紫花苜蓿细胞质雄性不育系和保持系SCAR标记的鉴定研究

本研究通过已获得细胞质雄性不育系材料MS-GN-1A和保持系材料MS-GN-1B筛选与紫花苜蓿细胞质不育恢复基因高度连锁的分子标记并转化为SCAR特异标记,经鉴定分析发现该标记的重复性好,而且稳定,对紫花苜蓿“三系”配套中不育系种子生产鉴定提供研究基础。实验应用100条ISSR引物在紫花苜蓿线粒体基因组水平进行筛选,UBC842、UBS864引物在紫花苜蓿不育系及其同型保持系间显示出特异性片段,经反复验证,其差异条带均稳定出现,条带大小分别为457 bp和645 bp。对已获得的差异条带进行胶回收连接克隆载体后测序并转化为SCAR特异鉴定标记,以两对特异性引物对新培育的4组紫花苜蓿杂交种的不育系母本和同型保持系父本进行鉴定分析,发现该SCAR标记的重复性稳定。本研究通过ISSR标记对紫花苜蓿的不育系与保持系进行分析,将得到的差异片段克隆测序后转化为SCAR特异标记,该标记可以作为紫花苜蓿不育系种子纯度分析的候选标记,实际应用于不育系种子纯度的鉴定。     

柱花草分子标记的研究进展

综述近年来RFLP、RAPD、SSR及AFLP等几种分子标记在柱花草育种上的应用，以及分子标记在辅助育种和抗病基因定位方向的研究进展。     

两个SCAR标记与京海Ⅰ号黄鸡体重的相关性研究

通过对两个RAPD条带(1660条带和2326条带)的克隆、测序,根据条带序列设计两对SCAR引物,对京海Ⅰ号黄鸡基因组进行扩增。结果表明:S1(1660条带)与S2(2326条带)标记在京海Ⅰ号黄鸡中出现的频率分别为40%和48%。无S1标记个体12周龄、18周龄和43周龄体重显著高于有S1标记个体,有S2标记个体在4周龄、12周龄、18周龄和43周龄体重显著高于无S2标记个体。     

苜蓿褐斑病抗性相关分子标记验证

选取4个具有不同遗传背景的紫花苜蓿(Medicago sativa L.)国内外推广品种为材料,通过人工接种试验每个品种筛选苜蓿褐斑病高抗、高感单株各10株,运用ISSR,AFLP和SRAP分子标记技术对标记适用性进行验证,以期筛选准确性高的分子标记,提高试验的重复性和稳定性。结果表明:4个品种的总体病情指数和抗病性成反比,抗病性大小依次为:赛迪>新疆大叶>中苜一号>龙牧801;且筛选到的高抗、高感单株的抗病性与4个品种的总体抗病性基本相符;适用性高的标记有感病标记ISSR22_S450、抗病标记SRAPM3E3_R169和ISSR20_R750,分子标记检测的符合率在75%～85%之间,可用于苜蓿褐斑病的标记辅助选择育种工作。适用性中等的标记有感病标记IS-SR6_S640和AFLP38_S264,抗病标记AFLP1_R206,AFLP16_R185和ISSR834_R450均在1个品种中显示出差异不显著,仍需在更多品种中验证;适用性差的标记有感病标记ISSR11_S750和ISSR22_S640,不能作为检测苜蓿褐斑病的可靠指标。     

柱花草EST-SSR标记在山蚂蝗中的可转移性与应用

为鉴定山蚂蝗(Desmodium)种质资源的遗传背景及亲缘关系,选取92对柱花草(Stylosanthes spp.)EST-SSR标记和来自8个种的16份山蚂蝗材料,分析柱花草EST-SSR标记在山蚂蝗中的通用性,并对8种山蚂蝗进行亲缘关系分析。研究结果表明,柱花草EST-SSR标记在8种山蚂蝗种的可转移率为63.04%~73.91%,其中50对可在全部8种山蚂蝗中进行有效扩增。16对多态性EST-SSR标记在16份山蚂蝗种质中共检测到等位基因35个,平均2.19个。聚类分析表明,16份山蚂蝗种质可分为5类,与形态学划分结果相似。可见,柱花草EST-SSR标记在山蚂蝗上具有较高的可转移性,可应用于山蚂蝗种质资源评价及亲缘关系研究。     

