弓形虫两种保种方法的试验

目的寻求一个简便、适宜的弓形虫保种方法。方法采用不同温度的冷冻保存法和细胞培养保存法对弓形虫保存进行了试验研究,为深入研究弓形虫提供保证。结果弓形虫在液氮(-196℃)、-70℃能长期保存,4℃能保存14 d。通过细胞培养能获得大量的弓形虫滋养体,对培养细胞的选择性不强。结论两种保种方法保存后弓形虫毒力不变。     

清洁级地鼠种子群的建立

为了将普通级地鼠净化成清洁级地鼠，采用了不同的净化方法，并将净化仔鼠饲养在不同的设施中。结果，采用检测筛选加药物净化和剖腹手术相结合的方法，经检测可使普通级地鼠达到清洁级地鼠国家标准，并建立了清洁级地鼠种子群。     

弓形虫传播途径的实验研究

弓形虫传播途径的实验研究杨月中，曾丽（云南农业大学动物科技学院）田保平（中国科学院昆明动物研究所）弓形虫可引起人和众多动物的感染。它的传播途径复杂，既可发生垂直的先天感染，又可发生水平的获得感染［１］。人和动物可通过食入受感染猫粪中的成熟卵囊，也可通...     

实验用兔弓形虫病血清学调查

兔弓形虫病的病原为刚地弓形虫。本病是一种世界性分布的人畜共患原虫病，在多种动物和人中广泛传播，对人畜和兔的危害相当严重。本病临床表现复杂，诊断较难。建立准确快速的诊断方法是控制弓形虫病的重要措施之一，在临床工作中以病原诊断作为弓形虫病的诊断依据存在很大困难，故目前多采用免疫学诊断方法，敏感性高和特异性强的血清学检测方法，能够准确地检测出阳性兔和评定兔群的感染率，为兔弓形虫病的免疫诊断和预防控制提供了科学依据。本实验主要是通过IHA（间接血凝试验）实验用兔血样进行检测。     

弓形虫病免疫的研究

在用低浓度犊牛血清（２．５％）和不含血清的１６４０培养液培养的ＢＨＫ－２１细胞中，接种毒中不同用弓形虫ＧＪＳ和ＱＨＯ株，于５％ＣＯ２３７℃培养。结果两虫蛛的生物学特性存在一定差异；在含２．５％血清培养液培养的细胞中，虫全繁殖显示两个高峰，在无血清条件下只有一个高峰值，ＢＨＫ－２１细菌在含虫、不含虫及含血清和不含血清条件下元旦只胡一个高峰值，两虫株培养上清蛋白含量均以递增方式，至１９０小时蛋白含量较     

弓形虫体液免疫的研究现状

阐述弓形虫体液免疫的现状,指出选择功能性抗原,转换机体免疫类型是今后弓形虫免疫防制的方向。     

实验用兔弓形虫病血清学调查

本试验通过免疫胶体金试纸对实验用50只兔血样进行检测,调查弓形虫病的感染情况,结果发现,弓形虫感染的阳性率为7%。     

磺胺氯吡嗪处理弓形虫速殖子抑制消减文库的构建和初步分析

为了研究和探索磺胺氯吡嗪抗弓形虫的作用机理,构建磺胺氯吡嗪处理弓形虫的抑制性消减文库.将刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株速殖子腹腔注射(10000个/只鼠)感染昆明系小鼠,大量收集并纯化速殖子.用250 mg/mL磺胺氯吡嗪PBS溶液和PBS分别浸泡速殖子,37℃恒温箱孵育2h,分别提取虫体的总RNA和mRNA,以PBS处理的正常虫体cDNA为驱动组,以药物处理虫体cDNA为实验组,构建药物处理前后弓形虫速殖子的抑制性消减文库,对部分阳性克隆进行测序和序列分析.结果显示,提取的虫体总RNA纯度高,合成的双链cDNA经RsaⅠ酶切反应较完全;从消减文库中随机选择100个阳性克隆进行PCR扩增,其插入片段长度在200～750 bp之间,文库的重组率达93％以上;随机挑取30个阳性克隆进行测序,获得11个单一序列,Blast分析显示有7个单一有效EST序列与已知蛋白质相似性较高.结果表明,已成功构建磺胺氯吡嗪处理弓形虫速殖子的抑制性消减cDNA文库,并对部分阳性克隆进行了初步分析,为深入研究磺胺氯吡嗪的抗弓形虫机制和寻找药物作用的关键靶分子奠定了基础.     

