ７．９的介质中，用胺类衍生物能使ＦＭＤＶ彻底灭活。给豚鼠接种灭活毒后１个月攻击强毒，能极有效地保护豚鼠抵抗强毒攻击，实验动物的保护达１００％。     

应用生物技术控制口蹄疫病毒

１０年前，人们就曾预言生物技术将取代传统的流行病学方法来控制口蹄疫（ＦＭＤ）的发生，但迄今为止这一目的还未完全达到，尽管如此，生物技术仍然提供了一种极敏感和特异的ＦＭＤ诊断方法，近２０年来，ＦＭＤ的世界性分布仍然未有多大变化，仍是影响动物产品（包括动物）国际贸易的主要疾病之一，应用生物技术将能提供一种有效的基因工程疫苗来控制ＦＭＤ及其他病毒病的发生，但目前为止，控制和消灭ＦＭＤ仍然依赖于传统的流行     

Asia I型口蹄疫疫苗效力检验替代方法的初步研究

使用三株针对AsiaⅠ型口蹄疫146S抗原的杂交瘤细胞株(1#G3C2、2#G6B9、10#C2G1)大量生产腹水单克隆抗体,粗提纯化并按一定的比例进行混合。初步建立混合腹水单克隆抗体介导的间接夹心ELISA方法,使用该方法测定AsiaⅠ型病毒灭活抗原、O型病毒灭活抗原、正常BHK21细胞培养液,结果表明该方法特异性好,所测定OD值和AsiaⅠ型抗原稀释倍数呈明显线性关系。用该方法对11批AsiaⅠ型、O型单价或双价成品疫苗破乳抗原进行测定,结果表明不同批次不同企业生产的疫苗完整病毒颗粒抗原含量有差异,进一步完善有望用于AsiaⅠ型口蹄疫成品疫苗中有效颗粒抗原含量的测定,从而发展成一种疫苗效力检验替代方法。     

高效体积排阻色谱检测口蹄疫灭活疫苗中146S抗原含量的疫苗前处理方法比较

为提高高效体积排阻色谱检测口蹄疫灭活疫苗146S抗原含量的准确性、适用性和操作性,分别采用正戊醇、正丁醇和三氯甲烷对9批口蹄疫灭活疫苗进行破乳处理,对三种方法的破乳后水相得率和146S抗原含量的色谱检测结果进行比较。结果表明,破乳后水相得率分别为:正戊醇38%~49%,正丁醇42%~44%,三氯甲烷50%;9批疫苗的色谱结果均检测到146S特征峰,146S含量在0.7~12.5μg/mL,3次测定的相对标准偏差最大值为4.0%,9批疫苗不同前处理方法的检测结果均值具有统计学意义,三氯甲烷组与正戊醇组数据一致性强,正丁醇组测定值偏低。使用三氯甲烷对疫苗进行破乳,不仅操作简便快速,而且破乳水相得率稳定,是最优的破乳方法。实验进一步优化了口蹄疫灭活疫苗146S抗原含量检测的高效体积排阻色谱法,为该方法的科学应用提供了数据支撑。     

口蹄疫表位疫苗的研究进展

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起偶蹄动物发生的一种急性、烈性传染病,给发病地区的畜牧业造成巨大的损失,目前应用疫苗来防控口蹄疫仍是最主要的手段。作为一种新型疫苗,表位疫苗是用病毒相关抗原表位制备,可同时携带多个抗原表位及辅助性表位的疫苗,具有安全性好、易操作和可控等优势,受到人们密切的关注。近些年来,对于口蹄疫表位及疫苗的研究取得了很大的进展,现对口蹄疫病毒相关的细胞表位及其以此为基础的表位疫苗的最新进展进行综述,为研制更加安全有效的口蹄疫疫苗提供参考。     

Research Progress on the Epitope-based Vaccine against Foot and Mouth Disease

Foot and mouth disease (FMD) is caused by foot-and-mouth disease virus (FMDV) and affects cloven hoofed animals,it is an acute and potent infectious disease which has caused great loss in some regions. Up to now, people still use vaccines to prevent and control FMD which has become the the popular ways. Prepared by virus'antigen epitopes and carried with multiple epitopes and helper epitope,the epitope-based vaccine against FMD which has caught people's attention to it owing to it has high safety and is easy to be manipulated and controlled.In recent years,the research based on epitope of FMDV has made great progress.Now we review the latest progress of the FMDV epitopes and the epitope-based vaccine against FMD in this paper, in order to provide relevant preferences for the development of the vaccines with high security and efficiency.     