甘肃省小麦条锈病主要流行小种的RAPD分析及Su11-4小种SCAR标记建立

本研究应用RAPD标记技术对甘肃省小麦条锈菌主要流行的8个生理小种进行多态性标记分析,旨在寻找小麦条锈菌不同生理小种的特异性标记,共选用220条10碱基随机引物进行筛选,其中有147条可得到稳定清晰的扩增条带。研究结果显示,通过使用147条引物对甘肃省流行的8个条锈菌的生理小种进行RAPD分析,发现各致病小种间遗传变异丰富,其中引物S301在条中33号中扩增得到约507bp的特异条带;引物S39在条中32扩增得到长度约183bp的特异条带;引物S36在Hybrid46-8扩增得到约510bp的特异条带;引物S2140在Su11-4扩增得到约317bp的特异条带。另外,本研究还对扩增得到的特异片段进行回收并进行测序分析,其中依据小麦条锈菌生理小种Su11-4特异条带的测序结果设计特异引物,成功将其转化为对Su11-4小种特异的SCAR标记,这对不同条锈菌生理小种的快速准确检测具有重要意义。     

基于SSR标记的柱花草种质资源遗传多样性与群体结构分析

种质资源遗传多样性和群体结构分析为复杂性状关联分析提供基础。本研究通过SSR分子标记技术,对68份柱花草(Stylosanthes spp.)种质资源的遗传多样性与群体结构进行分析。结果表明,30个多态性SSR标记在68份柱花草种质中共检测到146个等位基因,平均为4.867个,每个SSR标记的Shannon信息指数(I)和多态性信息含量(PIC)分别为0.676～1.690和0.363～0.764,平均为1.195和0.577。根据SSR标记数据进行遗传多样性分析,可将68份柱花草种质资源分为6类,群体结构分析中在ΔK达到最大时,K=6,因此将68份柱花草材料划分为6个群体,与遗传多样性分析结果基本一致。本研究将为柱花草遗传背景研究、种质资源评价和优良种质筛选提供依据。     

柱花草高产栽培技术的研究

采用随机区组试验,以不同播种方式、不同刈割方式及不同施肥水平对柱花草Styiosanthes guianensis的分枝数及产量的影响进行了分析。结果表明:随2次刈割时间间隔的增长,柱花草分枝数减少。在中等肥力处理条件下,适宜播种方式为撒播15 kg/hm2,2次刈割时间间隔为60 d,施肥模式为:基肥为复合肥600 kg/hm2,农家肥22 500 kg/hm2,不使用追肥,此时,投入产出比最低,经济可行。     

柱花草叶绿素提取方法的研究

采用几种有机试剂提取液在暗处直接浸提柱花草叶片叶绿素,结果表明,用80％丙酮溶液提取效果较好．操作简单,效率高,适合科研上大批量样品测定,与目前报道的混合液提取法效果最好的结论有些不同。通过测定丙酮溶液在提取过程中随时间递增对比看出叶绿素溶液十分稳定。     

SCAR分子标记对水貂食毛症遗传病因的初步研究

本研究利用序列特异性扩增(SCAR)技术对健康和食毛水貂进行遗传分析,旨在从分子水平探讨水貂食毛症的发病原因.首先从126个随机引物中筛选出4个重复性好的标记引物,通过引物A20和S139的扩增在两群体中找到差异标记(A20-1000,S139-400),对其进行克隆、测序,并根据测序结果设计2对SCAR引物,回到原样本群体中扩增验证.结果,SA20-757在食毛和健康水貂群体的分布频率分别为86.88％和27.41％,差异极显著(P＜0.001);MS139-230在食毛和健康水貂群体的分布频率分别为94.21％和39.38％,差异极显著(P＜0.001).SA20-757与MS139-230联合分析表明,特异性条带在患病水貂群体的分布频率高达95.36％,均比单个SCAR特异引物的扩增比例要高.结果提示,SA20-757与MS139-230联合诊断分析,可以很好的区分健康与食毛水貂群体,可初步作为水貂食毛症早期诊断的分子生物学手段,为进一步研究水貂食毛症奠定基础.     

