甘草提取物对1株致犊牛腹泻大肠杆菌生物膜抑制作用的试验

大肠杆菌生物膜的形成与其致病性、抗药性有密切关系,而中药在抗生物膜方面具有独特的优势。本试验对来自新疆阿克苏地区某奶牛场6份犊牛腹泻粪便进行了细菌分离鉴定,获得24株大肠杆菌,5株沙门菌。经96孔微量板法对已分离的24株大肠杆菌进行生物膜阳性菌筛选试验,获得生物膜阳性菌3株,其中1株为强阳性(XN-3-6株)。采用不同浓度甘草提取物对XN-3-6分离株生物膜形成抑制试验,结果表明:甘草提取物抑制大肠杆菌生物膜形成的最小浓度为5%。该试验结果为临床上防治大肠杆菌引起犊牛腹泻病提供了理论依据。     

鸡源粪肠球菌生物膜形成能力与明胶酶E毒力基因相关性研究

为了探讨粪肠球菌明胶酶E(gelE)基因对粪肠球菌生物膜形成能力的影响,试验取鸡源粪肠球菌50株,设计特异性引物,通过PCR扩增粪肠球菌毒力基因gelE;利用96微孔板结晶紫染色法在595 nm波长下测定其OD值,对gelE基因和生物膜进行相关性分析。结果表明:有78%(39/50)的粪肠球菌呈生物膜阳性,22%(11/50)的粪肠球菌呈生物膜阴性;82%(41/50)的粪肠球菌呈gelE基因阳性,18%(9/50)的粪肠球菌呈gelE基因阴性,粪肠球菌毒力基因gelE和生物膜具有一致性。说明粪肠球菌gelE基因能够调控生物膜的形成。     

仔猪腹泻的大肠杆菌生物膜的筛选和致病力观察

采用96孔微量板法,对临床分离鉴定的24株大肠杆菌进行生物膜筛选,得到11株生物膜阳性大肠杆菌,并绘制出4株生物膜强阳性菌株的生长曲线。同时对小鼠进行攻毒试验,结果表明,生物膜阳性菌株的致病力强于生物膜阴性菌株,这为临床预防仔猪腹泻病提供了理论依据。     

犊牛粪便中益生菌的分离与鉴定

为了筛选出能够抑制犊牛腹泻的益生菌株,本研究采集了20份健康犊牛新鲜粪便,采用厌氧培养、形态学观察以及分子鉴定技术,初步分离得到3株革兰氏阳性杆菌(A1、A2和A3)和4株革兰氏阳性球菌(B1、B2、B3和B4),并对这些菌株进行分子鉴定。鉴定结果表明:A1和A2均为罗伊乳杆菌,A3为黏膜乳杆菌;B1为坚强肠球菌,B2为海氏肠球菌,B3和B4均为屎肠球菌。本研究为防治犊牛腹泻提供了更多的候选菌种。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在动物源细菌耐药性监测中的研究应用

细菌鉴定是细菌耐药性监测过程中的重要工作环节之一,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption ionization time-off flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)能够高效鉴定细菌。为了快速监测五家养殖场来源的大肠杆菌和肠球菌的临床耐药特征,本研究利用MALDI-TOF MS和微量肉汤稀释法,快速鉴定临床分离的大肠杆菌和肠球菌,并对其进行耐药表型检测。结果显示,MALDI-TOF MS实现了对临床分离菌株(31株大肠杆菌和34株肠球菌)的快速鉴定;鸡源大肠杆菌和肠球菌的耐药情况最为严重,其次为羊和牛。其中,鸡源的大肠杆菌均对四环素(100%)和氨苄西林(91.67%)耐药率最高,肠球菌对苯唑西林(62.07%)耐药率较高。研究结果表明,不同动物源细菌临床耐药性表型严重程度有所不同,与此同时,MALDI-TOF MS技术可以同时实现对动物源大肠杆菌和肠球菌的快速鉴定,值得在动物源细菌耐药性检测领域推广应用。     

肠球菌厌氧菌株感染导致犊牛腹泻的诊治报告

<正>2016年3月上旬,山西省晋中市某奶牛场新生犊牛先后发病,症状主要为持续腹泻、白色水便,诊断为屎肠球菌和粪肠球菌厌氧菌株感染引起的肠炎,经治疗取得了良好的效果,现报道如下。1发病情况山西省晋中市某奶牛场饲养奶牛500多头,其中的20多头犊牛于2016年3月上旬出现持续性腹泻等肠炎症状。奶牛场主人用氟哌酸、多酶片和肠道保健性药物治疗发病犊牛5~7 d,无效,有8头犊牛陆     

