植物组织总RNA提取方法的比较

本文综述了植物组织总RNA提取方法比较与难点对策分析。植物组织总RNA提取方法有化学试剂提取和试剂盒提取两种。化学试剂提取法有强变性剂法、CTAB法、热硼酸法及改良热硼酸法、Li Cl-尿素法、阴离子去污剂法、皂土法、硅藻土-苯酚法。其中,除皂土法和硅藻土-苯酚法是近年提出的较新的植物组织总RNA提取方法外,其余的都被广泛应用。本文可为植物组织总RNA提取方法研究提供参考。     

从肉牛脂肪组织中提取总RNA技术方法的改进

RNA提取技术是现代分子生物技术中一种常用技术。介绍一种高纯度、高产量的从动物组织中提取总RNA的改进的方法,该法实用性强、重复性好。提取的RNA无DNA等污染物,其产量、纯度完全能满足分子克隆和基因表达研究的需要。利用改进后的方法提取牛组织的总RNA,研究了Lep基因在牛组织中的表达分布。     

从绵羊脂肪组织提取高质量总RNA方法的改进及应用

目前已有大量文献报道利用各种方法和商业化试剂成功提取高质量的RNA。但是由于组织的特异性,以脂肪组织为材料提取高质量的总RNA存在以下两方面的问题:第一,脂肪组织RNA含量较少,每毫克组织样品所得总RNA的量小于0.05μg,因而所提RNA的得率较低;第二,RNA产品中常伴有基因组DNA污染,当使用这种RNA制品进行RT-PCR定性分析时,基因组DNA可直接充当PCR模板,造成PCR假阳性结果。因此,为获得高纯度的RNA制品,作者以脂肪组织为材料,经反复试验,在商家提供的总RNA提取试剂的操作步骤基础上优化和改进了某些提取步骤,从而得到了符…     

对凉山半细毛羊内脏组织总RNA提取方法的研究

提取高质量的RNA是从基因表达水平上对与动物生产性状相关的遗传信息进行研究的基础和前提。本文通过对TaKaRaRNAisoReagent法进行改进,从而获得了提取高质量凉山半细毛羊内脏组织总RNA的方法。     

猪精子RNA提取的初步研究

实验采用Trizol一次法或试剂盒提取猪精子的总RNA,然后通过RT-PCR扩增的方法,检测精子和睾丸组织中鱼精蛋白(PRM-1)的mRNA;使用不同数量的精子,检测在本实验条件下能扩增出PRM-1带所需要的最小精子数量;通过OD260/280的测算,判断不同提取方法所得RNA的纯度;通过琼脂糖电泳得到精子RNA与睾丸、卵巢组织RNA的电泳图。实验结果表明:在使用RNA沉淀剂时,1.51×107精子可检测到PRM-1的mRNA,不使用沉淀剂则需要3.02×107精子才检测到;使用Trizol一次法提取的精子总RNA纯度较常规Mini试剂盒(W6221)高;本实验首次得到猪精子总RNA的普通琼脂糖凝胶电泳图。初步研究的结果表明,Trizol一次法可用来提取精子总RNA供进一步研究;猪精子RNA的28S和18S片段与睾丸、卵巢组织无明显差异。     

改良TRIzol法高效提取东北林蛙皮肤总RNA

目的:建立一种从两栖动物皮肤组织中提取高质量总RNA的方法。方法:改良传统TRIzol法,提取皮肤总RNA,紫外分光光度计测定RNA纯度和得率,1.1%琼脂糖凝胶电泳检测其完整性。结果:改良方法提取的总RNA,其A260/A280值在1.8～2.1之间,A260/A230大于2;琼脂糖凝胶电泳显示清晰的28s rRNA和18s rRNA条带,且28s rRNA条带亮度约为18s rRNA的2倍。结论:改良TRIzol法提取的总RNA纯度高、完整性好、杂质少、得率大,易于操作掌握,可以用于相应的分子生物学试验。     

猪卵泡颗粒细胞总RNA提取方法改进的探讨

RNA是一类非常有用的生物大分子,在分子生物学研究领域正发挥越来越重要的作用。本文介绍一种改进过的从动物组织提取总RNA的方法,实践证明,该方法重复性好,实用性强。用此方法提取的猪卵泡颗粒细胞总RNA,无DNA污染物等问题,完全满足分子克隆、基因表达等分子生物学研究的需要。     

绵羊脾脏淋巴细胞体外诱导培养及总RNA提取

本试验进行了绵羊脾脏淋巴细胞的分离、体外诱导培养和总RNA提取,经琼脂糖凝胶电泳证实为完整、均一的总RNA;将此法提取的RNA反转录成cDNA后经过PCR扩增,可获得清晰的目的条带。该方法简便、快速,提取的总RNA可以用于进一步基因克隆、表达。     