柱花草硼、钼微肥施用效果的研究

在热带地区土壤中硼、钼微量元素缺乏较为普遍.采用田间试验的方法,针对柱花草(Stylosanthes guianensis)喷施硼、钼微肥效果进行研究.结果表明,在土壤缺硼、钼的情况下,适量喷施钼、硼肥均能增加柱花草的产量.其中喷施钼增产效果较明显,其次为硼肥.与对照相比较,喷施钼肥和硼肥柱花草产量分别增加了2 475...     

柱花草浸出液对荔枝幼苗生长的影响

为研究柱花草(Stylosanthes guianensis)浸出液对荔枝(Litchi chinensis)幼苗生长的影响,试验以4种不同浓度的柱花草浸出液根施荔枝幼苗,观测荔枝幼苗生长的情况。结果表明：4种浓度柱花草浸出液对荔枝幼苗生长均有促进作用;柱花草浸出液处理可使荔枝植株增高,叶片数增多,叶面积增大,叶片叶绿素相对含量(SPAD)和全N、全P和全K的含量增加;浓度为25.0 mg/mL的柱花草浸出液处理效果最佳。     

超声波处理柱花草种子的生物学效应研究

采用超声波对柱花草Stylosanthes guiancnsis种子进行不同时间的处理,初步探讨超声波对柱花草种子的生物学效应。结果表明,适当时间的超声波处理对柱花草种子的发芽势、发芽率、幼苗株高、根长及活力指数均具有促进作用,以10 min的处理促长效果较理想。     

柱花草浸提液对柑桔幼苗生长的影响

以不同浓度的柱花草（Stylosanthes guianensis）水浸提液根施柑桔(Citrus reticulate Blanco)幼苗,观测柑桔幼苗生长的情况。结果表明,较高浓度的柱花草浸提液对柑桔幼苗生长均有促进作用;柱花草浸提液处理使柑桔植株增高,叶片增多,叶面积增大,生物量增加,植株全磷和全钾量增加。试验结果表明,100 mg.mL-1的柱花草浸提液处理对柑桔幼苗生长的促进作用最佳。     

柱花草总RNA提取方法比较

以热研2号柱花草（Stylosanthes guianensis Reyan No.2）叶片为材料,利用紫外分光光度计和凝胶电泳法比较SDS 酚抽提法、CTAB法、Trizol试剂盒和柱式植物RNAout试剂盒法提取柱花草总RNA的质量和纯度。结果表明,改良CTAB法和柱式植物RNAout试剂盒法提取的RNA的OD260 nm/OD280 nm分别是1.85和1.93,OD260 nm/OD230 nm均大于2.0。凝胶电泳结果表明,改良CTAB法及柱式植物RNAout试剂盒法均有28S rRNA和18S rRNA两条清晰的条带,且无降解。其他两种方法获得的RNA品质较差,有降解和弥散现象。将改良CTAB法和柱式植物RNAout试剂盒法提取的RNA逆转录成cDNA,cDNA能扩增出一条清晰的β actin基因片段,进一步证明了改良CTAB法和柱式植物RNAout试剂盒法提取的总RNA具有很高的纯度,其中柱式植物RNAout试剂盒法的效果好于改良CTAB法。     

