苜蓿植株再生体系研究进展

苜蓿（Medicago sativa）为世界上分布最广的一种牧草,享有“牧草之王”的美誉。本研究结合国内外苜蓿再生体系的研究动态,从再生途径、品种基因型、外植体、基本培养基、生长调节物质及其他添加物的应用6个方面阐述了苜蓿再生体系的研究进展,并对目前存在的问题及未来的发展前景加以探讨,以期为苜蓿再生体系的机理和基因工程方面的研究提供一定的参考。     

天蓝苜蓿组织培养及再生体系的研究

以野生天蓝苜蓿种子发育5～7d无菌苗的子叶、下胚轴和种子苗叶片为外植体，对其愈伤组织诱导及其分化的基本培齐与外源激素组合和浓度配比进行试验。结果表明：对子叶、下胚轴和叶片愈伤组织诱导最适宜的基础培养基分别是MS、B5和SH；激素的种类及其浓度配比对于愈伤组织的诱导因不同的外植体有很大的差异。其中，子叶、下胚轴以MS＋NAA（0．5～1．0mg／L）＋6-BA（0．7mg／L）效果较好，叶片以SH＋NAA（0.5—1．0mg／L）＋2，4-D（1.5～5mg／L）十6胡A（0．7mg／L）较好，少量下胚轴在MS＋NAA（0．5mg／L）＋6-BA（0．7mg／L）和MS＋NAA（0．5mg／L）＋KT（0．5mg／L）的培养基中直接分化出胚状体，并成功发育成植株。在培养基Whb5上，子叶、下胚轴和叶片的分化都得到了很好的效果，分化率分别为43％、57％、40％，15～30d后都能再生植株。     

天蓝苜蓿组织培养及再生体系的研究

以野生天蓝苜蓿种子发育5～7d无菌苗的子叶、下胚轴和种子苗叶片为外植体,对其愈伤组织诱导及其分化的基本培养与外源激素组合和浓度配比进行试验。结果表明:对子叶、下胚轴和叶片愈伤组织诱导最适宜的基础培养基分别是MS、B5和SH;激素的种类及其浓度配比对于愈伤组织的诱导因不同的外植体有很大的差异。其中,子叶、下胚轴以MS+NAA(0.5～1.0 mg/L)+6-BA(0.7mg/L)效果较好,叶片以SH+NAA(0.5～1.0mg/L)+2,4-D(1.5～5 mg/L)+6-BA(0.7mg/L)较好,少量下胚轴在MS+NAA(0.5mg/L)+6-BA(0.7mg/L)和MS+NAA(0.5mg/L)+KT(0.5 mg/L)的培养基中直接分化出胚状体,并成功发育成植株。在培养基Whb5上,子叶、下胚轴和叶片的分化都得到了很好的效果,分化率分别为43%、57%、40%,15～30d后都能再生植株。     

茉莉酸甲酯对盐胁迫下偏关苜蓿种子萌发和幼苗生长的影响

为明确外源茉莉酸甲酯（methyl jasmonate,MeJA）对紫花苜蓿苗期盐害的缓解效应,本研究以偏关苜蓿（Medicago sativa ‘Pianguan’）为供试材料,采用发芽试验的方法,探讨不同施用浓度（0.025,0.25,2.5,25和250 μmol·L^-1）和浸泡时间（3,6,9,12和24 h）的MeJA处理对盐胁迫（NaCl）下偏关苜蓿的发芽率（germination percentage,GP）、发芽指数（germination index,GI）、幼苗活力指数（seedling vigor index,SVI）、平均发芽时间（mean germination time,MGT）、相对含水量（relative water content,RWC）、根长（root length,RL）和芽长（shoot length,SL）的影响,并利用隶属函数法进行多指标综合性评价。结果表明：在150 mmol·L^-1 NaCl胁迫下,MeJA预处理种子能不同程度地缓解盐害,而且浓度为25 μmol·L^-1的MeJA浸种3 h为最佳处理组合,对盐胁迫下偏关苜蓿种子萌发的促进效果最好,其显著提高了种子的GP,GI,SVI和SL（P<0.05）,但是对MGT,RWC和RL影响不显著。本研究为MeJA在苜蓿幼苗阶段耐逆栽培中的合理使用提供参考和指导。     

草坪草植株再生体系研究进展

对草坪草在愈伤组织培养、花药离体培养、悬浮细胞培养以及原生质体培养等方面的研究进展进行综述。分析目前该领域研究出现的问题,并展望了草坪草离体培养的发展趋势。     

干旱胁迫下偏关苜蓿显微结构响应特征研究

以山西地方优良种质--偏关苜蓿(Medicago sativa‘Pianguan’)为材料,采用20% PEG模拟干旱胁迫0, 24, 48, 72 h后,观测根、茎、叶各器官显微结构特征参数。利用单位干旱时间内各显微结构参数相对响应关系及干旱时间与干旱指标实测值关系,获取能够在显微结构尺度上定量评价植物体各组织对干旱胁迫响应关系的干旱指数:干旱响应率(RR)和干旱响应度(RD),旨在为干旱胁迫与细胞响应的其他相关研究提供方法学参考。结果表明:叶片海绵组织厚度和栅栏组织厚度、茎韧皮部厚度和筛管直径及髓腔直径、根直径和表皮厚度分别对干旱胁迫有相对较高的响应特征,其中叶片海绵组织厚度、栅栏组织厚度和茎髓腔直径的响应特征最高。综合响应率和响应度分析得出各器官对PEG的耐受性依次为根> 茎> 叶。     