弓形虫保种与转种的简易方法

采用小鼠传代与体外4℃冰箱保存相结合的方法，对弓形虫虫株进行保种，转种成功率达100％，为虫株的保存提供了又一种简便可靠的方法。     

弓形虫,泰氏锥虫和伊氏锥虫超低温冷冻保存的试验研究

根据液氮(-196℃)超低温冷冻保存组织细胞的原理,本文选用Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ号保护剂分别对来自体外培养的弓形虫和泰氏锥虫、小鼠血液内的伊氏锥虫以及小鼠腹腔液内的弓形虫进行超低温冷冻保存试验。试验表明,在没有特殊逐步降温设备的情况下,直接冻存法比间接冻存法更方便,效果更为确实。截至报道之日止,弓形虫保存已达954天,泰氏锥虫达1189天,伊氏锥虫达1089天,虫体形态、活力、增殖力和致病性均无明显改变,为虫体的长期保存提供了一较为简便可靠的方法。     

纯化弓形虫速殖子的两种物理法探讨

采用纤维素粉过滤法和多聚磷酸纤维薄膜过滤法，对人工感染的小鼠腹腔液中的弓形虫速殖子进行细胞清除率和回收率比较。前者白细胞平均清除率９５．４％，红细胞平均清除率９０．１％，虫体回收率３３．１％；后者白细胞清除率８１．６％，红细胞清除率８０．５％，虫体回收率４８．６％。在红、白细胞清除率上，纤维素粉过滤法优于薄膜过滤法，在虫体回收率上后者略优于前者。     

弓形虫P30基因及其功能

弓形虫 P30基因所编码的蛋白为弓形虫主要表面抗原 SAG1 ,其约占速殖子总蛋白量的 5 %,SAG1对虫体侵入宿主细胞及其毒力具重要性 ,并有高度免疫原性和免疫保护性 ,被用于弓形虫疫苗的研制和弓形虫感染的分子诊断     

河北省猪弓形虫的血清学检测

应用间接血凝试验(IHA)对采自我省11个地区定点屠宰厂,养殖场及散养户的1300份猪血清进行了弓形虫病抗体检测,结果表明,阳性464份,阳性率为35.69%。     

弓形虫直接凝集试验改良法的研究

用弓形虫直接凝集试验改良法（ＭＤＡＴ）、染色试验（ＤＴ）和两种间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）平行检测了国内外的７１份人血清，结果表明ＭＤＡＴ与其它试验符合率达９１．８～９６．０％；同时显示有较高的敏感性和特异性。用ＷＨＯ国际生物标准化实验室的标准血清定量测得ＭＤＡＴ的灵敏度为０．０９ＩＵ／ｍｌ，接近于改良前方法和ＤＴ的灵敏度，高于国外同类试剂盒的灵敏度。作者认为本ＭＤＡＴ具有在基层单位推广和应用的潜在价值。     

几种药物抗小鼠弓形虫感染的初步效果

为寻找有效的抗弓形虫药物,选择了临床上使用较多的6种药物进行抗小鼠弓形虫感染初步实验。用刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）长宁株（CN株）速殖子,按1×104/鼠腹腔接种昆明系雄性小白鼠,接种后4 h用药组通过灌服或饮水用药,每鼠剂量分别为阿奇霉素（Azithromycin）150、120、90 mg/（kg·d）,泰妙菌素（Tiamulin）100 mg/（kg·d）,克拉霉素（Clarithromycin）15 mg/（kg·d）,磺胺氯吡嗪钠（Sulfachloropyrazine sodium）150、120、90 mg/（kg·d）,甲硝唑（Metronidazole）150 mg/（kg·d）,甲氧苄胺嘧啶（Trimethoprim）10 mg/（kg·d）,连续用药5~6 d,接种后10 d结束实验。结果阿奇霉素、磺胺氯吡嗪钠组的平均存活天数明显高于感染不用药组（P〈0.05）,泰妙菌素、克拉霉素、甲硝唑、甲氧苄胺嘧啶组在所用剂量下的存活天数与感染不用药组无明显差异（P〉0.05）;用药后4－7 d,取腹腔液镜检速殖子,与感染不用药组相比,阿奇霉素组减少70%以上,磺胺氯吡嗪钠组减少99%以上。研究结果提示,磺胺氯吡嗪钠具有良好的抗弓形虫效果,其推荐剂量与用药疗程还有待进一步研究。     

应用大转瓶结合微载体培养大量生产疫苗的研究

在普通转瓶细胞培养系统中加入微载体进行细胞培养试验。在几种微载体和营养液培养比较试验的基础上,对转瓶单层培养、转瓶载体培养及转瓶单层培养加载体培养三种方法进行了比较。进而应用10000ml大转瓶,用牛胎皮肤继代细胞、IBRS-2细胞,以效果较好的转瓶单层培养加载体培养的方法,进行了病毒疫苗生产试验。经3个毒株、8个大转瓶培养试验,证明培养量可增加1倍,而且TCID_(50)/ml均在8.0以上,方法简便易行,无需特殊的设备与条件。