草鱼出血病病毒854株的理化_生物学特性及基因组结构

草鱼出血病是我国一种十分严重的病毒性鱼病。１９７８年,中国科学院水生生物研究所第三研究室的科研人员首先报道了草鱼出血病是一种病毒性鱼病,并初步认为其病原是一种疱疹病毒（Ｈｅｒｐｓｖｉｒｕｓ）。１９８３年,陈燕新等报道了自己分离的草鱼出血病病毒形态结构...     

草鱼出血病病毒854株的纯化及其理化特性

离心技术纯化病毒。病毒粒子具双层衣壳,直径约为65nm。病毒对氯仿、乙醚、酸碱、胰蛋白酶的处理不敏感。冻融和56℃、1小时处理,毒力下降显著。-80℃、-30℃两种温度条件下保存,其毒力损失有差异。鱼用消毒剂鱼康有杀病毒作用。     

草鱼出血病病毒854株在CIK细胞系上的繁殖动态研究

采用微量细胞培养系统测定草鱼出血病病毒854株在草鱼肾脏组织细胞系(CIK)上的繁殖动态。病毒在感染后12小时滴度开始上升,24～72小时呈对数上升,84小时病毒滴度达到最高点,以后渐趋平稳。     

草鱼出血病病毒精细结构的研究

<正> Brenner和Horne发展的负染色技术已广泛用于电子显微镜下病毒精细结构的研究。我们采用这一技术对本协作组曾报道过的草鱼出血病病毒进一步做了精细结构的观察,并对观察结果进行了分析。现将我们的研究结果介绍如下。     

草鱼出血病细胞培养灭活疫苗旋转瓶法大规模生产工艺↑（*）

Ｃａｒｅｌ氏瓶静置培养草鱼ＣＩＫ细胞,细胞２～３ｄ内长成单层,细胞单层均匀而稳定;旋转瓶培养,细胞７ｄ左右长成单层,细胞单层面积大,病毒培养产量高。２种方式所培养病毒的ＴＣＩＤ５０／ｍｌ值稳定在６．０左右。０．１％福尔马林４℃条件下灭活病毒材料１７ｄ制备疫苗,疫苗性能稳定,安全性好。疫苗效力检验结果表明,注射免疫１０ｄ和浸泡免疫１０ｄ后,免疫鱼体内血清中和抗体效价分别为１０７．９±１１．０（３）和６８．５±９．９（３）,免疫保护力分别为（７７．１±８．９）％（３）和（７３．９±８．３）％（３）,与对照组相比差异显著。本研究建立了草鱼细胞培养灭活疫苗大规模生产工艺流程,进行了较大规模的疫苗生产和生产性免疫试验,免疫草鱼成活率平均达到８５％以上。     

草鱼呼肠孤病毒JX-0902株的分离和鉴定

收集江西南昌地区患典型草鱼出血病的病鱼组织,进行超薄切片电镜观察,结果显示,在脾、肾样品中发现大量病毒颗粒,病毒无囊膜,近球形,直径约70 nm,形态与已报道的草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)相似。取病鱼肌肉、内脏研磨,组织液经离心、过滤除菌后进行鱼体人工感染试验和细胞感染实验,结果发现,人工感染试验鱼出现死亡,且具有典型出血症状;组织滤液感染草鱼肾细胞系(CIK)细胞后,盲传6代未观察到典型细胞病变效应,但感染细胞固定后经超薄切片电镜观察,细胞质内有大量病毒存在,与病鱼组织切片观察到的病毒形态一致。SDS-PAGE结果进一步揭示,新分离病毒株(暂命名JX-0902)基因组由11条dsRNA组成,呈现水生呼肠孤病毒基因组典型特征,但基因组带型与GCRV 873株存在差异,而与HZ08株接近。根据GenBank上已提交的草鱼呼肠孤病毒S6序列(GQ896337)设计特异引物,以JX-0902株的cDNA作为模板,可扩增出特异性条带。基于S6序列的聚类分析结果显示,JX-0902与GCRV HZ08株、GD108株S6同源性高达98%、99%,该分离株应为草鱼呼肠孤病毒。     

草鱼出血病细胞培养灭活疫苗的研究——疫苗株的免疫原性及其有效免疫剂量的比较

本文比较了疫苗株FR—854和FR—836—w的免疫原性,及其对三寸左右草鱼种的有效免疫剂量。疫苗株FR—854和FR—836—w均有较强的免疫原性,其保护力可达70%以上。但试验结果初步证明,FR—854疫苗比FR—836—w疫苗免疫原性更强。经统计分析,FR—854疫苗的免疫保护力可达88.9±12.0（6）%,血清中和抗体效价为160.5±58.9（6）;而FR-838-W疫苗分别只有71.3±14.2（6）%、88.3±26.2（6）;二者有显著的差异（0.05>P>0.01）。注射免疫三寸左右的草鱼种,FR—854的免疫剂量在3—5×10^4.5TCID0/尾左右,FR—836—w在3—5×107.5TCID₅₀/尾左右,其免疫保护力可达80%左右,同时我们测得ER—854的半数免疫量为10^5.1TCID₅₀/ml。     