亚热带高湿地区柱花草品种综合性状评价

2005年,在云南海拔1600 m的亚热带高湿地区,对12个柱花草品种进行了引种试验并用灰色关联分析法对牧草的适应性、地上生物量、茎叶比、青干比、分枝数、株高等指标进行综合评价。结果表明:柱花草是适合亚热带高湿地区栽培的优良草种,其中CIAT11362柱花草综合性能最优,可作为当地的推广品种。此外,R93柱花草、热研13号柱花草、GC1579柱花草、GC1463柱花草、热研5号柱花草、GC1581柱花草的综合性能也显著高于其他品种,应根据当地的不同利用方式选择使用。     

广西柱花草的研究及开发利用

柱花草作为优良的热带豆科牧草,在广西累积推广种植面积达8万hm2,产量达32～61t／hm2,营养价值高,粗蛋白含量14％～18％。广西对柱花草主要在品种引进选育、营养价值、混播、间种套种及草粉饲喂猪、鹅、鸡等畜禽的饲用价值等几个方面开展了近20多年的研究。该文对这些年广西在柱花草上取得的研究成果、研究现状及开发利用情况进行汇总,以期为柱花草的利用提供依据,促进柱花草产业的快速健康发展。     

柱花草愈伤组织培养与植株再生(简报)

对热研2号柱花草无菌实生苗的胚轴与叶片切段进行愈伤组织培养研究。结果表明,MS NAA 2 mg/L BA 0.5 mg/L及MS 2,4-D 3 mg/L BA 0.3~0.5 mg/L CH 200 mg/L对叶片切段诱导效果最好。而下胚轴愈伤组织的诱导以MS NAA 3 mg/L BA 0.1~0.3 mg/L和MS 2,4-D 3 mg/L BA 0.5 mg/L最优。愈伤组织在MS BA 2.5 mg/L NAA 0.1 mg/L进行分化培养,可实现高频植株再生。最适生根培养基为1/2MS 1.0mg/L IBA 0.5 mg/L IAA,生根率可达95.84%。     

干热河谷退化山地柱花草品种(系)比较试验

2007-2009年在元谋干热河谷退化山地对12个柱花草品种(系)进行比较试验研究。观测研究牧草物候期、地上生物量、叶茎比、青干比、分枝数及株高、营养成分等生产性状和经济指标。试验结果表明,CIAT11362柱花草是综合性能较优的材料,年均产量、旱季产量和3年保存率最高,是较耐旱的牧草,适应干旱和半干旱地区种植,年均干草产量为20.31 t/hm²,旱季干草产量为7.17 t/hm²,3年植株的保存率为87.5%。GC1579柱花草和热研5号柱花草也是综合性状较优种质,可作为干热河谷地区推广的牧草。90089柱花草和西卡柱花草综合性能虽不是特别突出,但各有不可忽视的优点,在不同性能要求下是理想的材料。     

柱花草根系分泌物对缺磷胁迫的响应分析

为探索柱花草(Stylosanthes guianensis)根系分泌物对缺磷胁迫的响应,本研究以‘热研5号’柱花草为材料,通过水培试验,分析了正常供磷(+P)和缺磷(-P)处理对柱花草生长及根系分泌物的影响。结果表明,相对于+P处理,-P处理显著降低了柱花草植株干重和全磷含量。随后,代谢组共检测到101个根系分泌代谢物,可被分为有机酸、氨基酸、类黄酮、糖及醇类等七类,其中-P与+P处理间的差异累积代谢物25个。属于有机酸的咖啡酸、1-氨基环丙烷-1-羧酸和α-酮戊二酸在-P处理下的分泌量显著增加,且其中α-酮戊二酸对磷酸铝具有较强的溶解能力。此外,荧光定量PCR分析发现,柱花草根系中参与α-酮戊二酸合成的柠檬酸脱氢酶基因SgICDH在-P处理下的表达量显著增加。因此,柱花草根系通过上调SgICDH基因的表达,促进α-酮戊二酸的合成与分泌,从而增强对难溶性磷的活化利用,以适应缺磷胁迫。