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《中国预防兽医学报》2020,(9)
为建立鉴别A型塞尼卡病毒(SVA)与O型、亚洲I型、A型口蹄疫病毒(FMDV)的快速检测方法,本研究分别设计4对特异性引物,用于扩增SVA 3D基因(157 bp)、O型FMDV VP1基因(240 bp)、亚洲I型FMDV VP1基因(460 bp)、A型FMDV VP1基因(320 bp)。经优化引物浓度、退火温度等反应条件,初步建立了同时检测SVA与O型、亚洲I型、A型FMDV的多重RT-PCR方法。利用该方法同时检测SVA及O型、亚洲I型、A型FMDV、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型(PCV2)、PCV3等主要猪源病毒,结果显示该方法仅对SVA及O型、亚洲I型、A型FMDV检测为阳性,其他均为阴性,特异性较强;SVA、O型、亚洲I型、A型FMDV重组质粒标准品10倍倍比稀释后利用本研究建立的多重RT-PCR方法检测,结果显示同一反应体系中,4种重组质粒标准品的检出下限均为2.5×10~2拷贝/μL,敏感性较高;批内、批间重复性试验结果一致,该方法重复性较好。利用本实验建立的方法对2019年采集自广西省的30份临床疑似样品进行检测,结果显示,SVA、O型FMDV的阳性检出率分别为16.67%和63.33%;未检出亚洲I型及A型FMDV;同时采用国家标准《口蹄疫诊断技术》(GB/T18935-2003)中RT-PCR方法以及文献报道的SVA套式RTPCR方法对FMDV、SVA检测,结果与本实验建立的多重RT-PCR方法检测结果的符合率为100%。本研究首次建立的多重RT-PCR检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,为鉴别检测SVA与O型、亚洲I型、A型FMDV提供了有效的技术方法。 相似文献
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正牛O-P液是牛食道-咽部分泌物的缩写,主要作为口蹄疫等病原学检测样品,从而评估免疫抗体水平,了解病原分布状况及疫情风险。掌握正确的牛O-P液采样方法对保证样品的真实性起着关键性作用。1材料1.1工具金属探杯、灭菌广口瓶、采样箱、记号笔、标签、封口膜、一次性手套、口罩、防护服、水鞋、防护镜、牵引绳、保定架、鼻钳。1.2试剂1.2.1 10.1mol/L PBS液 相似文献
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为了解安顺市近5年家畜口蹄疫免疫效果,采用VP1结构蛋白抗体ELISA及液相阻断 ELISA方法对全市家畜口蹄疫免疫血清进行免疫抗体监测。结果表明:2012、2013年猪O型口蹄疫合成肽疫苗抗体检测合格率极显著下降( P<0.01),2012年猪O型口蹄疫佐剂灭活疫苗及牛O型口蹄疫-亚洲Ⅰ型双价苗抗体检测合格率极显著下降( P<0.01);羊O型口蹄疫-亚洲Ⅰ型双价苗抗体检测合格率总体呈逐年上升趋势( P<0.01),猪O型口蹄疫合成肽疫苗比猪O型口蹄疫佐剂灭活疫苗保护率高。 相似文献
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O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法的建立 总被引:2,自引:0,他引:2
本研究建立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法,确立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法检测O型口蹄疫血清阴阳性判定标准:抗体效价大于或等于1:32时判为O型口蹄疫抗体阳性;1:16~1:32时判为O型口蹄疫抗体可疑。检测131份阴性血清、口蹄疫亚洲1型阳性血清和A型阳性血清,固相竞争ELISA方法和液相阻断ELISA方法的特异性分别是95.5%,84.7%。固相竞争ELISA方法检测口蹄疫亚洲1型、口蹄疫A型阳性血清时,无交叉反应,O型口蹄疫病毒感染牛、免疫牛和感染猪血清的阳性检出率均为100%,免疫猪检出率为86.7%。 相似文献
