利用表型芯片技术筛选利于枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis BAB-1生长与芽胞形成的营养物质

为获得枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis BAB-1菌株的芽胞高效率生产技术,采用Biolog微生物细胞表型芯片(phenotype microarray,PM)技术分析了适合该菌株细胞生长的营养物质、渗透压和pH等生长环境条件;通过单因素试验分析了5种碳源及5种氮源对该菌株生长及芽胞形成的影响。结果表明,BAB-1菌株能够利用114种碳源、228种氮源、29种磷源及29种硫源作为其营养物质,其中52种碳源、66种氮源、3种硫源及1种磷源能够明显促进该菌株的细胞生长;BAB-1菌株对渗透压的忍受能力较强,在1%～10%氯化钠、3%～6%氯化钾、2%～5%硫酸钠、5%～20%乙二醇、1%～6%甲酸钠、2%～7%尿素、1%～12%乳酸钠、20～200 mmol/L磷酸钠、10～100 mmol/L硝酸钠、10～100 mmol/L硫酸铵中均能较好的生长;BAB-1菌株对pH的耐受范围较广,在4.5≤pH≤10.0条件下均能够生长。葡萄糖与氯化铵分别是最适宜BAB-1菌株生长的碳源与氮源,在不同培养时间其菌体总量均最高,48 h时该菌株的菌体总量分别达到6.90×10~8CFU/mL与6.87×10~8CFU/mL;培养12 h时,D-木糖、D-核糖、L-阿拉伯糖及熊果苷能够显著提高BAB-1菌株的芽胞形成率,其中L-阿拉伯糖与熊果苷的芽胞形成率较高,分别为61.94%与66.92%;培养12～36 h,L-脯氨酸、L-谷氨酰胺及L-天冬酰胺能够显著提高BAB-1菌株的芽胞形成率,芽胞形成率介于27.88%～82.37%之间。表明表型芯片技术可以应用于枯草芽胞杆菌生长及芽胞形成营养物质的高通量分析及培养工艺的优化中。     

葡萄霜霉病菌拮抗放线菌PY-1发酵条件优化

为探讨暗黑链霉菌Streptomyces atratus PY-1液体摇瓶发酵条件,提高其活性次级代谢产物的产量,以菌体生物量和发酵液抑制葡萄霜霉病菌Plasmopara viticola活性为指标,采用单因子试验和正交试验对菌株PY-1的最适发酵培养基成分及发酵条件进行优化。结果表明,菌株PY-1最适发酵培养基为玉米粉50 g/L、葡萄糖5 g/L、蛋白胨5 g/L、氯化铵5 g/L、氯化钠 0.5 g/L;最佳发酵培养条件为培养温度28 ℃、培养时间5 d、初始pH 7.0、250 mL三角瓶装液量90 mL、接种量体积分数5%、摇床转速180 r/min。在最佳发酵培养基和培养条件下,菌株PY-1发酵液抑菌率达到99.26%,抑菌能力提高8.35%。     

重寄生真菌盾壳霉产生几丁质酶的条件优化

本试验采用摇瓶培养的方法研究了盾壳霉产生胞外几丁质酶的条件。结果表明：培养液组分、通气状况、表面活性剂和草酸等因子对盾壳霉产生几丁质酶均有影响。改良的马铃薯蔗糖培养液（mPSB）较合成培养基SMCS更适宜作为几丁质酶产生的基础培养基,其几丁质酶产量达到616.8U/L;以mPSB为基础培养基,供试的9种碳源和7种氮源中5g/L葡萄糖和1g/L硝酸钾可使几丁质酶的产量分别达到756U/L和672U/L,较适宜几丁质酶的产生;生长曲线试验显示20℃培养15d几丁质酶产量达到高峰。另外,两种供试表面活性剂对几丁质酶的产生均有抑制作用;一定浓度的草酸溶液（0.1-3g/L）有助于盾壳霉几丁质酶的产生。     