五味中草药对大肠杆菌生物膜形成的影响

生物膜是细菌分泌的多糖、纤维蛋白、核酸、磷脂、脂质蛋白等含水聚合性基质构成,膜内细菌有很强的耐药性,给临床治疗带来很大困难,本试验利用96孔微板法研究苦豆子、金银花、黄连、连翘、夏枯草5味中草药对大肠杆菌生物膜形成的影响,为临床上治疗大肠杆菌引起犊牛腹泻病提供新的理论依据。结果显示:随药物浓度的升高,黄连、苦豆子、金银花和连翘在抑制细菌生长的同时,也抑制细菌生物膜的形成;而夏枯草在抑制细菌生长的同时,细菌生物膜的生长呈现增强的趋势。     

新疆犊牛腹泻病病原菌的分离鉴定和药敏试验

犊牛腹泻多是1月龄以内的犊牛出现一种以消化不良、腹泻为主要症状的消化道疾病,是造成犊牛死亡的主要疾病之一.本试验选取新疆4个地方犊牛腹泻的粪便69份,进行细菌分离鉴定得到:大肠杆菌99株,肠链球菌33株,肠球菌23株,蜡样芽孢杆菌20株,沙门菌3株,克雷伯菌3株,蜡样芽孢杆菌1株及末鉴定菌株10株.分别选取庆大霉素,头孢唑啉、呋喃妥因、磺胺异(哑)唑、氨苄西林、奥复星、红霉素、吉他霉素、恩诺沙星共9种抗生素对其进行药敏试验.药敏试验结果表明,头孢唑啉、磺胺异(哑)唑、恩诺沙星、呋喃妥因对所选分离菌表现高度敏感;吉他霉素、红霉素分离菌株都对所选分离菌表现低敏.     

湖南省猪源肠球菌的分离鉴定

为了从猪粪便中分离出肠球菌,采用6.5%NaCl pH 9.6 TSB和麦康凯血平板两种方法分别对80个健康猪源样品和53个流行性腹泻猪源样品进行检测。结果显示,共分离出115株肠球菌,其中健康猪源肠球菌72株,包括粪肠球菌2株,屎肠球菌30株,其他肠球菌40株,检测率为90%;从流行性腹泻中共分离到43株肠球菌,其中粪肠球菌9株,屎肠球菌29株,其他肠球菌5株,检出率为81.1%,前者方法中其他肠球菌的检出率比较高,后者方法屎肠球菌的检出率比较高。两种方法各有侧重,为分离不同菌种的肠球菌提供依据。     

鸡源气载大肠杆菌生物膜形成与耐药相关性研究

为了探讨鸡舍环境中大肠杆菌生物膜形成与耐药性及消毒剂抗性之间的关系,试验采用96孔微量板法对鸡舍空气中分离鉴定的114株大肠杆菌测定其体外生物膜的形成能力和耐药情况。结果表明:114株气载大肠杆菌生物膜阳性率为34.21%,以弱阳性为主;形成生物膜的菌株呈现多重耐药性,生物膜阳性菌株对β-内酰胺类、氨基糖苷类药物的耐药率均高于阴性菌株,阳性菌株的消毒剂耐药性也高于阴性菌株。说明气载大肠杆菌生物膜形成和β-内酰胺类、氨基糖苷类药物耐药率及消毒剂的耐药性具有相关性。     

牦牛粪便中乳酸菌的分离与鉴定

为了解青海省共和县牦牛肠道内益生菌的分布种类,筛选出能够抑制犊牛腹泻的益生菌株,采集20份健康牦牛的粪便样品,对粪便中乳酸菌进行分离和纯化,再结合形态学、生化试验及分子生物学方法鉴定。结果表明,从牦牛粪便中成功分离出7株乳酸菌,包括罗伊氏乳杆菌、植物乳杆菌、保加利亚乳杆菌、乳酸乳球菌、坚强肠球菌、海氏肠球菌和屎肠球菌各1株。本研究分离的7株乳酸菌,为后期抗牦牛腹泻益生菌产品的研究奠定了基础。     

