生防芽孢杆菌与化学杀菌剂混配对香蕉枯萎病菌的室内毒力测定

香蕉枯萎病是毁灭性土传病害,引入生物防治技术可有效降低目前化学杀菌剂的用量,保护生态环境和人类健康。通过平板抑菌试验,研究了2株香蕉枯萎病生防芽孢杆菌C10-1和A5-6对尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxyporum f. sp. cubense)的平板抑制效果以及对化学杀菌剂的适应性,在此基础上,将生防芽胞杆菌与杀菌剂复配,进一步研究其对枯萎病菌的室内抑制效果。结果表明,C10-1菌株对病原菌的抑制效果和对杀菌剂的适应性均优于A5-6菌株,与0.1mg/L咪鲜胺复配后,其抑菌效果显著增强,可达94.96%。     

拮抗香蕉枯萎病菌木霉菌株筛选

香蕉枯萎病是由尖孢镰刀菌引起的土传病害,目前尚缺乏有效的防治方法。木霉菌是一类重要的植物病害生防菌,广泛分布于自然界,容易分离培养,对多种植物病原菌具有一定的抑制作用。笔者从海南儋州、乐东、文昌等地147份土样中分离出245株木霉,通过对峙试验筛选出对香蕉枯萎病菌有较好拮抗效果木霉菌10株,抑菌率在63.1%～84.7%,并对其进行了体外拮抗作用的测定;最后还测定了无菌土中木霉与病原菌的种群变化,结果表明木霉对香蕉枯萎病菌有一定的抑制作用。     

一株香蕉枯萎病拮抗菌的鉴定及香蕉组培袋装苗防病试验

采用平板对峙法从海南省土壤中分离到5株对香蕉枯萎病有较强拮抗作用的芽孢杆菌,经形态特征及16S rDNA序列将菌株S40鉴定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。菌株S40的拮抗试验表明,不同浓度的发酵滤液均可抑制病原菌菌丝生长和孢子的萌发和生长。组培袋装苗实验表明拮抗菌可明显推迟其发病和死亡时间,三种不同处理的相对防治效果分别为71.2%、83.3%和92.4%。     

草坪镰刀枯萎病菌拮抗木霉菌的筛选及拮抗机制的研究

通过木霉属5个菌株与大连高尔夫球场上草坪镰刀枯萎病菌的对峙培养试验,结果表明:哈茨木霉1、哈茨木霉2、钩状木霉及桔绿木霉的抑菌效果很好,可以作为草坪镰刀枯萎病菌的生物防治拮抗菌加以利用,在这5株木霉中以哈茨木霉2的拮抗作用最强.观察结果表明,木霉对镰刀枯萎病菌的拮抗机制主要表现为生长竞争、重寄生及产生抗菌物质使病菌菌丝消解,而木霉菌生长迅速,可附着或缠绕于病菌菌丝上,可产生吸器侵入菌丝.另外,木霉菌还能分泌使病原菌菌丝原生质浓缩、断裂、消解的物质.     

草坪褐斑病菌和镰刀枯萎病菌拮抗木霉菌的筛选及效果研究

通过木霉属5个菌株与草坪禾草褐斑病菌、草坪禾草镰刀枯萎病菌的对峙培养试验,发现哈茨木霉1、哈茨木霉2、深绿木霉、钩状木霉及桔绿木霉的抑菌效果很好,可以作为草坪镰刀枯萎病菌的生物防治拮抗菌加以利用。在这5株木霉中以哈茨木霉对草坪镰刀枯萎病菌的拮抗作用最强。     

产纤维素酶细菌的分离筛选与鉴定

通过筛选获得高产纤维素酶细菌菌株,为纤维素酶制剂研制及纤维素酶工程菌构建提供试验材料。采用刚果红平板从牛羊粪便及腐败的玉米秸秆和木屑中分离产纤维素酶菌株,以DNS法测定酶活,根据酶活复筛产纤维素酶分离菌株;观察分离菌株的形态、染色与培养特性;应用16S rDNA通用引物扩增菌株基因组DNA,测序结果提交GenBank数据库进行Blast比对分析和相似性搜索,作出复筛菌株种的鉴定。结果表明:分离获得16株纤维素酶产量较高的细菌菌株,均为革兰氏阳性菌,菌体呈短杆状、具中央芽孢,经16S rDNA序列比对分析和相似性搜索,鉴定为10株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、6株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。     