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口蹄疫是世界动物卫生组织(O IE)规定的A类烈性动物传染病,我国列为一类动物传染病。口蹄疫共有7种血清型,亚洲I型是其中一种。目前国内还没有猪亚洲I型口蹄疫免疫程序,通过对105头猪进行亚洲I型口蹄疫母源抗体和免疫抗体的检测,观察其抗体消长规律,以制定比较符合实际的、科学的猪亚洲I型口蹄疫免疫程序。1材料与方法1.1实验动物选取4个规模化猪场的105头0日龄新生仔猪进行亚洲I型口蹄疫抗体跟踪检测。1.2试剂和疫苗试剂选用中国农业科学院兰州兽医研究所国家参考实验室生产的亚洲I型口蹄疫LPB-EL ISA抗体检测试剂盒;pH 9.6的碳酸… 相似文献
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本试验旨在迅速、准确检测口蹄疫阴性血清和阳性血清,确立O型口蹄疫抗体金标检测试纸条的判定标准。通过3批次O型口蹄疫抗体金标检测试纸条,对180份猪、牛、羊口蹄疫阴性血清,197份猪、牛O型口蹄疫弱阳性血清,317份猪、牛、羊O型口蹄疫阳性血清,223份牛Asia 1、A型口蹄疫阳性血清,600份田间血清样品进行检测,同时用O型口蹄疫液相阻断ELISA和O型口蹄疫正向间接血凝2种方法检测相同的血清样品。对3种方法检测的结果进行分析,并且将试纸条的检测线和质控线的显色情况与O型口蹄疫液相阻断ELISA的抗体滴度相比较。确立了试纸条的诊断标准:试纸条抗体滴度1∶2-为口蹄疫抗体阴性;试纸条抗体滴度1∶8+为O型口蹄疫阳性血清。根据试纸条的显色结果与液相阻断ELISA的结果的关系,绘制了比色卡。试纸条的判定标准检测血清结果与液相阻断ELISA和正向间接血凝结果分别进行统计学分析,试纸条与液相阻断ELISA和正向间接血凝相关性分别为y=1.142x+0.7421,y=1.1845x+0.8623;相关系数(r)分别为0.9221和0.9033。结果显示,O型口蹄疫抗体金标检测试纸条的判定标准的确立和比色卡的绘制,实现半定量分析,更加迅速、准确,适于实验室、基层兽医站和养殖场使用。 相似文献
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为全面落实动物疫病强制免疫工作,科学评估重大动物疫病的免疫效果,于2023年5月18日—6月11日对各区(县)进行了重大动物疫病免疫抗体飞检及监测预警抽检工作,在全市10个区县随机采集猪牛羊鸡血清样品共计3098份,分别采用正向间接血凝、酶联免疫吸附实验和血凝与血凝抑制试验等检测方法分别做了牛O型口蹄疫、羊O型口蹄疫、牛A型口蹄疫、羊A型口蹄疫、羊小反刍兽疫、禽流感H5亚型、禽流感H7亚型、猪O型口蹄疫、猪瘟、布鲁氏菌共10种免疫抗体检测。结果显示:牛O型口蹄疫、羊O型口蹄疫、牛A型口蹄疫、羊A型口蹄疫、羊小反刍兽疫、禽流感H5亚型、禽流感H7亚型、猪O型口蹄疫、猪瘟样品免疫抗体合格率分别为97.93%、96.34%、65.00%、51.43%、96.58%、82.59%、83.70%、93.66%、93.09%;牛、羊布鲁氏菌病免疫抗体均为阴性。结果表明,牛羊O型口蹄疫、羊小反刍兽疫、禽流感H5亚型、禽流感H7亚型、猪O型口蹄疫平均样品合格率均高于农业农村部规定的70%的基本要求,能够有效防控重大动物疫病的流行。但牛羊A型口蹄疫抗体合格率均低于70%,需加强动物免疫并进行免疫抗体监测... 相似文献
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《养殖与饲料.饲料世界》2020,(6)
本研究对辽宁阜新地区春季集中免疫期间猪、牛、羊口蹄疫免疫抗体采用ELISA法进行监测,同时对猪、牛、羊进行口蹄疫病毒非结构蛋白抗体单抗阻断ELISA检测和口蹄疫病毒荧光RT-PCR检测,将免疫抗体监测与病毒检测结果进行综合系统分析,有效评估该地区口蹄疫预防免疫效果和感染带毒情况,及时掌握口蹄疫防控工作情况,做出风险评估,进行风险交流,发挥预警预报作用。结果表明,在口蹄疫春季集中免疫后,阜新地区猪、牛、羊O型口蹄疫平均免疫抗体合格率为86.97%,牛、羊亚洲Ⅰ型口蹄疫平均免疫抗体合格率为86.74%,奶牛A型口蹄疫平均免疫抗体合格率为95.62%,均超过了国家农业农村部对重大动物疫病评价的总体要求(有效免疫抗体合格率要达到70%以上)。 相似文献