苹果黑星病菌中国菌株生物学特性研究

 苹果黑星病菌(Venturia inaequalis(Cooke) Wint.)适合生长的培养基有苹果叶汁、苹果果汁、麦芽浸渍物、PSA、PDA、V8和马铃薯麦芽糖;适合产孢的培养基有苹果叶汁、V8和PSA。菌落生长和产孢适宜的pH值为5.0~6.5,温度为15~20℃。在碳源和氮源中,蔗糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖、酵母提取物、硝酸钠和牛肉膏有利于病菌生长和产孢,硫酸铵抑制产孢,草酸铵抑制菌落的生长和产孢。20℃时,光周期为12 h,光照强度为600 lx条件下有利于病菌在PSA培养基上生长和产孢,其产孢量约为黑暗条件下的13倍。病菌分生孢子在水滴中萌发的适宜温度为20~25℃,最适pH值为5.0~6.5     

高寒草地矮生嵩草内生解淀粉芽胞杆菌262AG6的发酵条件优化

本研究以对多种植物病原真菌具有抑制能力的解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens 262AG6为试验对象,使用单因素和正交试验设计方法对其发酵培养基和发酵条件进行优化。结果表明,最优发酵培养基为马铃薯200 g,葡萄糖25 g,KNO_3 16 g,NaCl 15 g,水1 000 mL;最优发酵条件为温度34℃,150 mL摇瓶装液40 mL,振荡器转速150 r/min,培养基初始pH 9,最佳接种量为14%;其在100 L发酵罐的生长曲线为0～6 h为调整期,6～26 h为对数期,26 h后菌株进入稳定期,即该菌最佳放罐时间为26 h。     

分离土壤棉花黄萎病菌选择性培养基的筛选

 采用土壤检测稀释法、水筛法和不同土样接种量,对5种土壤浸提液改良培养基进行了比较研究。结果表明,土壤水筛法对土壤棉花黄萎病菌的检测效果优于稀释法,其菌落检测数增加4~10倍。培养基每皿0.25 g土样接种量的检测效果高于0.5 g和1g。5种测试培养基中,培养基D对分离土壤棉花黄萎病菌的选择性表现最好,其土壤接种体检测回收率达63.5%~83.3%.培养基D的组份为:土壤浸提液25 ml,KH₂PO₄ 1.5 g,K₂HPO₄ 4 g,尿酸钠0.2 g,半乳糖醛酸钠(果胶)1g,山梨糖1g,Dox盐2 ml,Tergitol NP-101ml,PCNB0.1g,琼脂17g,蒸馏水1000 ml,pH6.4~6.7。每1000ml融化培养基倒皿前加抗菌素液50 ml (含氯霉素0.05 g,链霉素0.05 g,青霉素-G盐0.05 g)。     

L-脯氨酸对枯草芽胞杆菌NCD-2菌株生物膜形成的影响

 枯草芽胞杆菌 NCD-2菌株在棉花品种‘冀棉11'根际的定殖能力与其根系分泌物中的L-脯氨酸相关。本研究通过外源添加L-脯氨酸评价其对NCD-2菌株生长量和生物膜形成的影响。结果表明,在MSgg培养基中添加L-脯氨酸培养48 h后对菌株生长不存在显著影响。采用称重法测定生物膜的湿重和干重,结果表明在MSgg培养基添加L-脯氨酸显著增加了生物膜产量,且生物膜的褶皱程度和立体结构变得更为明显。采用结晶紫染色法进行生物膜的定量测定发现,浓度为1.250～10.000 mg·mL^-1的L-脯氨酸可以显著提高菌株生物膜形成能力,而低浓度0.625 mg·mL^-1 的L-脯氨酸对生物膜形成无影响。通过RT-qPCR检测了NCD-2菌株生物膜形成相关基因tasA和epsA表达量的变化,结果表明,添加上述不同浓度L-脯氨酸能够显著提高tasA基因表达量,提高了2.53~9.98倍。除了浓度为0.625 mg·mL^-1 L-脯氨酸可提高epsA基因表达外,其他浓度没有显著改变epsA基因的表达,而且epsA基因表达量低于tasA基因。综合分析表明,L-脯氨酸促进NCD-2菌株生物膜形成不是通过改变菌株生长量,而是诱导tasA基因的表达产生更多的胞外蛋白TasA。     

