黄芪多糖对脑缺血再灌注大鼠脑组织Caspase-3表达及形态学的影响

为了探讨黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织Caspase-3表达及形态学的影响.选取SPF级Wistar大鼠72只,随机分为假手术组、模型对照组、阳性药物对照组、黄芪高剂量组、黄芪中剂量组、黄芪低剂量组,每组12只;采用改良线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,各药物组分别给予相应药物15d,后处死检测,HE染色观察各组大鼠脑组织形态学变化,免疫组化法检测各组大鼠脑组织中Caspase-3蛋白的表达水平.结果表明:假手术组大鼠Caspase-3表达较弱,模型组较假手术组明显增多(P0.01);与模型组比较,其余各组大鼠的Caspase-3表达均有显著减少(P0.05),以黄芪多糖高剂量组大鼠尤为明显.形态学试验结果表明模型组大鼠可见神经元大片消失,间质疏松,残余细胞胞核固缩、染色质凝聚,其余各组神经元细胞发生凋亡的程度较模型组轻,以黄芪高剂量组效果明显.说明黄芪多糖能显著抑制脑缺血再灌注损伤后的神经细胞凋亡,其作用可能是通过降低Caspase-3的表达实现的,且作用效果呈剂量依赖性.     

彩色多普勒阴道超声照射对人早孕胚胎绒毛超微结构的影响

目的 探讨彩色多普勒阴道超声不同照射时间对人早孕胚胎绒毛超微结构的影响.方法96例拟行人工流产的早期妊娠孕妇患者随机分为A、B、C、D、E组,分别采用彩色多普勒阴道超声照射0、5、10、15、20 min.6～8 h后行人流术取绒毛,透射电子显微镜观察.结果 阴道超声引起的胚胎绒毛超微结构变化主要发生在合体滋养层,其次是细胞滋养层,间质改变最少,基膜基本无改变.A组超微结构正常,B～E组胚胎绒毛超微结构均有不同程度变化,其中D组变异率高于A～C组(P＜0.05),E组变异率高于A～D组(P＜0.05).结论 阴道彩色多普勒持续照射超过10 min对人早孕胚胎绒毛超微结构有明显影响.     

内毒素对肝脏Caspase-3蛋白表达的影响及阳离子A的保护效应

为研究内毒素(ET)致大鼠肝细胞凋亡变化、对肝脏Caspase-3蛋白表达的影响及阳离子A(CA)的保护效应.将试验动物随机分为3组:对照组(Ⅰ组)、ET组(Ⅱ组)和CA保护组(Ⅲ组).3组动物经相应处理后分别在3、4、8、12 h采集肝脏检测肝细胞凋亡情况和Caspase-3蛋白的表达情况.结果表明,肝细胞凋亡与Caspase-3蛋白的表达成正相关的关系.ET可上调Caspase-3蛋白在肝脏的表达,诱导肝细胞凋亡,最终导致肝脏受损;而CA则能明显下调Caspase-3在肝脏的表达,抑制肝细胞凋亡,对由ET诱导的肝损伤具有显著的保护效应.     

心康冲剂改善慢性心衰模型大鼠心肌凋亡及调控Caspase-3/9的表达

目的 探讨心康冲剂对心衰大鼠Caspase-3、Caspase-9表达的调控作用。方法 58只SD大鼠分为正常组10只,模型组、心康组及对照组各16只,造模完后,心康组给予心康冲剂溶液0.5 g/kg灌服,对照组予芪苈强心胶囊溶液0.06 g/kg灌服。采用心脏彩超检测心功能;心脏切片行TUNNEL染色法观察心肌细胞凋亡;心肌组织采用Real-time PCR法及免疫组化法检测Caspase-3、Caspase-9基因及蛋白质表达。结果 与正常组比,模型组大鼠Caspase-3及Caspase-9的mRNA与蛋白表达显著增加（P<0.01）,TUNNEL染色观察细胞凋亡明显增多;与模型组比较,心康组大鼠心肌凋亡减轻, Caspase-9 mRNA、Caspase-3 mRNA及蛋白明显下降（P<0.01）;与对照组相比,心康组心肌细胞凋亡相对降低,Caspase-3蛋白表达下降（P<0.05）。结论 心康冲剂可调控下调Caspase-3、Caspase-9表达抗心衰。     