红三叶组织培养及再生植株

本文采用ＭＳ，Ｂ５和ＰＣ一Ｌ２作为基本培养基，在不同激素组合条件下对红三叶（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍｐｒａｔｅｎｓｅ）子叶及下胚轴进行组织培养。在ＭＳ，Ｂ５和ＰＣ一Ｌ２附加２ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ和０．５ｍｇ／ＬＢＡ的培养基上，子叶及下胚轴愈伤组织诱导率均在８９％以上。愈伤组织继代在Ｂ５无机盐十三倍ＭＳ有机成分＋３％蔗糖＋０．５ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ＋０．５ｍｇ／Ｌ６ＢＡ０．２ｍｇ／ＬＮＡＡ，＋１０ｍｇ／ＬＶｃ的培养基上生长良好。愈伤组织在Ｂ５附加０．１ｍｇ／Ｌ６ＢＡ＋０．２ｍｇ／ＬＩＢＡ的培养基上再生植株。下胚轴在ＭＳ附加２ｍｇ／Ｌ６ＢＡ＋１ｍｇ／ＬＮＡＡ的培养基上直接分化形成丛生苗，转入无激素ＮＳ培养基上再生根。实验表明ＶＥ，Ｖｃ，ＰＶＰ和活性碳对愈伤组织褐化有抑制作用，１０ｍｇ／ＬＶｃ抗褐化作用最好。     

苜蓿高效再生体系研究进展

作为牧草生物技术的一个重要组成部分,苜蓿Medicago sativa组织培养工作在国内外得到了大量开展.从苜蓿组织培养中外植体和培养基的选择、细胞生长调节物质的应用以及基因型的选择4个方面阐述了苜蓿高效再生体系研究现状,并对目前研究中存在的问题进行了归纳,提出了苜蓿再生体系研究的发展趋势.     

不同硒源及浓度对偏关苜蓿种子萌发及物质转化的影响

为探究不同硒源及浓度对'偏关'苜蓿(Medicago sativa'Pianguan')种子萌发及物质转化的影响,本研究以'偏关'苜蓿种子为材料,采用不同浓度亚硒酸钠(0,0.3,0.6,1.2,2.4,4.8,9.6mg·L-1)及蛋氨酸硒(0,1,5,10,20,40 mg·L-1)在人工气候培养箱中进行发芽试验....     

苜蓿花药培养再生植株染色体倍性检测研究

本试验采用流式细胞仪对苜蓿(Medicago sativa L.)F₁代杂种花药培养再生植株进行染色体倍性检测。旨在建立高效的苜蓿花药培养体系,提高苜蓿单倍体的诱导效率,寻求一种快速简便的苜蓿倍性检测方法。检测结果为流式细胞仪矩形图上清晰地检测出二倍体、三倍体、四倍体以及二倍体加四倍体的嵌合体。50株苜蓿花药再生植株中有42株四倍体(2n=4x),2n=4x与2n=2x的混合体为5株,二倍体(2n=2x)为2株,三倍体(2n=3x)为1株。本文还讨论了苜蓿花药培养体系的建立,优化,以及筛选出了适宜制作苜蓿细胞悬浮液的缓冲液(15 mmol·L^-1Tris-HCl(pH7.5);80 mmol·L^-1KCl;20 mmol.L^-1NaCl;2 mmol·L^-1EDTA-Na₂;15 mmol·L^-1β-Mercaptoethanol;0.1%(V/V)TritonX-100;0.5 mmol·L^-1Spermine·4HCl)及其流式细胞仪检测苜蓿倍性的适应性程序。     

迷你岩桐组织培养及植株再生体系建立

以迷你岩桐(Sinningia hybrida‘Isa’s Murmur’)带柄叶片为外植体,探讨了外植体的灭菌方法、不同基本培养基以及外源激素(6-BA、NAA、IBA)对愈伤组织和不定芽的诱导及增殖、生根等的影响,成功建立了迷你岩桐组织培养植株再生体系。结果表明:迷你岩桐带柄叶片在75%乙醇灭菌10 s,0.1%升汞灭菌300 s时,污染率较低(15.56%)而启动率较高(85.56%)。在MS培养基中添加2.0 mg·L^-16-BA和0.1 mg·L^-1 NAA时,愈伤组织诱导率最高(91.11%)。在1/2 MS培养基中添加2.0 mg·L^-16-BA和0.05 mg·L^-1 NAA时,不定芽诱导率为88.89%。在MS培养基中同时添加2.0 mg·L^-16-BA和0.1 mg·L^-1 NAA时,不定芽增殖效果最好,增殖倍数为2.38。1/2 MS+0.10 mg·L^-1 IBA培养基有利于生根,生根率为87.78%。腐殖土∶泥炭土∶河沙以体积比为1∶2∶2的混合基质为移栽基质时,瓶苗移栽成活率可达96.67%。本研究结果可为迷你岩桐的遗传转化体系的构建及规模化生产提供一定的理论基础和技术支撑。     