紫杉木霉突变株UL60-11产木霉菌素的发酵条件优化

为了提高紫杉木霉Trichoderma taxi ZJUF0986突变株UL60-11木霉菌素的产量,采用单因素试验筛选出菌株UL60-11生长及产素的最佳碳氮源为葡萄糖、淀粉、蛋白胨、酵母粉、酒石酸铵;通过均匀设计与正交试验相结合优化出最佳培养基配方：葡萄糖23g、淀粉15g、蛋白胨5g、酵母粉3g、酒石酸铵2g、硫酸镁0.25g、磷酸二氢钾1.0g、氯化钠0.2g、硝酸钙0.4g。在最适工艺条件：初始pH4.0、温度25℃、种龄48h、10%接种量1、00ml/500ml的装液量和150r/min下摇瓶发酵试验,木霉菌素产量达到632.16μg/ml,比优化前提高32%。     

解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)HAB-7的培养基优化及抑菌活性

研究了解解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)HAB-7菌株在不同培养基下生长速率及产生的活性物质对几种植物病原菌的抑菌活性。采用摇瓶法测定了HAB-7耐盐性及生长速率;平板对峙法测定了其抑菌活性;以NA培养基为基础培养基,芒果炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)为靶标菌,研究了不同碳、氮源组合培养基对HAB-7菌株生长影响,以及对芒果炭疽菌的抑制率;用单因子正交试验,进一步优化碳源、氮源组合培养基。结果表明,HAB-7菌株在0~20%NaCl(g/L)含盐量上均能生长;最佳接种时间应在培养24~28 h;在NA、LB、BPY、AYDA、BPA及牛肉膏蛋白胨培养基上培养的HAB-7,对8种植物病原真菌平均抑制率分别为53.23%、52.03%、55.52%、52.77%、56.58%及53.82%。优化后的最佳碳源为蔗糖(10.0 g/L)和葡萄糖(10.0 g/L)复合碳源;最佳的氮源为酵母粉(20.0 g/L)和胰蛋白胨(20.0 g/L)复合氮源。单因子正交试验结果显示的碳、氮源为蔗糖30.0 g/L、葡萄糖10.0 g/L、酵母粉30.0 g/L、胰蛋白胨40.0 g/L;对芒果炭疽菌抑菌率为78.3%,较BPA培养的HAB-7提高了10.80%,活菌数达到1.97×10~(10)cfu/m L。     

L-半胱氨酸对稻曲病菌菌丝生长的抑制作用及其转录组分析

 分别应用3个稻曲病菌菌株ZJ09、XS14、XS1214,以及马铃薯蔗糖琼脂(potato sucrose agar,PSA)固体培养基、马铃薯葡萄糖琼脂(potato dextrose agar,PDA)固体培养基、TB₃固体培养基和马铃薯蔗糖(potato sucrose,PS)液体培养基,进行固体或液体培养,实验结果表明补充0.250~0.500 g·L^-1 L-半胱氨酸对稻曲病菌菌丝生长具有明显的抑制作用,作用强度随L-半胱氨酸浓度提高而增加。分别采集未补充L-半胱氨酸和补充0.250 g·L^-1 L-半胱氨酸的PSA固体培养基平板上培养6 d的两组ZJ09菌丝进行转录组测序,得到2 138个差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),其中985个被L-半胱氨酸上调表达,1 153个被L-半胱氨酸下调表达。针对转录组测序结果获得的6个DEGs进行了RT-qPCR验证。GO富集结果显示,DEGs在细胞组分、分子功能和生物过程3个类别中均有富集,说明L-半胱氨酸抑制菌丝生长机制复杂。KEGG通路注释结果表明,L-半胱氨酸抑制菌丝生长可能主要与其影响内质网中蛋白质的加工有关。分析DEGs功能后还发现,L-半胱氨酸显著削弱菌丝中几丁质合酶D、细胞分裂控制蛋白6(cell division control protein,CDC6)及细胞分裂控制蛋白48(CDC48)编码基因的表达,推测可能与其对稻曲病菌菌丝生长的抑制作用有关。     