北京地区腹泻犬、健康犬粪便粪肠球菌耐药性、毒力基因及多位点序列分型研究

为分析分离自北京地区腹泻犬、健康犬粪便的粪肠球菌的耐药性,研究2种犬粪便来源优势分子型粪肠球菌重要毒力基因携带情况,在中国农业大学教学动物医院收集犬粪便,并分离得到腹泻犬粪便源粪肠球菌45株,健康犬粪便源粪肠球菌32株,采用琼脂稀释法测定分离菌株对12种抗生素的最小抑菌浓度,用多位点序列分型(MLST)技术进行分子分型,并利用PCR方法检测优势分子型粪肠球菌5种不同毒力基因携带情况。结果显示,腹泻犬源和健康犬源粪肠球菌对四环素、多西环素、米诺环素、红霉素、利福平耐药率较高。腹泻犬源分离株对氯霉素、氨苄西林、阿莫西林克拉维酸、呋喃妥因耐药率较低,集中于8.9%～17.8%,对万古霉素不耐药;健康犬源分离株对青霉素、呋喃妥因耐药率较低,分别为4.8%和14.3%,对氨苄西林、阿莫西林克拉维酸、万古霉素不耐药。45株腹泻犬源粪肠球菌共发现15种序列型(ST),优势ST为ST116、ST16、ST179,32株健康犬源粪肠球菌发现18种ST,优势ST为ST16和ST27,2种来源优势ST粪肠球菌agg、gelE、cylB、esp、efaAs毒力基因检出率差异不显著(P0.05)。表明北京地区腹泻犬、健康犬肠道粪肠球菌多重耐药现象严重,需加强抗生素使用的监控和管理;腹泻犬、健康犬肠道粪肠球菌毒力基因携带率差异不显著,都具有向人传播致病性粪肠球菌的风险,兽医临床医护人员和宠物犬饲养人应注意防护。     

2022年北京市宠物源细菌耐药性监测浅析

为了解北京市宠物源细菌的抗菌药物耐药情况,2022年,笔者对北京市四个城区的四家宠物医院的犬、猫共计50份样本的肛拭子进行了研究。试验对样品中的大肠杆菌和肠球菌首先进行了分离培养和质谱鉴定,然后采用微量肉汤稀释法分析分离菌株的耐药表型。结果共分离出大肠杆菌25株、肠球菌25株（屎肠球菌14株、粪肠球菌11株）。大肠杆菌耐药率最高的2种抗菌药为四环素和氨苄西林,多重耐药菌占44%;肠球菌耐药情况较严重,粪肠球菌耐药率最高的抗菌药物为磺胺异噁唑,屎肠球菌耐药率最高的抗菌药物为磺胺异噁唑、头孢西丁和红霉素,二者多重耐药菌占分离株总数的100%。综上,北京地区宠物源大肠杆菌、肠球菌的耐药情况较为严峻,且多重耐药现象突出,需要加强对宠物抗菌药使用的监督与管理。     

用96孔微量板代替小八角瓶培养BTC测定山羊痘细胞弱毒TCID50的试验

用96孔微量板代替小八角瓶培养犊牛睾丸细胞(BTC)测定山羊痘细胞弱毒的TCID50。试验结果表明,通过对2种方法比较得出96孔微量板检测山羊痘细胞弱毒TCID50比八角瓶法具有操作简单、重复性好、容易观察等优点。     

利用RFLP分型方法鉴定牛源性链球菌和肠球菌

为分离及种属鉴定引起牛乳腺炎相关的链球菌和肠球菌,本研究于兰州及周边地区采集疑似奶牛乳腺炎乳样382份,通过THB(Todd-Hewitt Broth)固体选择培养基初步分离到67株疑似链球菌或疑似肠球菌。参照已发表文献合成链球菌属16S r RNA和16S~23S r RNA间隔区基因引物序列,扩增分离菌株16S~23S r RNA间隔区序列,产物分别利用AluⅠ和RsaⅠ单酶切消化,并以参考菌株的16S~23S r RNA酶切图谱为参考,对分离株进行限制性片段多态性(RFLP)分类分析;再选取各RFLP类群的任一菌株,扩增其16S r RNA基因并测序,并经NCBI核酸数据库进行比对,结果显示67株疑似链球菌中有53株为粪肠球菌(79.1%)、3株为屎肠球菌(4.5%)、3株为肠道肠球菌(4.5%)、8株为无乳链球菌(11.9%)。结果表明肠球菌属细菌(粪肠球菌、肠道肠球菌、屎肠球菌)与兰州市及周边地区奶牛乳腺炎的发病紧密相关,肠球菌属细菌与链球菌属细菌16S r RNA基因同源性很高,但可以通过分子生物学方法准确区分。     