口蹄疫3A蛋白基因的表达及其抗原性研究

从pUCm-3ABC质粒切割FMDV的3A蛋白基因DNA，将其与pET-30c( )载体连接，构建pET30C3A原核重组表达质粒，序列分析表明，pET30C3A重组质粒的插入3A蛋白基因的阅读框架正确。pET30C3A—BL21经IPTG诱导后可表达3A融合蛋白。Westem Blot试验证明该表达蛋白具有较好的抗原活性，提示可进一步用重组表达的FMDV 3A蛋白作抗原检测FMD。     

猪口蹄疫病毒抗原位点及其抗原性差异分析

为了分析 3株猪口蹄疫病毒 ( FMDV- B、D、S)的抗原位点 ,采用 5株具有 EL ISA反应特性的抗猪口蹄疫病毒的单克隆抗体 ( Mc Ab- A6、F9、G17、G5 2、S2 5 ) ,通过 EL ISA试验分别测定 3个抗原的最适包被浓度以及 5株单抗对各抗原的饱和工作浓度。 EL ISA叠加试验的增值结果表明 ,5株 Mc Ab分别针对 4个不同的抗原位点 ,其中 Mc Ab- A6和 F9识别同一个抗原位点。FMDV- B株含有这 4个不同抗原位点 ,而 FMDV- D、S株只有 3个抗原位点 ,没有 Mc Ab-A6、F9识别的抗原位点。根据抗原位点差异 ,可以将 3个毒株分成 2个不同组     

猪口蹄疫和水泡病病毒免疫鉴别诊断方法的比较研究

通过单克隆抗体斑点酶联免疫吸附试验（ＭｃＡｂＤｏｔＥＬＩＳＡ）和反向间接血凝试验（ＲＩＨＡ）分别对猪口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）和水泡病病毒（ＳＶＤＶ）检测比较。试验表明,ＭｃＡｂＤｏｔＥＬＩＳＡ特异性强,快速简便,比ＲＩＨＡ更为敏感、稳定、直观。本研究在猪口蹄疫和水泡病单抗联合诊断药盒的研制方面是一个有益的尝试。     

抗猪口蹄疫病毒单克隆抗体的抗原识别位点分析

用ELISA叠加试验，对5株具有ELISA反应特性的抗猪口蹄疫病毒(FMDV)单克隆抗体(McAb—A6、F9、G17、G52、S25)的抗原识别位点进行检测。抗体反应增值结果表明，5株单抗分别针对4个不同抗原住点，McAb—G17、G52、S25识剐的住点各不相同，其中McAb—G7、G52识别的位点有部分重叠，McAb—A6、F9识别同一位点，位于G17、G52位点的重叠区内。     

注射口蹄疫疫苗对种公牛精液品质的影响研究

[目的]研究注射口蹄疫疫苗对种公牛精液品质的影响。[方法]随机选择6头种公牛,并采其精液进行检测,用比较方法研究。[结果]注射双价灭活疫苗前精液量6.8ml,鲜精活率70%,精液密度17.3亿/mL,冻后活率39.7%冻精数414.8剂,精子畸形率14.2%。注射双价疫苗之后精液量4.3 mL,鲜精活率6.5%,精液密度12.7亿/mL,冻后活率34.8%冻精数162.3剂,精子畸形率18%。[结论]注射疫苗后,种公牛的精液品质也随之下降,精液量、精子密度和原精活率注射后较注射前极显著降低,认为注射口蹄疫疫苗对种公牛的精液品质产生较大影响。     

O型口蹄疫病毒VP1基因在2种原核表达载体上的表达

设计1对引物将口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)VP1基因克隆到T载体上,通过NdeⅠ和Xho Ⅰ双酶切VP1基因和pET-28(a),在T4连接酶的作用下构建重组表达载体pET-28a-VP1;然后用EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切VP1基因与pET-41(a),在T4连接酶的作用下构建重组表达载体pET-41a-VP1;然后将这2个新构建的载体分别通过热冲击法转化BL21(DE3),37℃不同IPTG浓度和32℃、0.01 mmol/L IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示pET-28a-VP1的表达量高于pET-41a-VP1,在DTT和乙醇的作用下,二者均没有可溶性蛋白出现.