荔枝果皮总RNA提取方法的筛选

以三月红荔枝果皮为试验材料,通过采用改良CTAB法、SDS法、改良SDS法、改良Bugos法和RNAplant plus Reagent试剂盒（TIANGEN公司）提取总RNA,采用浓度检测、纯度检测、RT-PCR等方法进行提取结果检测,进而筛选出最佳的提取方法。结果表明,这五种方法都能从三月红荔枝果皮中提取出总RNA,但总RNA浓度和纯度有明显的差异。其中采用改良Bugos法、改良SDS法和RNAplant plus Reagen试剂盒提取RNA的浓度较高;采用改良CTAB法和RNAplant plus Reagen试剂盒提取的总RNA纯度较高,完整性较好。采用SDS法、改良SDS法和改良Bugos法所提取的荔枝果皮总RNA纯度低,降解严重。经RT-PCR验证,采用改良CTAB法和RNAplant plus Reagen试剂盒均能扩增得到200bp的18sRNA编码基因片段。综合以上各项检测的结果,改良CTAB法为提取荔枝果皮总RNA的最佳方法,总RNA质量和得率满足后续分子生物学实验的需要。     

猪囊尾蚴总RNA的提取与mRNA的分离

目的为比较对猪囊尾蚴总RNA提取与mRNA分离方法的优点。方法采用Promega公司的SV总RNA分离体系、RNAgents总RNA分离体系和hioDev—Tech的TRIZOL LS试剂,对猪囊尾蚴总RNA进行了提取;用Promega的PolyA Ttract mRNA分离体系和Amersharn的Quickprep微量mRNA纯化试剂盒对mRNA进行分离。结果表明经改良的TRIZOLLS试剂,提取猪囊尾蚴RNA效果好,而PolyA Ttract mRNA分离体系分离的mRNA含量高,纯度好。结论所分离的mRNA适合于构建cDNA表达文库。     

柱花草总RNA提取方法比较

以热研2号柱花草（Stylosanthes guianensis Reyan No.2）叶片为材料,利用紫外分光光度计和凝胶电泳法比较SDS 酚抽提法、CTAB法、Trizol试剂盒和柱式植物RNAout试剂盒法提取柱花草总RNA的质量和纯度。结果表明,改良CTAB法和柱式植物RNAout试剂盒法提取的RNA的OD260 nm/OD280 nm分别是1.85和1.93,OD260 nm/OD230 nm均大于2.0。凝胶电泳结果表明,改良CTAB法及柱式植物RNAout试剂盒法均有28S rRNA和18S rRNA两条清晰的条带,且无降解。其他两种方法获得的RNA品质较差,有降解和弥散现象。将改良CTAB法和柱式植物RNAout试剂盒法提取的RNA逆转录成cDNA,cDNA能扩增出一条清晰的β actin基因片段,进一步证明了改良CTAB法和柱式植物RNAout试剂盒法提取的总RNA具有很高的纯度,其中柱式植物RNAout试剂盒法的效果好于改良CTAB法。     

利用Solexa测序技术鉴定策勒黑羊microRNA

试验旨在挖掘、分析策勒黑羊卵巢组织microRNA(miRNA),为进一步研究特定miRNA参与策勒黑羊卵泡发育及激素分泌等相关生殖活动的机制奠定理论基础。从策勒黑羊卵巢组织中提取总RNA,分离、构建小片段RNA文库,进行Solexa测序和生物信息学分析。结果表明,共获得9527311条干净序列读数,小RNA序列长度主要分布在21~23 nt;共鉴定出434个策勒黑羊卵巢组织表达的保守miRNA,其中表达量在100以上有167个;鉴定出57个候选miRNA,其中表达量在100以上有8个。测序成功获取了策勒黑羊卵巢组织miRNA序列及表达谱,卵巢组织miRNA表达丰富且表达量各异。     

microRNA Identification of Ovaries in Qira Black Sheep by Solexa Sequencing

With the purposes of providing basic information for further studies of Qira Black sheep reproduction activities such as folliculogenesis and hormone secretion, characterization of microRNA(miRNA) expression in Qira Black sheep ovary tissues was studied.In this study, the small RNA isolated from total RNA of Qira Black sheep ovary tissues were sequenced by Solexa and then bioinformatics analysis were performed.The results showed that 9527311 clean reads were obtained, and the 21-23 nt small RNA was the major RNA in the total sequences.434 ovary conservative miRNA and 57 new miRNA were identified.Among them, there were 167 conservative including 8 new miRNA exceeded 100 in the expression levels.The study succeeded to construct the expression library of miRNA which were abundant and differentially expressed in Qira Black sheep ovary tissues.