促卵泡素对体外培养牛卵泡类固醇合成相关基因表达的影响

本研究旨在探究促卵泡素（follicle stimulating hormone,FSH）处理对体外培养的牛有腔卵泡颗粒细胞和膜细胞类固醇激素合成相关基因表达的影响。采集牛卵巢表面直径9~11 mm的有腔卵泡,用含不同浓度FSH的DMEM/F12体外培养牛有腔卵泡24 h。提取卵泡颗粒细胞、膜细胞RNA并反转录成cDNA,利用实时荧光定量PCR检测卵泡颗粒细胞、膜细胞中类固醇激素合成酶基因（CYP11A1、3β-HSD、CYP17A1、CYP19A1、17β-HSD）和促性腺激素受体基因（FSHR、LHR）的表达水平。结果显示,FSH处理上调了颗粒细胞中CYP11A1、3β-HSD和CYP19A1基因表达,其中,25 ng/mL FSH处理极显著上调了CYP11A1基因表达（P<0.01）,10 ng/mL FSH处理显著上调了3β-HSD基因表达（P<0.05）,50 ng/mL FSH处理显著上调了CYP19A1基因表达（P<0.05）;50 ng/mL FSH处理显著或极显著上调了膜细胞中CYP11A1、3β-HSD和CYP17A1基因表达（P<0.05;P<0.01）,但在10和25 ng/mL FSH处理组中CYP11A1、3β-HSD和CYP17A1基因表达显著或极显著下调（P<0.05;P<0.01）。对FSHR、LHR基因研究结果显示,不同浓度FSH处理对颗粒细胞中FSHR、LHR基因的表达均无显著影响（P>0.05）,只有25和50 ng/mL FSH处理显著或极显著上调了膜细胞中LHR基因表达水平（P<0.05;P<0.01）,且不同处理组之间膜细胞中CYP11A1、3β-HSD和CYP17A1基因的表达变化与LHR基因表达变化趋势较一致。结果表明,FSH处理可提高牛有腔卵泡颗粒细胞中CYP11A1、3β-HSD和CYP17A1基因的表达,膜细胞中CYP11A1、3β-HSD和CYP17A1基因对LH的刺激更敏感,FSH可能通过影响LHR基因的表达来调节膜细胞中类固醇合成酶基因的表达。     

促卵泡素对奶牛卵母细胞体外成熟的影响

为研究促卵泡素（FSH）在奶牛卵母细胞的成熟过程中的促进作用,在牛卵母细胞成熟液中添加0μg／mL、10μg／mL、25／μg／mL、50μg／mL、100μg／mLFSH统计成熟率。结果表明,添加FSH各组与对照组相比,卵母细胞的成熟率均显著提高。而添加10μg／mL、25μg／mL、100μg／mL组卵母细胞的成熟率之间差异不显著,50μg／mL组卵母细胞的成熟率最高。无论是否添加FSH都不会影响到孤雌激活的卵裂率。说明FSH具有促进奶牛卵母细胞成熟的功能。     

优势卵泡与促卵泡素对牛活体采卵效果的影响

将8头荷期坦供体奶牛随机分为4组,每组2头,分别按优势卵泡+注射促卵泡素(FSH)、优势卵泡+不注射FSH、去优势卵泡+注射FSH、去优势卵泡+不注射FSH处理供体牛,处理后第4天应用B型超声波导引活体采卵,试验重复10次。结果显示:注射FSH前去优势卵泡对其可采卵泡数、回收卵母细胞数和可用卵母细胞数均有显著提高(P0.05),但不注射FSH时去优势卵泡对提高采卵效率无显著效果;活体采卵对供体牛卵巢虽造成一定损伤,但停止采卵2~3个月后均能恢复正常发情、配种后能正常妊娠,对供体牛繁殖性能无显著影响。     

维生素对牛腔前卵泡体外培养的影响

用改良的McCoy’s 5a无血清培养液 (含 3mML -谷氨酰胺、0 1%BSA、2 0ng/ml睾酮、2 5 μg/ml转铁蛋白、10 0ng/ml胰岛素和 4ng/ml硒 ) ,在 96孔培养板中 ,每孔 2 5 0 μl培养液的条件下 ,研究了维生素C和维生素E对腔前卵泡体外发育的影响。结果表明 :在培养液中添加 90 μM的维生素C有利于维持腔前卵泡体外生长时结构的完整性 ,显著提高牛腔前卵泡体外培养 10天的存活率 (P <0 0 5 ) ,但并没有发现对腔前卵泡的生长、发育和成腔有促进作用 (P >0 0 5 ) ;在培养液中添加3 0 μM的维生素E对Φ >13 0 μm的腔前卵泡及其卵母细胞有促进发育和促进卵泡腔形成的趋势 (P >0 0 5 ) ;在培养液中联合添加 12 μM维生素E和 96μM维生素C ,能显著提高牛腔前卵泡体外培养 10天的存活率 (P <0 0 5 ) ,并对牛腔前卵泡的生长和发育有一定的促进作用 ,但差异不显著 (P >0 0 5 )。     