复方中药制剂对SD大鼠胸腺组织结构及Caspase-3蛋白分布的影响

为研究由炒白术、山楂、黄芪、板蓝根、茯苓、陈皮、甘草、山药制成的复方中药制剂对SD大鼠胸腺组织结构及其Caspase-3蛋白分布的影响。选择60只SPF级断奶SD大鼠,随机分为对照组、1.5 mL·kg^-1组、3.0 mL·kg^-1组和6.0 mL·kg^-1组,每组15只,预饲1周后按每千克体质量分别定时灌胃3.0 mL蒸馏水、1.5 mL、3.0 mL和6.0 mL药液(每mL含1 g生药)。至90 d,各处理组SD大鼠禁食禁水3 h,称量、麻醉、处死后取完整的胸腺称量,立即投入4%的多聚甲醛磷酸缓冲液固定72 h,制作石蜡组织切片,经HE、网状纤维和Caspase-3免疫组化染色,显微观察,Image-pro PLUS 6.0软件分析并摄影。结果表明,按每kg体质量灌胃本复方中药制剂3.0 mL可显著增加胸腺皮质区且胸腺的生长指数显著高于对照组(P<0.05)。网状纤维主要分布于SD大鼠胸腺髓质部,3.0 mL·kg^-1剂量组网状纤维含量较对照组显著减少。各实验组均不同程度抑制Caspase-3蛋白的出现,其中以3.0 mL·kg^-1剂量组最为显著。说明灌胃3.0 mL·kg^-1复方中药制剂可改善SD大鼠胸腺组织结构,延缓其结构和功能退化。     

红景天苷对UVB辐射HaCat细胞活性及Caspase-3/9蛋白表达的影响

目的 研究红景天苷对中波紫外线（ultraviolet B, UVB）辐射HaCat细胞增殖及Caspase-3、Caspase-9蛋白表达的作用。方法 将HaCat细胞分为6组：即正常对照组（Ⅰ组）、红景天苷中剂量组（Ⅱ组）、UVB辐射组（Ⅲ组）、UVB+红景天苷低剂量组（Ⅳ组）、UVB+红景天苷中剂量组（Ⅴ组）、UVB+红景天苷高剂量组（Ⅵ组）,Ⅰ组未经任何处理,Ⅱ组加入40 μg/mL的红景天苷,Ⅲ组接受200 mJ/cm²剂量紫外线照射,Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组分别加入10、40、80 μg/mL红景天苷并进行200 mJ/cm²紫外线照射。HaCat细胞培养24 h后,采用MTT法检测细胞活力,流式细胞仪观察细胞周期,Western blotting法检测Caspase-3、Caspase-9表达的蛋白水平。结果 MTT结果显示随着红景天苷浓度的增加,HaCat细胞的生存率逐渐增加;流式细胞仪检测细胞周期显示HaCat细胞的S峰值随着红景天苷浓度的增加呈现上升趋势,Ⅵ组S峰值高于Ⅱ组;Western blotting显示Ⅵ组Caspase-3/9的蛋白表达量均有下降。结论 红景天苷可通过抑制Caspase-3和Caspase-9蛋白表达,减少UVB诱导HaCat细胞凋亡。     

Caspase-3和Bcl-2在小鼠出生后睾丸发育和精子发生过程的表达

采用免疫组织化学方法研究了Caspase-3和Bcl-2蛋白在7日龄、14日龄、28日龄和56日龄小鼠睾丸组织的表达,旨在观察小鼠出生后睾丸发育和精子发生过程中细胞凋亡相关蛋白Caspase-3和Bcl-2的定位。结果发现Caspase-3在7日龄、14日龄小鼠睾丸组织表达于曲精小管中央和管周生精细胞,在28日龄和56日龄表达于管周精原细胞与支持细胞,初级精母细胞及以后各级生精细胞无Caspase-3表达;Bcl-2在7日龄、14日龄睾丸组织表达于曲精小管中央和管周生精细胞,28日龄和56日龄广泛表达于初级精母细胞以后各级生精细胞,精原细胞选择性表达Bcl-2。Caspase-3和Bcl-2在小鼠睾丸组织发育和精子发生过程中表达。在小鼠出生后睾丸发育的早期,Caspase-3和Bcl-2表达于曲精小管中央,参与曲精小管管腔形成的调节;在性成熟后的睾丸组织中Caspase-3表达于精原细胞,诱导其凋亡;Bcl-2于初级精母细胞以后各级生精细胞高表达,抑制精母以后生殖细胞的凋亡。     