Brusatol isolated from Brucea javanica (L.) Merr. induces apoptotic death of insect cell lines

Brucea javanica (L.) Merr. is a medicine plant distributed widely throughout Asia where its bitter fruits have been used traditionally in medicine for treating various ailments and controlling some pests. In recent years, concerns over the potential impact of synthetic pesticides on human health and environment have now become more pressing to develop environmentally friendly pesticides. In this paper, brusatol, a quassinoid, was isolated from the fruit of B. javanica, and identified using X-ray crystallographic analysis. Results showed that brusatol has potent contact toxicity (LD₅₀, 2.91 μg/larva, 72 h) and anfieedant activity (AFC₅₀, 17.4 mg/L, 48 h) against the third-instar larvae of Spodoptera exigua. Brusatol demonstrated cytotoxic effects to the tested insect cell lines, IOZCAS-Spex-II and Sf21, in a time- and dose-dependent manner. After brusatol treatment, apoptotic cell death with the DNA fragmentation, activation of caspase-3 and release of cytochrome c was preliminarily observed in both IOZCAS-Spex-II and Sf21. These results indicated the existence of apoptotic death with the mitochondrial-dependent pathway induced by brusatol in Sf21 and IOZCAS-Spex-II cell lines. Our studies will provide important knowledge to understand mechanisms of action of brusatol and to develop brusatol and its derivatives as insecticides.     

雷公藤非生物碱成分对菜青虫杀虫活性研究

雷公藤 ( Tripterygiun wilfordii Hook)属卫矛科雷公藤属植物 ,又名断肠草、菜虫药 ,在我国主要分布于长江中下游地区 ,为著名的杀虫植物之一 [1～ 3]。据资料报道 ,雷公藤主要有效杀虫成分为生物碱类 ,现已分离出 5种有杀虫活性的生物碱 [3]。 Beroza等 [2 ]还发现 ,分离出 5种生物碱后剩下的非结晶物质对欧洲玉米螟 ( Pyrausta nubilalis)初孵幼虫及蚊虫杀虫活性很好。雷公藤非生物碱成分和生物碱的中毒症状相似 ,但有关非生物碱的杀虫作用方式目前还未见报道。作者采用生物活性追踪与化学分离技术相结合的方法 ,从雷公藤根皮中得到了…     

广西地不容提取物及其化合物的抑菌活性

在室内用生长速率法测定了广西地不容块根提取物及其化合物对梨褐斑病菌、梨黑斑病菌、柑橘疮痂病菌和柑橘溃疡病菌的抑菌活性。结果表明,广西地不容块根提取物对上述4种病原菌均有明显的抑制作用,质量浓度为10 g/L时,72 h的抑菌率分别为100%、91.96%、84.76%和100%;在从广西地不容块根提取物分离出的7个化合物中,l-罗默碱对4种病菌均有很高的抑菌活性,质量浓度为1 g/L时,72 h的抑菌率分别为100%、100%、85.04%和100%。紫堇定对梨黑斑病菌抑菌活性高,72 h抑菌率为100%,对梨褐斑病菌和柑橘疮痂病菌也有较高的抑菌活性,而对柑橘溃疡病菌的抑菌活性低。广西地不容块根提取物对梨褐斑病菌、梨黑斑病菌、柑橘疮痂病菌和柑橘溃疡病菌的EC₅₀分别为1.252 5、2.379 3、1.758 2、1.510 0 g/L,l-罗默碱的EC₅₀分别为0.147 3、0.167 1、0.3464、0.118 2 g/L。     