促卵泡激素和胰岛素对牛卵泡颗粒细胞长期培养的影响

以McCoy’s5a为基础培养液添加硒、转铁蛋白、雄烯二酮、谷氨酰胺，对牛卵巢上大（直径〉8mm）、中（4mm〈直径〈8mm）、小（直径〈4mm）非闭锁卵泡的颗粒细胞进行无血清培养，研究添加不同浓度的促卵泡激素（FSH）和胰岛素对颗粒细胞增生、分化和激素分泌的影响。结果，FSH能诱导颗粒细胞增生及提高其雌二醇合成能力，颗粒细胞雌二醇的合成能力与生理浓度的FSH存在剂量依赖关系。胰岛素对大、中、小卵泡颗粒细胞增生和雌激素分泌有促进作用。     

促卵泡素和促黄体素对猪卵母细胞体外成熟的影响

本实验探讨了促性腺激素(FSH、LH)对猪卵母细胞体外成熟的影响,并最终找到了其合理的使用剂量.实验选取具有3层致密卵丘细胞层及均匀细胞质的猪卵丘-卵母细胞复合物(COCs)在体外进行成熟培养.体外成熟培养液为改良的TCM-199液,根据实验设计再添加不同浓度的FSH和LH.卵母细胞体外成熟培养条件为39 ℃、5%CO2与饱和湿度下,成熟培养48 h.培养结束后,以第1极体排出作为卵母细胞成熟的标准.在成熟液中添加LH浓度分别为1、5、10 IU/mL时,与没有添加FSH与LH的对照组(成熟率为15.9%)相比,成熟率有显著提高,前者成熟率分别为49.1%、30.0%、36.3%.LH浓度为1 IU/mL的实验组成熟率最高,显著高于对照组(P＜0.05);然后以成熟液中只添加浓度为1 IU/mL LH为对照组,实验组添加FSH浓度分别为1、5、10 IU/mL.结果表明,添加FSH浓度为5 IU/mL和10 IU/mL时其成熟率分别为40.1%、27.6%,低于对照组(49.0%).添加FSH浓度为1 IU/mL时其成熟率(49.1%)高于对照组(49.0%),但差异不显著(P＞0.05).试验表明,随着FSH与LH添加浓度逐渐增加,成熟率呈下降趋势.添加FSH与LH浓度均为1 IU/mL可得到最佳的成熟效果.     

人源促卵泡素对猪卵母细胞体外成熟的影响

促卵泡素(FSH)一直在动物繁殖、体外培养及人类临床上广泛应用,但是无论是人源促卵泡素还是重组促卵泡素的效用、成分及活性都是不同的,由于这个原因,促卵泡素在实践中的应用一直没有一个规范的标准.试验着重研究了纯化于绝经后妇女尿液中的促卵泡素(hFSH)对猪卵母细胞体外成熟的影响,分别对猪体外成熟的卵母细胞进行地衣红染色和皮质颗粒的染色,来检测hFSH对卵母细胞的核及胞质成熟的影响,并检测了体外成熟猪卵丘细胞DNA凋亡的情况.     

促卵泡素与促黄体素对猪卵母细胞体外成熟的影响

促卵泡素(FSH)与促黄体素(LH)是参与卵母细胞成熟的最重要的蛋白质激素,在猪卵母细胞体外成熟培养中使用较多。大部分研究已经证实了促性腺激素(FSH、LH)在猪卵母细胞体外成熟培养中的重要作用。为进一步探讨FSH与LH对猪卵母细胞体外成熟的影响,确定其对猪卵母细胞体外成熟的作     