热应激对猪睾丸Cyt-C和Caspase-3表达的影响

【目的】环境高温影响猪精子发生和精液品质,但其分子机制尚不清楚。为此探索环境温度升高导致的热应激对猪睾丸细胞凋亡调节蛋白Cyt-C和Caspase-3表达的影响。【方法】性成熟长白公猪9头,对照组3头,饲养在20—27℃的猪舍环境;短期热应激处理组(heat stress 7 d,HS7d)3头,每天置37—40℃的猪舍环境3 h,连续7 d;一个精子发生周期热应激处理组(heat stress 42 d,HS42d)3头,每天置37—40℃的猪舍环境3 h,连续42 d;每天于热应激处理后将猪驱赶回20—27℃的猪舍。手术摘取睾丸组织,用QRT-PCR、Western blot和免疫组织化学方法检测Cyt-C和Caspase-3表达与定位的变化。【结果】QPT-PCR结果显示,与对照组相比,热应激处理7 d组和42 d组,Cyt-C和Caspase-3m RNA的相对表达量均显著升高;热应激处理7 d组Cyt-C和Caspase-3m RNA的相对表达量最高。Western blot结果显示,热应激处理7 d组和42 d组Cyt-C和Caspase-3蛋白水平与对照组相比均显著升高;热应激处理7 d组Cyt-C和Caspase-3的蛋白表达水平最高。免疫组织化学研究发现,Cyt-C在猪睾丸组织中免疫反应阳性物定位于间质细胞、支持细胞和各个发育阶段生精细胞的胞质中,在生精细胞Cyt-C低表达于精原细胞,高表达于减数分裂后精母细胞和精子细胞。热应激处理导致Cyt-C的胞质内定位更加弥散,提示Cyt-C从线粒体到胞质的释放。Caspase-3在间质细胞和精原细胞低表达,大量减数分裂后的生精细胞呈Caspase-3阳性。与对照组相比,热应激处理导致部分支持细胞Caspase-3的表达,大量生精细胞的细胞核呈Caspase-3阳性着色。【结论】高温热应激处理导致猪睾丸Cyt-C和Caspase-3的蛋白和m RNA表达水平升高、细胞定位改变,提示Cyt-C和Caspase-3可能与热应激导致的猪精液品质下降存在关联。     

银杏叶提取物对急性肝衰竭大鼠肝脏Caspase-8的影响

为了研究银杏叶提取物(GBE)对由硫代乙酰胺(TAA)所致肝损伤大鼠肝脏的保护作用及其对Caspase-8的影响,并探讨其作用机制.将大鼠分为5组,每组10只,GBE低、中、高剂量组(50、100、200mg/kg)连续灌服GBE 30 d,1次/d,正常对照组和模型组分别给予等体积的生理盐水;模型组、GBE低、中、高剂量组第28天用TAA(300 mg/kg)腹腔注射,正常对照组腹腔注射等体积的生理盐水.结果表明,模型组与正常对照组相比,血清中谷丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平升高,肝组织中Caspase-8在mRNA水平上调表达;而GBE组与模型组相比,血清中ALT、AST水平降低,肝组织中Caspase-8在mRNA水平下调表达.GBE可通过调节Caspase-8的表达抑制急性肝衰竭肝细胞调亡,从而对肝脏起到保护作用.     

超声照射对人胚肾细胞凋亡的影响

目的了解诊断超声照射对体外培养的人胚肾（HEK-293）细胞凋亡的影响。方法 HEK-293细胞用腹部超声探头（3.5 MHz、MI 0.8）照射0、10、20、30 min,再作Hoechst 33258染色,观察细胞凋亡的变化。结果超声照射10 min后,细胞凋亡率与假照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;超声照射20 min后,细胞凋亡率明显高于假照组（P〈0.05）,其中以照射30 min较为显著（P〈0.01）。结论特定剂量的超声照射可诱导人胚肾细胞凋亡增加。     

E-64对绵羊卵母细胞体外成熟过程中caspase表达规律的影响

为了研究E-64对绵羊卵母细胞体外成熟过程中caspase表达的影响,从而探究E-64抑制卵母细胞凋亡的基本途径。本试验利用双夹心ELISA方法,研究体外成熟过程中绵羊卵母细胞内caspase-3,caspase-8以及caspase-9的蛋白表达水平及酶活水平的变化规律,以及成熟液中添加E-64对其产生的影响。结果表明:caspase-3、caspase-8和caspase-9的蛋白表达水平均呈先升高后降低的变化规律,caspase-3和caspase-9的活性与其蛋白表达的变化规律相一致,而caspase-8的活性则呈逐渐升高的变化规律;成熟液中添加E-64,对caspase-3、caspase-8和caspase-9的蛋白表达水平均无显著性(P0.05)影响,但可以降低caspase-8和caspase-9的酶活性(P0.05),而对caspase-3的酶活性无显著性影响(P0.05)。表明E-64通过在酶活性水平上下调死亡受体途径中caspase-8的活性和线粒体途径中caspase-9的活性,从而降低了卵母细胞体外成熟过程中的细胞凋亡刺激。     

隐丹参酮对人胆管癌HCCC-9810细胞增殖、survivin基因及caspase-3蛋白表达的影响

目的 了解隐丹参酮对人胆管癌HCCC-9810细胞增殖及凋亡相关因子surv1vin、caspase-3表达的影响.方法 HCCC-9810细胞用不同浓度隐丹参酮处理24、48、72 h,分别用MTT法、RT-PCR、Western blot检测细胞生长及survivin mRNA、caspase-3蛋白表达.结果 隐丹参酮抑制HCCC-9810细胞增殖;随时间延长,HCCC-9810细胞中survivin mRNA表达逐渐降低,而caspase-3蛋白表达逐渐增高(P＜0.05).结论 隐丹参酮可通过下调survivin基因表达及上调caspase-3蛋白表达来诱导HCCC-9810细胞凋亡.     