新培育玉米自交系苗期生理生化指标与其抗旱性综合评价

以73份新培育的玉米自交系和7份已知玉米抗旱自交系为材料,采用培养间自然干旱胁迫处理方法,研究相关生理生化指标与玉米抗旱性的关系。通过玉米叶片失水率(WLR)和相对含水量(RWC)的测定分析,筛选出15份自交系进行脯氨酸(Pro)含量、丙二醛(MDA)含量以及超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)活性共5项生理生化指标的测定,对5项指标的耐旱系数分级,对玉米自交系的抗旱性进行综合评价。结果表明,干旱胁迫下大多数自交系表现出相对含水量下降趋势,失水率、脯氨酸含量、丙二醛含量和三个抗氧化酶类活性均表现出升高趋势。筛选出高抗旱自交系4份,抗旱自交系3份,中抗旱自交系2份,敏感自交系3份,高敏自交系3份。     

Growth and physiological responses of Sporobolus robustus kunth seedlings to salt stress

Seedlings of S. robustus were exposed to increasing NaCl concentrations (0, 50, 100, 150, 200, 250, and 300?mM) for 50, 100, and 150 days, in greenhouse conditions. Total dry weight and salt tolerance index decreased gradually with increasing NaCl concentrations. The optimum growth of S. robustus (4.12 to 5.25?g?·?plant^?1) was obtained between 0 and 150?mM at 150 days after salt stress. Foliar chlorophyll a and total chlorophyll contents increased with NaCl concentration at 50 days after treatment. There was no significant effect of salinity on chlorophyll a, b and total chlorophyll contents at 100 and 150 days after treatment. Higher Na contents were found in the shoots as compared to the roots. The Na content increased, while K decreased with increasing NaCl concentrations, suggesting competitive inhibition between absorptions of Na and K as a consequence, the K/Na ratios in shoots and roots decreased with increasing salinity. The proline contents in S. robustus were more pronounced at 300?mM (2.02?µmol/g), 250?mM (2.64?µmol/g), and 200?mM NaCl concentrations (2.98?µmol/g) for 50, 100, and 150 days, respectively, as compared to the treatment without added NaCl. Overall, S. robustus could be considered as salt tolerant on the basis of their performance in biomass production, accumulation of Na, similar foliar chlorophyll a, chlorophyll b and total chlorophyll contents, and accumulation of proline with increasing salinity. The potential ability of S. robustus to accumulate significant amounts of Na makes this halophyte promising as a desalinization tool of salted soils.     

Further studies of the inheritance of benomyl resistance in Venturia pirina isolated from pear orchards in Israel

Fourteen single-spore cultures of benomyl-resistant Venturia pirina were isolated from pear scab lesions at four sites in Israel. According to the ability of the isolates to germinate and grow at varying benomyl concentrations, four levels of resistance were determined in vitro : three isolates with low resistance (LR) grew at 0.5 but not at 5 μg/ml benomyl: five moderately resistant (MR) isolates grew at 5 but not at 50 μg/ml benomyl: five highly resistant (HR) isolates grew at 50 μg/ml but their hyphae were curled: and one isolate with very high resistance (VHR) grew unaffected at 50 μg/ml benomyl. The difference between the HR and the VHR phenotypes was clearly shown on medium amended with N -(3.5-dichlorophenyl) carbamate (MDPC): only the VHR isolate showed negative cross-resistance to 1 μ g/ml MDPC. whereas HR isolates grew unaffected. Crosses between resistant isolates and sensitive wild types, as well as between different resistant isolates, showed that the various levels of resistance are conferred by four allelic mutations that constitute a polymorphic series at a single locus.     