草鱼吻端组织细胞株ZC—7901培养草鱼出血病病毒的研究初报

<正> 草鱼出血病是我国淡水渔业中危害最严重的鱼病之一。国内鱼病工作者从七十年代初开始对该病进行研究,已证实该病的病原是病毒。利用可长期离体传代培养和生物学特性稳定而均一的鱼类细胞株培养病毒,是鱼类病毒学研究的重要手段,将有助于对病原和防治技术作深入的研究。我们于1979年培养成功草鱼吻端组织细胞株ZC—7901(以下简称ZC—7901)。经试验,该株细胞对草鱼出血病病毒具有敏感性。本文报道ZC—7901株细胞培养草鱼出血病病毒的初步结果。     

应用Dot_ELISA技术检测草鱼出血病病毒的研究

报道了斑点免疫吸附ＥＬＩＳＡ（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）快速检测草鱼出血病病毒（ＧＣＨＶ）的方法以及对提纯病毒、染毒细胞内病毒和病鱼组织的检测结果，并对该方法的灵敏度与ＳＰＡ－ＣｏＡ和常规ＥＬＩＳＡ法进行了系统的比较。结果表明，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检出ＧＣＨＶ的最低含量为３ｐｇ，该灵敏度比ＳＰＡ－ＣｏＡ和常规ＥＬＩＳＡ法分别提高１０倍和２０倍，而且快速易行，是目前检测ＧＣＨＶ最为有效的方法，并可在草鱼出血病临床诊断和病毒疫苗质量鉴定等方面得到应用。     

草鱼出血病病毒保存与人工感染

草鱼是一种优质淡水鱼类，它具有生长快，产量高，经济效益大的优点．但是草鱼极易患病，难养，成活率低，尤以草鱼出血病危害最大。草鱼出血病病原，属呼肠弧病毒。至今未有特效药物防治。据报导近年来采用土法疫苗进行人工免疫，已取得较好的效果。为解决草鱼出血病工厂化生产所需要的毒种，于1981年7月-10月，1982年8月--10月和1983年8月在草鱼出血病发病季节，     

应用Dot—ELISA技术检测草鱼出血病病毒的研究

报道了斑点免疫吸附ＥＬＩＳＡ快速检测草鱼出血病病毒的方法以及提纯病毒、染毒细胞内病毒和病鱼组织的检测结果，并对该方法的灵敏度与ＳＰＡ－ＣｏＡ和常规ＥＬＩＳＡ法进行了系统的比较。     

草鱼出血病病毒高滴度培养方法的研究

本文对草鱼出血病病毒 854株高滴价培养的几种方法进行了的研究 ,现将结果报告如下 :材料和方法1　细胞 :草鱼肾脏组织细胞系 (ＣＩＫ) (左文功 ,1986 ) ,培养基为含 10 %小牛血清的ＣＡＳ。2　病毒 :草鱼出血病病毒 854株 ,维持液为 2 %小牛血清的ＣＡＳ。3　高滴价培养方法3 1　用 854株病毒接种刚生长成单层的ＣＩＫ细胞系 (区别于致密单层细胞 ,下同 )。病毒接种量为维持液量的 1/ 10 ,2 8℃吸附 6 0分钟后 ,添加维持液 ,2 8℃培养 ,观察细胞病变过程 ,测定病毒的ＴＣＩＤ50 /ｍｌ。3 2　精氨酸处理　在接种病毒时 ,向病毒液中加入浓…     

草鱼出血病病毒854株基因组SDS—PAGE分析及其核酸类型鉴定

十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果表明:草鱼出血病病毒854株基因组由11个分段的核酸片段组成,总分子量约为14.46×10~6道尔顿。其中最大片段的分子量约为2.45×10~6道尔顿;最小片段的分子量约为0.38×10~6道尔顿。其基因组核酸片段电泳图谱具有病毒株的特异性.核酸酶敏感性试验表明该病毒的核酸为RNA。     

两株草鱼呼肠孤病毒江西株的分离与鉴定

对从江西省南昌县莲塘镇的患病草鱼鱼种池塘采集到草鱼出血病疑似病样材料分离出的两株病毒株进行了鉴定。结果显示:用除菌过滤后的患病鱼肝脏、脾脏、肾脏组织浆滤液腹腔注射感染8～10 cm健康草鱼鱼种,5 d后试验鱼发病,可复制出自然发病症状,死亡率达50%以上,对照组未有死亡。用病样滤液接种草鱼肾细胞系(CIK),可产生细胞病变效应(CPE),病毒的TCID50分别为10-8.3/0.1 mL和10-8.0/0.1 mL。理化特性研究结果显示:氯仿、乙醚处理组病毒的感染力和对照组相比变化不显著。病毒基因组RT-PCR反应可扩增出目的片段,序列测定与分析结果表明,其与GenBank中GCRV(登录号为AF403392,AF239175)相应序列的同源性达99%以上。