抗香蕉枯萎病菌F2-14菌株的鉴定及其抑菌机理初探

香蕉枯萎病已严重威胁着全球香蕉产业的发展,生物防治是防控香蕉枯萎病的重要途径之一。本研究通过抗香蕉枯萎病活性筛选,得到一株具有高拮抗活性的菌株F2-14。通过生理生化特性、形态特征和基因组ANI值分析,将菌株F2-14归属为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）。将菌株F2-14基因组序列与各数据库进行比对分析,表明菌株F2-14基因组中具有产生几丁质酶、葡聚糖酶、蛋白酶等的基因,还含有编码杆菌溶素、儿茶酚型嗜铁素、丰原素、表面活性素等7种抗生素的基因簇。菌株F2-14具有广谱抗真菌活性,且能通过产生次级代谢物致使Foc TR4病菌的细胞壁破裂和细胞膜受损,从而达到抑制Foc TR4病菌的生长。综上所述,贝莱斯芽孢杆菌F2-14菌株在植物抗病方面有着较好的农业应用潜力。     

一株抗霉菌内生菌的筛选、鉴定及作用机制的初步研究

为实现饲料的生物防霉及绿色防霉,采用稀释分离法从传统防霉植物——花椒中分离到一株能够抑制饲料储藏中常见霉菌的内生细菌HT512。经形态学观察、生理生化试验及16S r DNA序列分析,该菌为解淀粉芽孢杆菌。通过对受抑制的霉菌菌丝的显微观察及液体培养观察,推测HT512通过破坏霉菌的细胞壁以抑制其生长。     

黄芪发酵菌的筛选鉴定及纤维素酶学性质试验

为分离发酵黄芪菌株,试验采取黄芪样品接种营养琼脂,置30℃环境培养。取分离菌接种纤维素刚果红琼脂,筛选能形成较大降解圈的细菌进行鉴定,并测定其纤维素酶性质。结果表明,筛选菌为解淀粉芽孢杆菌,该菌株降解圈直径(H)与菌落直径(C)的比值(H/C)为4.03。在37℃环境培养36 h酶活力达到高峰,为32.16 U/m L。在低于60℃及pH值6.0~8.0环境纤维素酶较稳定,可保持酶活力90%以上。     

一株桑树内生拮抗菌的分离鉴定

从经过严格表面消毒的桑树根、茎、叶中分离获得内生细菌76株。以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)作为指示菌进行拮抗菌的筛选,其中5个分离株具有抑菌活性,复筛选出抑菌活性及热稳定性最强的G21菌株。进一步研究表明G21菌株对家蚕病原真菌球孢白僵菌(Beauveria bassiana)、绿僵菌(Metarhizium)均具有较强的拮抗作用。该菌株的形态及部分生理生化特征为:革兰阳性,杆状,产芽孢,接触酶阳性,好氧。16S rDNA序列分析表明该菌株与芽孢杆菌(Bacillus)的同源性达到99.8%。综合以上鉴定结果确定G21菌株为芽孢杆菌。     

1株降解黄曲霉毒素B1的解淀粉芽胞杆菌的分离鉴定及其体外脱毒效果

旨在筛选出能够高效降解黄曲霉毒素B1 (AFB1)的菌株,并对其脱毒活性组分的脱毒效果进行研究,本研究以香豆素为唯一碳源对目标细菌进行初筛,以对AFB1的降解率为指标进行复筛,并从形态学、生理生化试验和16S rDNA序列分析对筛选菌株进行鉴定;通过测定该菌株不同发酵组分对AFB1的降解率,来定位其脱毒活性组分,同时采...     