土壤棉黄萎病菌选择性培养基——棉选一号

 棉花黄萎病的发生发展与土壤中微菌核的数量有着密切关系.本文介绍一种用于检验土壤内棉黄萎病菌的选择性培养基——棉选一号.其成份为:NaNO₃ 2g、MgSO₄·7H₂O 0.5g、K₂HPO₄ 1g、Fe₂（SO₄）₃·XH₂O 0.01g.KCl 0.5g、蔗糖5g、琼脂15g、蒸馏水1000ml、氯霉素300mg、井岗霉素2.5ppm、五氯硝基苯350ppm、克菌丹0.5ppm.这种培养基能有效地分离自然土壤中黄萎病菌的微菌核,而极少受其他微生物的干扰,由于培养基上菌落大、黑色、微菌核呈放射状,故易用肉跟计数微菌核的数量.     

抗真菌物质HSAF发酵全合成培养基的筛选

热稳定抗真菌因子是产酶溶杆菌OH11产生的一种抗真菌活性物质,可开发成环境友好型生物杀菌剂。为了进一步提高HSAF发酵产量,本研究通过单因素试验筛选出最佳碳源、氮源、金属离子及磷酸缓冲盐并进行正交试验优化,确定了最适的合成培养基配方为葡萄糖8 g/L、(NH₄)₂SO₄ 1 g/L、Fe Cl₃ 8 mg/L、K₂HPO₄ 1 g/L、KH₂PO₄ 0.5 g/L。在此培养基下,HSAF产量达到(215.46±6.85)mg/L,比优化前提高了92.24%。该培养基优势在于成分已知、含量稳定,不仅能避免培养基中复杂成分造成发酵产量的波动,而且有利于对胞内代谢特征和HSAF合成关键因素进行深入研究,进而提高产量并降低生产成本。     

高效氯氰菊酯对草地贪夜蛾Sf9细胞自噬的诱导作用

采用噻唑蓝（MTT）染色、显微镜及透射电子显微镜观察、单丹磺酰戊二胺（MDC）荧光染色及蛋白质免疫印迹（WB）技术等方法,分别针对高效氯氰菊酯（beta-cypermethrin）作用后草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda卵巢细胞系Sf9细胞的细胞活力、自噬发生的典型特征及自噬相关蛋白变化情况进行了测试及分析。结果表明:经不同浓度高效氯氰菊酯处理后,对草地贪夜蛾Sf9细胞活性的抑制效应与作用剂量及时间呈现依赖关系,并表现出典型的细胞自噬现象;LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达水平比和Beclin 1蛋白表达量呈现上调趋势,分别为对照组的201.32%和136.00%,p62蛋白表达量下调至对照组的68.13%。研究表明,高效氯氰菊酯对草地贪夜蛾Sf9细胞具有显著的细胞毒性,并且其对细胞活力的抑制作用与自噬诱导途径相关。     

浙沪小麦田杂草调查及优势杂草化学防除技术研究

为了明确浙沪小麦田杂草发生情况及优势杂草控制技术,采用唐氏五级目测法和随机取样计数法相结合的方法,对上海和浙江的116块冬小麦田杂草进行了抽样调查,同时采用盆栽试验和田间小区试验测定了7种除草剂对主要危害杂草的防效。结果表明,浙沪冬小麦田共调查到杂草43种,隶属于14科,其中菊科杂草种类最多,有10种,其次是禾本科杂草9种,再次是石竹科杂草5种。杂草群落组成以禾本科杂草为主,优势杂草为日本看麦娘Alopecurus japonicus Steud.、菵草Beckmannia syzigachne(Steud.) Fern.、棒头草Polypogon fugax Nees ex Steud.、硬草Sclerochloa dura(L.) Beauv.、早熟禾Poa annua L.、鹅肠菜Myosoton aquaticum(L.) Moench、救荒野豌豆Vicia sativa L.、猪殃殃Galium spurium L.和小藜Chenopodium ficifolium Smith。室内除草活性及田间药效试验结果表明,日本看麦娘可用15%炔草酯WP、5%唑啉草酯EC、30 g/L...