促卵泡素与促黄体素对猪卵母细胞体外成熟的影响

本试验探讨了促性腺激素（FSH、LH）对猪卵母细胞体外成熟的影响,最终找到了其合理的使用剂量。在成熟液中添加LH浓度分别为1、5、10IU／mL时,与没有添加FSH与LH的对照组（15．9％）相比,成熟率有显著提高,成熟率分别为49．1％、30．0％、36．3％。LH浓度为1IU,mL的实验组成熟率最高,显著高于对照组（P〈0．05）;然后以成熟液中只添加1IU/mLLH为对照组,试验组分别添加1、5、10IU/mLPSH。试验结果表明：添加FSH浓度为5和10IU/ml时其成熟率分别为40．1％、27．6％,低于对照组（49．0％）。添加FSH浓度为1IU／mL时其成熟率（49．1％）高于对照组（49．0％）,但差异不显著（P〉0．05）。两组试验同时得出,随着LH与FSH添加浓度的增加,成熟率呈下降趋势。通过本试验结果得出,在体外成熟培养猪卵母细胞时,各添加1IU／mL LH与FSH时,得到最佳的成熟效果。     

促卵泡素与促黄体素对猪卵母细胞体外成熟的影响

本试验探讨了促性腺激素(FSH、LH)对猪卵母细胞体外成熟的影响,最终找到了其合理的使用剂量。在成熟液中添加LH浓度分别为1、5、10 IU/mL时,与没有添加FSH与LH的对照组(15.9%)相比,成熟率有显著提高,成熟率分别为49.1%、30.0%、36.3%。LH浓度为1 IU/mL的实验组成熟率最高,显著高于对照组(p<0.05);然后以成熟液中只添加1 IU/mLLH为对照组,试验组分别添加1、5、10 IU/mLFSH。试验结果表明:添加FSH浓度为5和10 IU/ml时其成熟率分别为40.1%、27.6%,低于对照组(49.0%)。添加FSH浓度为1 IU/mL时其成熟率(49.1%)高于对照组(49.0%),但差异不显著(p>0.05)。两组试验同时得出,随着LH与FSH添加浓度的增加,成熟率呈下降趋势。通过本试验结果得出,在体外成熟培养猪卵母细胞时,各添加1 IU/mL LH与FSH时,得到最佳的成熟效果。     

牛腔前卵泡的体外培养

通过在α- MEM和 D- MEM/ F1 2 基础液中添加不同比例的 ITS、丙酮酸钠、谷氨酰胺、次黄嘌呤和血清 ,观察了不同基础液对牛腔前卵泡体外生长发育的影响 ,从而筛选出较好的组别。在筛选出的基础液组别中添加 3个水平的FSH、L H、E2 ,观察了其对牛腔前卵泡体外生长发育的影响。结果表明 ,α- MEM和 D- MEM/ F1 2 2种基础液中以α-MEM为好 ,不同的基础培养液组合对牛腔前卵泡的体外培养有一定的影响。添加不同水平的激素对牛腔前卵泡体外培养也有显著影响。试验初步筛选出最佳的培养液成分为α- MEM ITS(I- 5 m g/ L ,T- 5 mg/ L ,S- 5μg/ L ) 丙酮酸钠(0 .2 3mmol/ L) 谷氨酰胺 (1.5 m mol/ L) 次黄嘌呤 (2 m mol/ L) 血清 (7.5 % ) FSH(0 .2 5 mg/ L) L H(5 IU/m L ) E2 (0 .5 mg/ L )。     

LRH-1的小分子激活剂DLPC对牛卵巢颗粒细胞类固醇合成基因表达的影响

LRH-1(nuclear receptor subfamily 5, group A, member 2),是核受体家族的成员之一,作为转录共激活子调控相关基因的表达,对类固醇激素的分泌及细胞代谢有重要影响。为探究LRH-1对牛卵巢颗粒细胞类固醇激素分泌的影响,以体外培养的牛卵巢颗粒细胞为试验材料,使用不同浓度(20μM、50μM、100μM、150μM、200μM)LRH-1的激活剂DLPC激活LRH-1的表达,通过免疫荧光、免疫组织化学和RT-qPCR方法,检测LRH-1在牛卵巢组织中的表达定位及其对牛卵巢颗粒细胞类固醇合成相关基因表达水平的影响。试验结果表明,LRH-1在牛卵巢颗粒细胞中高度表达,50μM DLPC可显著提高STAR、LRH-1、CYP17基因的表达,20μM DLPC可显著抑制CYP11基因的表达。研究结果揭示了LRH-1表达的上调可以显著提高类固醇激素合成相关基因的表达。     

促卵泡素对鸡等级前卵泡细胞发育的影响

实验研究了鸡等级前卵泡颗粒细胞和膜细胞的发育及促卵泡素(FSH)对其增殖的调控作用。形态学观察显示小白卵泡只有1层颗粒细胞,大白卵泡出现2层颗粒细胞,而小黄卵泡和大黄卵泡中则有多层颗粒细胞。结果表明:卵泡颗粒细胞和膜细胞的密度和细胞层厚度随着卵泡发育的等级而增加。卵泡体外悬浮培养表明,FSH显著刺激小黄卵泡和大黄卵泡中颗粒细胞的增殖,但对膜细胞无显著促增殖作用。由此推测,FSH通过刺激颗粒细胞的增殖促使等级前卵泡进入等级发育。     