产纤维素酶解淀粉芽胞杆菌分离株的生物学特性研究

对发酵黄芪样品中分离的1株产纤维素酶解淀粉芽胞杆菌的生物学特性进行了检测,试验结果表明,菌株在10℃~60℃环境均能生长,最适生长温度为35℃~40℃。pH5.0~8.0培养基均适宜菌株生长,其中最适pH为6.0。在37℃环境200r/min振荡培养的生长曲线在0~4h为延迟期,4h~12h为对数期,12h~24h为稳定期,24h以后为衰亡期。细菌37℃培养32h开始产生芽胞,在培养72h时芽胞形成率达到80.67%。菌株对多数抗菌药物敏感,且安全性良好。该菌株适应性强,生长条件较为宽松,这为其开发应用提供了依据。     

解淀粉芽孢杆菌SSY2颉颃霉菌物质的鉴定及其理化性质研究

试验旨在鉴定解淀粉芽孢杆菌SSY2的抗霉菌物质及其理化性质。通过活性组分分析、硫酸铵沉淀、超滤除盐等方法鉴定并提取抗菌物质;通过对抗霉菌物质产生的时间、酶活性、温度、酸碱度（pH）、稳定性及储存温度的检测初步确定其理化性质。结果表明,不同组分对霉菌的降解率不同,菌液上清液对霉菌的降解能力最强,菌液发酵液的降解能力次之,胞内液降解能力最差。因此,初步确定解淀粉芽孢杆菌SSY2的抗菌物质活性成分是一种胞外分泌物,主要存在于菌液上清液;经30%、60%、80%和100%饱和硫酸铵沉淀,确定最佳硫酸铵饱和浓度为60%;超滤纯化后得到分子质量大于3 ku的抗菌活性物质。理化性质检测结果表明,该抗菌物质能在对数期早期（24 h）开始产生;具有产蛋白酶活性,对胃蛋白酶具有一定抵抗力,但对蛋白酶K、碱性和中性蛋白酶的抵抗力较低;在60~121℃抗菌活性稳定,证明其对热不敏感;耐酸性较强,在pH 6.0~8.0环境中对霉菌的抗菌活性稳定;此外,抗菌物质具有良好的传代稳定性,可在4℃条件下长期保存。本试验结果可为后续研发霉菌生物防控制剂提供依据。     

一株解淀粉芽孢杆菌的特性及抑菌活性研究

试验旨在对一株牛瘤胃源解淀粉芽孢杆菌的生长曲线、耐酸性和耐胆酸盐性等特性进行分析,同时对该菌发酵产物的抑菌活性和抑菌活性稳定性进行测定。采用生长速率法测定该菌生长曲线,活菌计数法测定耐酸性和耐胆酸盐性等特性,牛津杯法测定抑菌活性和抑菌活性稳定性。结果显示,该菌生长4 h时进入对数生长期,20 h后生长趋于稳定,进入生长稳定期;同时该菌表现出较好的耐酸性,在pH 3.0~7.0时存活率为23.8%~90.6%;有较好的耐胆酸盐性,在0.1%~0.4%的胆酸盐中存活率为64.2%~83.6%。以大肠杆菌（Escherichia coli）、副溶血弧菌（Vibrio parahemolyticus）、藤黄八叠球菌（Sarcina lutea）和产气杆菌（Aerogenes）等细菌和黑曲霉（Aspergillus niger）、黑根霉（Rhizopus nigricans）等霉菌作指示菌进行抑菌试验发现,该菌的发酵产物具有抑菌活性,同时其抑菌活性物质的耐热性和耐酸性较好。本试验通过对该解淀粉芽孢杆菌的特性进行研究发现,该菌具有耐酸、耐胆酸盐等特性;其抑菌活性及抑菌稳定性较好,具有耐酸碱及耐高温特性。     

鸭病毒性肝炎的病原分离和鉴定

从间接免疫荧光检测呈DVH阳性的病死鸭肝脏分离到3株(CD、HB、XC)病毒,电镜下病毒颗粒呈圆形、无囊膜,直径30～40nm,对氯仿、pH3.0、50℃,60min的处理不敏感,分离毒连续传代3次,全部鸭胚在24～60h死亡,胚体呈弥散性充血、出血,其致死鸭胚的能力能够被Ⅰ型DHV高免血清中和。分离毒人工感染1日龄雏鸭后出现与自然病例相同的临床症状和病理变化,并能重新分离到相同病毒。间接免疫组化检测自然病例和人工感染雏鸭的肝、脾、肾等均呈现DVH阳性。结果表明分离到的3株病毒均为Ⅰ型DHV,为有效预防DVH提供了有用的实验数据。     