江淮地区猪链球菌和肠球菌分离株的鉴定、分型及药物敏感性分析

为了解江淮地区猪链球菌(SS)和肠球菌分离株的血清型或基因型分布特征及临床耐药性,本研究对江淮地区临床病例196株分离菌进行SS与肠球菌的鉴定,采用PCR方法进行SS及其1、2、7、9血清型和mrp、ef、sly毒力基因型鉴定;脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析SS和肠球菌基因型;K-B法测定其药物敏感性。结果显示,在196株分离菌中,鉴定出112株SS,40株肠球菌。血清型2型SS 44株(39.3%)为优势血清型,ef^-/mrp^-/sly^-型SS 36株(32.1%)为优势毒力基因型,Ps28 18株(16.1%)和Ps27 14株(12.5%)为优势PFGE基因型。肠球菌中屎肠球菌21株(52.5%)为优势菌,Pe12 9株(22.5%)和Pe7 7株(17.5%)为肠球菌优势PFGE基因型。SS和肠球菌对20种药物均表现出不同程度的耐药,耐8种以上药物的菌株数分别占85.7%(96/112)和95%(38/40)。结果表明,江淮地区SS和肠球菌种型复杂,已经成为引起猪细菌性疾病的重要致病菌。分离菌株PFGE基因型均呈多态性,在传播过程中可能存在遗传变异。SS PFGE基因型与血清型、毒力基因型不呈现相关性。菌株耐药现象严重,多重耐药普遍,且耐药谱越来越广。本研究为江淮地区SS和肠球菌的分子流行病学研究及相关疫病防控提供科学依据。     

河南省濮阳市犊牛腹泻大肠杆菌分离鉴定及生物学特性分析

为了解河南省濮阳市致犊牛腹泻大肠杆菌的致病性、血清型、生物被膜形成能力及耐药性等生物学特性,对2018—2020年采集的243份腹泻犊牛肛拭子以及粪便、肝脏等病料样品进行大肠杆菌分离鉴定,采用人工感染小鼠试验、玻板凝集试验以及结晶紫微孔板法和K-B药敏纸片法,对分离的致病性大肠杆菌进行相关特性检测。结果显示：从243份病料样品中分离到87株致病性大肠杆菌,致病性大肠杆菌分离率为35.8%（87/243）;分离的致病性大肠杆菌分属于14种血清型,其中O101（18.4%）、O38（17.2%）和O142（14.9%）为优势血清型;分离的致病性大肠杆菌中,被膜形成能力强的24株（26.6%）,中等的34株（43.6%）,弱的17株（19.5%）,不形成的12株（15.4%）;分离的致病性大肠杆菌对阿莫西林、氨苄西林、链霉素10种药物的耐药率较高,均在49.4%以上。结果表明：致病性大肠杆菌在濮阳市可能呈地方性流行,O101、O38、O142为犊牛源优势血清型;该地的致病性大肠杆菌外界生存能力较强,且对多种临床常用药物产生了耐药性。因此,应采取综合防控措施,科学使用敏感抗菌药物,研制优势血清型多价疫苗,加强犊牛大肠杆菌性腹泻的防控。     

犊牛腹泻病原的鉴定

<正>犊牛腹泻是新生犊牛所发生的一种急性腹泻。引起犊牛腹泻的病因很多,包括细菌、病毒、寄生虫等病原微生物以及营养因素和环境因素等。仅大肠杆菌病造成的腹泻死亡占犊牛死亡总数的50%以上。试验取腹泻病死犊牛粪便、肝脏、肠、脾脏等脏器病料,进行病原分离,对分离菌株进行生化试验、致病性试验及药敏试验,以期为犊牛细菌性腹泻病的防治提供参考依据。1材料试验动物为5日龄昆明小鼠,由河北联合大学实     

大肠杆菌FliC基因敲除后对大肠杆菌生物膜形成的影响

利用无疤痕基因敲除方法,构建大肠杆菌FliC基因敲除突变株。基因重组PCR结果显示:在重组转化体中FliC基因完全被卡那抗性基因和CcdB替代,获得Ⅰ型突变株(△1FliC);同时利用基因突变技术,对FliC基因起始密码子进行点突变,将ATG突变为AAA,再次进行基因重组后获得Ⅱ型FliC基因沉默菌株(△2FliC)。利用96孔微量板法,分别对野毒株、△1FliC和△2FliC进行生物膜表型检测,结果显示:△1FliC和△2FliC生物膜形成能力明显低于野毒株,从而为临床上大肠杆菌病的预防及疫苗的研制提供一定的理论基础。     

犊牛腹泻大肠杆菌的分离鉴定和耐药性检测

为了分析南京地区奶牛场犊牛腹泻的原因,对犊牛腹泻病料进行细菌分离培养,获得了27株细菌。本试验对这些细菌进行了培养特性、染色特性、生化特性、血清型鉴定、药敏试验和TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-9型超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）基因的检测。结果显示27株细菌均为大肠杆菌,只有1株细菌对头孢噻吩、头孢唑啉和头孢呋辛耐药,且此菌株检测出CTX-M-1型超广谱β-内酰胺酶基因。试验结果表明犊牛腹泻是由大肠杆菌引起的,犊牛腹泻大肠杆菌能产生CTX-M-1型超广谱β-内酰胺酶,导致对头孢类抗生素耐药性的发生。