羊胚胎移植B超监测技术及其影像的研究

利用AMI-900型兽用B超,对羊胚胎移植进行了全程监测．主要包括供、受体羊选择前的普查,供体超排效果的监测,受体妊娠及胚胎发育监测,子宫、卵巢恢复状况监测等．根据所得资料和经验,总结出了羊胚胎移植中的B超监测技术及其声像图表现．     

宰后鸭肉骨骼肌中caspase-3活化对嫩度的影响

【目的】探讨caspase-3在宰后鸭肉中是否被激活以及参与改善宰后鸭肉的嫩度,为进一步用细胞凋亡机理阐明水禽类肉的成熟机理提供新的试验依据。【方法】分析检测宰后鸭胸肉和腿肉胞浆中细胞色素-C含量变化,caspase-3、-8和-9活化片段和酶活力变化、PARP降解片段的表达水平以及宰后鸭肉剪切力的变化情况。【结果】宰后鸭肉骨骼肌胞浆中细胞色素-C含量均显著升高（P＜0.05）,caspase-3、-8和-9酶原分别劈开成17、18和23 kD左右的活化片段,酶活力于宰后均迅速升高（P＜0.05）;作为caspase系统的标志性蛋白,胸肉和腿肉中PARP蛋白均被劈开成小片段,且剪切力值于宰后4-24 h均显著减小（P＜0.05）。相关性分析的结果显示,宰后胸肉和腿肉中caspase-3酶活力和caspase-8,caspase-9酶活力变化均呈显著正相关（P＜0.05）,与宰后剪切力值的变化呈极显著负相关（P＜0.01）。【结论】酶原的激活,酶活力的上升表明caspase-8和caspase-9各自介导的激活途径共同参与了鸭肉caspase-3的活化;PARP的降解,剪切力值的显著下降则表明活化的caspase-3直接或间接参与了鸭肉的成熟过程。     

异硫氰酸丙烯酯对大鼠肝细胞凋亡的影响

为研究异硫氰酸丙烯酯对细胞活性的影响,试验以20mg·L-1的内毒素(LPS)和1.25×10-5mol·L-1的异硫氰酸丙稀酯(AITC)分别或共同处理大鼠肝细胞3h后,用AnnexinV/PI双染色,流式细胞术分析细胞凋亡;反转录酶聚合酶链反应(RT-RCR)分析FasL和Caspase-8的表达情况。结果表明,AITC能有效抑制LPS(20mg·L-1)诱导的肝细胞凋亡,且在此过程中,FasL、Caspase-8的表达量均有减少。结果提示AITC可以通过Fas途径抑制LPS诱导的肝细胞凋亡,其作用有可能导致肿瘤的发生。     

氧分压对猪卵母细胞成熟尧受精及早期胚胎发育的影响

研究利用两种氧分压（5%和20%）培养卵母细胞并进行IVF试验,同时使用两种氧分压培养孤雌（PA）胚胎、体外受精（IVF）胚胎和克隆(NT) 胚胎,以探寻猪的最佳体外培养环境。结果显示：低氧分压不利于猪卵母细胞的体外成熟,其成熟率极显著低于高氧培养的,但对低氧培养的卵母细胞进行IVF时,其卵裂率和囊胚率均极显著高于高氧培养的卵母细胞;IVF进行精卵孵育时,低氧环境下,其胚胎卵裂率和囊胚率均显著高于高氧环境下的;PA胚胎、IVF胚胎和NT胚胎用两种氧分压培养,低氧条件下IVF胚胎的发育能力高于高氧培养的,而PA胚胎和NT胚胎差异不显著。试验结果表明,低氧培养虽不利于卵母细胞的成熟,但有利于其以后的胚胎发育,且低氧环境下IVF胚胎的发育能力高于高氧环境下的。     

生理电场对早期胚胎发育的影响

胚胎发育涉及一系列复杂的生理学、细胞生物学以及基因组学过程。已有研究表明,胚胎发育早期特别是原肠胚和神经胚时期存在着一定强度的内源生理电场,当存在类似内源生理电场强度的外源电场时,能引导细胞迁移、控制细胞极化、调节细胞增殖和分化,从而在一定程度上影响胚胎发育。本研究主要就内源生理及外源电场对胚胎发育的引导或干扰作用进行综述,以期为胚胎发育研究提供新思路。