早开堇菜组织培养及植株再生体系的建立

以野生早开堇菜为材料,研究了不同外植体类型(子叶节、叶片、叶柄)和不同激素配比对其不定芽诱导、愈伤组织诱导和分化的影响,成功建立了早开堇菜组织培养植株再生体系。结果表明,1) 诱导子叶节和叶柄不定芽诱导的最适培养基为 MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA,叶片不适合作为直接诱导不定芽的外植体。2) 3种外植体均能诱导愈伤组织,子叶节愈伤组织诱导的时间最短,其次为叶柄,叶片最晚。子叶节和叶柄愈伤组织诱导的最适培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D,诱导率分别为98.3%和96.7%;叶片愈伤组织诱导的最适培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D+0.05 mg/L NAA,诱导率可达88.3%。3) 最适愈伤组织分化培养基为:MS+1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA,分化率为100%。4)不定芽增殖的最佳培养基为:MS+1.5 mg/L 6-BA+0.075 mg/L NAA,增殖率为4.68。 5)再生苗移植到添加1.0 mg/L 6-BA的1/2 MS培养基上,生根率92.3%。6)组培苗移栽到珍珠岩∶河沙∶腐殖质(1∶2∶2)的混合基质时,100%成活,且植株长势好。     

不同苜蓿品种对叶片愈伤组织诱导及植株再生的影响

以7个苜蓿品种叶片为外植体，采用3种诱导培养基、5种分化培养基，共15个组合，研究了不同品种间愈伤组织诱导及植株再生的差异。结果表明，不同苜蓿品种间植株再生率差异显著，超级13R在7个苜蓿品种中表现最佳。     

不同苜蓿品种对叶片愈伤组织诱导及植株再生的影响

以7个苜蓿品种叶片为外植体,采用3种诱导培养基、5种分化培养基,共15个组合,研究了不同品种间愈伤组织诱导及植株再生的差异。结果表明,不同苜蓿品种间植株再生率差异显著,超级13R在7个苜蓿品种中表现最佳。     

苜蓿子叶体细胞胚的诱导和植株再生(简报)

紫花苜蓿(Medicago sativa L.)是重要的豆科牧 草,全世界种植面积约3300万hm²,我国约133万 hm².苜蓿营养丰富,含粗蛋白质17%～20%,是多种畜禽喜食的优质蛋白饲料.苜蓿组织培养始于20世纪 70年代,30年来,国内外采用的外植体种类繁多,如茎 尖、叶片、茎段、幼芽、子叶、下胚轴、上胚轴、花药、花 粉、种子、胚珠、根、叶柄等.     

垂盆草组织培养高效再生体系的研究

本文以垂盆草的茎段为主要试验材料,测定了适合垂盆草生长的各种培养基中的最适浓度,包括蔗糖、BA、NAA;此外对垂盆草组织培养高效再生体系的建立进行了探索,得到的主要研究结果如下:(1)研究垂盆草的培养基类型,得出1/2MS基本培养基最适合垂盆草的生长。(2)研究含有1%、2%、3%、4%、5%蔗糖浓度的培养基,发现3%的蔗糖浓度最适合垂盆草的生长;(3)研究含有0.2、0.4、0.6、0.8mg/L的NAA浓度的培养基,发现0.4mg/L的NAA浓度最适合垂盆草的生长;同样得出0.2mg/L的BA浓度最适合垂盆草的生长。(4)适合垂盆草组织培养高效再生体系的基本培养基配方为:1/2MS+0.4mg/L NAA+0.2mg/L BA+3%蔗糖+0.7%琼脂的培养基。同时观察试验结果时,可以看出:适当的增减BA的浓度,可以使茎秆粗壮。     

草地早熟禾再生体系建立的研究进展

在草地早熟禾再生体系建立的过程中,就其影响因素如外植体的选择、培养条件、基因型等方面综述了国内外草地早熟禾再生体系的研究进展.     

苜蓿高效再生体系的建立

以黑龙江主栽苜蓿品种肇东苜蓿、敖汉苜蓿、公农1号苜蓿、公农2号苜蓿为受体材料，分别研究了外植体类型对不定芽分化的影响，基因型、PGRs的不同配比对子叶节不定芽分化的影响，并确定了芽分化、芽伸长及再生植株生根时的最佳培养基。结果表明，当BA浓度为1．0mg／L时最适于子叶节的分化；当BA浓度为0．5mg／L时植株生长最佳。芽分化培养基为：MS＋1．0mg／LBA，30g／L蔗糖，0．8％琼脂，pH5．8；芽伸长培养基为：MS＋0．5mg／LBA，30g／L蔗糖，0．8％琼脂，pH5．8；再生植株生根培养基为：MS＋1.5mg／LIBA，15g／L蔗糖，0．8%琼脂，pH5．8。