蛋鸡传染性鼻炎病原的分离鉴定

对50例以打喷嚏、咳嗽、头部肿胀为主要特征的蛋鸡病例进行了病原分离,通过染色镜检、生化试验、凝集试验、动物回归试验确诊该病是由A型、C型等副鸡嗜血杆菌感染引起的鸡传染性鼻炎。     

贵州百香果果实炭疽病病原分离及鉴定

炭疽病是贵州百香果的重要病害之一。本研究通过组织分离法,在贵州百香果炭疽病病株中分离到2株疑似炭疽病菌分离物。根据分离物的形态特征、柯赫氏法则验证,以及基于ITS-TUB2-ACT-CHS-1多基因序列系统发育树分析,明确引起贵州产区百香果炭疽病病原主要为巴西炭疽菌Colletotrichum brasiliense和喀斯特炭疽菌C. karstii。     

Screening and Identification of Protease-producing Bacillus amyloliquefaciens from Pig's Intestines and the Preliminary Study of Its Enzymatic Properties

A Bacillus strains,MY-6 strain which secreted high amount of protease was isolated from healthy pig's intestines,and it was identified as Bacillus amyloliquefaciens by the methods of morphological observation, biochemical tests,16S rDNA sequence amplification and comparison, biolog identification. In order to get an initial understanding of the enzymatic properties of its protease, the dynamic relationship between protease activity and bacterial life cycle, effects of pH,temperature,metal ions and inhibitors on protease activity,and the protease hydrolysis of different substrates were investigated. The results showed that,the protease synthesis of MY-6 strain was synchronized with its spore formation which began in the early stage of the exponential growth phase. The optimum conditions for the protease was 40℃ and pH 7.0,Ca²⁺ and Mn²⁺ had a intensive effects on the protease activity, PMSF could completely inhibit the activity of protease, indicating that the protease was a serine protease.The content of TCA soluble peptides for protein hydrolyzate fish protein, soybean protein, corn protein and casein was 0.83,0.67,0.58 and 0.38 μmol/g,respectively. In conclusion,Bacillus amyloliquefaciens MY-6 strain could be used as an initial selection of probiotic Bacillus to improve protein digestion.     

猪肠道中产蛋白酶解淀粉芽孢杆菌的筛选、鉴定及其酶学性质的初步研究

试验从健康猪肠道中筛选得到一株高产蛋白酶的芽孢杆菌MY-6菌株,通过形态学观察、生理生化试验和糖醇发酵试验、16S rDNA序列扩增与比对、Biolog鉴定等方法鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌。并研究了蛋白酶活力与细菌生活周期的动态关系,pH、温度、金属离子和蛋白酶抑制剂对蛋白酶活力的影响及蛋白酶对不同底物的水解性能。结果显示,MY-6菌株蛋白酶的合成与其芽孢形成同步,均开始于对数生长期的前期,该菌株所产蛋白酶的最适作用条件为：40℃、pH 7.0,Ca²⁺和Mn²⁺对蛋白酶活力有明显的促进作用,PMSF能够完全抑制该蛋白酶的活力,说明该蛋白酶属丝氨酸蛋白酶,蛋白酶对鱼粉蛋白、大豆蛋白、玉米蛋白、酪蛋白的酶解物TCA可溶性肽含量分别为0.83、0.67、0.58和0.38 μmol/g。结果提示,解淀粉芽孢杆菌MY-6菌株可作为改善蛋白质消化的益生性芽孢杆菌的初步选择。     

产角蛋白酶芽孢杆菌的分离筛选与鉴定

从长期堆积腐烂羽毛的土壤中分离出一株能降解羽毛角蛋白的细菌,经形态学观察和生理生化实验,初步鉴定为短小芽孢杆菌,且命名为短小芽孢杆菌B-15.