卵泡大小对牛卵母细胞体外成熟影响的研究

研究了牛不同大小卵泡 ( 2～ 4mm、 4～ 6mm、 6～ 8mm、 >8mm )中的卵母细胞的体外成熟及随后的发育能力。直径 2～ 4mm、 4～ 6mm、 6～ 8mm组的体外成熟率 ( 6 0 8% ,6 5% ,6 1 7% )显著高于直径 >8mm组 ( 35 1 % ) ;体外受精后的发育能力在 2～ 4mm、 4～ 6mm组显著优于 6～ 8mm、 >8mm组     

体外培养牛腔前卵泡卵母细胞的超微结构

直径约100μm牛腔前卵泡在无血清下体外培养15d。超微结构研究显示，培养前腔前卵泡卵母细胞微绒毛短小，分布均匀。胞质内细胞器致密而均匀，线粒体多为长或圆形，嵴较少，高尔基体、脂滴稀少，未见有皮质颗粒出现。培养6d时，微绒毛略变粗长，但数量减少。胞质内细胞器，由近核分布向胞质中央区转移，线粒体形态丰富，基质电子密度极高。培养15d腔前卵泡卵母细胞微绒毛增多，变长，斜向或垂直插入已经形成的透明带中。线粒体增多，大小不等，形态各异，胞质中区有溶酶体样物质及零星的皮质颗粒出现。电镜研究表明，体外培养与体内正常发育腔前卵泡卵母细胞超微结构变化规律基本相似。     

应用国产促卵泡素超排皮埃蒙特牛试验

利用国产高活性促卵泡素(FSH)超排纯种皮埃蒙特肉牛,平均获可用胚胎6.45枚/头.其中,青年母牛6.3枚/头,促卵泡素剂量控制在7.5～8.2 mg;成年母牛65枚/头,促卵泡素剂量控制在8.2～9.2 mg.间隔50～60 d,连续超排4次对超排效果无明显影响.     

萝卜硫素对体外成熟小鼠卵母细胞谷胱甘肽合成相关基因表达的影响

本研究通过比较体内外成熟卵母细胞中谷胱甘肽(GSH)合成相关基因(Gclc、Gclm、Gss)的表达差异,并尝试利用萝卜硫素(Sulforaphane,SFN)来提高卵母细胞中GSH的合成。利用3周龄小鼠卵母细胞进行体外成熟,结果表明:在自然成熟的卵母细胞中,Gclc、Gclm在MⅡ期附近表达较高,而卵丘细胞在MⅠ期表达较高;Gclc、Gclm在体外成熟MⅠ、MⅡ期卵母细胞中的表达均显著低于体内水平(P0.05),而在体外成熟卵丘细胞中仅MⅠ期表达水平低于体内;Gss表达水平没有显著变化。此后尝试分别添加1、5、10、20μmol/L的SFN来改善体外卵母细胞中GSH含量,结果表明添加10μmol/L SFN可以显著提高GSH合成相关基因的m RNA水平(P0.05),最终提高体外卵母细胞中谷胱甘肽含量,以达到优化体外成熟体系的目的。     

激活素A调控促卵泡素合成与分泌的研究进展

垂体促卵泡素(follicle-stimulating hormone, FSH)具有调节配子发生、类固醇激素生成、细胞代谢等功能,在哺乳动物的繁殖活动中起着十分重要的作用。作为转化因子-β超家族(TGF-β superfamily)成员之一,激活素A(Activin A)能够选择性促进FSH的合成与分泌。文章就激活素A的生物学功能与其调控FSH合成与分泌的最新研究进展进行了梳理与总结,为进一步深入探索激活素A的功能及开发动物繁殖人工调控相关激素制品提供理论参考与依据。     

牛腔前卵泡体外培养前后质量评定

采用台盼蓝染色、相差显微镜观察以及透射电镜方法对体外培养前后牛腔前卵泡活力进行评定。结果表明,台盼蓝染色和相差显微镜观察检测卵泡活力有一定的误检率,超微结构检测能够客观、真实地反映腔前卵泡健康状况,可作为评定腔前卵泡培养系统优劣的一个可靠手段。在实际应用中,相差显微镜观察与超微结构评定相结合可发挥良好作用。