乳粉中单核细胞增生李斯特氏菌能力验证结果与分析

为提高实验室微生物检测能力,实验室参加由中国检验检疫科学研究院测试评价中心组织的乳粉中单核细胞增生李斯特氏菌的检测能力验证计划。按照GB 4789.30—2016食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验第一法单核细胞增生李斯特氏菌定性检验对样品进行处理、培养,并对可疑菌落进行初筛及生化鉴定。样品18-X650未检出单核细胞增生李斯特氏菌25 m L,样品18-Y493未检出单核细胞增生李斯特氏菌25 m L。结果表明,中国检验检疫科学研究院测试评价中心组织对该次试验结果评价为满意,对第三方人员对实验室的检测能力判断提供参考。     

燕麦中菌落总数检测能力验证研究

为了了解福建省福清市食品企业菌落总数检测能力,福清市质量技术监督局组织实施了燕麦中菌落总数检测能力验证工作,福清市45家实验室参加了本次能力验证。介绍了燕麦中菌落总数能力验证计划的实施过程,包括方案设计、样品设备、均匀性稳定性实验、结果统计能力评价,并对能力验证结果进行了技术分析和技术建议。结果表明,菌落总数检测满意结果率88.9%,参加能力验证的绝大多数企业能准确检测菌落水平,福清市食品企业的菌落总数检测人员具有较高的水平。出现可疑结果和不满意结果的企业多数是饮用水企业,应加强饮用水企业的出厂检验监管。     

石油污染土壤总DNA的提取

寻找一种可获得高浓度、大片段的石油污染土壤微生物总DNA的提取方法。分别采用SDS的细胞裂解法、溶菌酶和SDS裂解法、实验室改进法、试剂盒法提取石油污染土壤总DNA。研究结果表明4种方法都可获得石油污染土壤微生物总DNA,但每种方法在提取量和纯度上有一定差异;实验室改进法提取的DNA产率是最高的,试剂盒法提取DNA纯度最高。实验室改进法获得的微生物总DNA,稀释20倍可直接用于PCR扩增。土壤样品经过一定的预处理后提取的DNA片段大小在23100 bp,实验室改进法提取土壤微生物总DNA产率、纯度较好,不经过纯化可直接用于PCR扩增及其他分子生物学实验的操作。     

食品能力验证样品中沙门氏菌的分离及鉴定

结合自身参加食品沙门氏菌能力验证的经历,总结能力验证中沙门氏菌分离与鉴定的关键点,并就如何提高沙门氏菌乃至整个实验室的检测水平进行讨论。     

国内外水产品药物残留检测能力验证比对分析与发展建议

为进一步促进中国水产品药物残留检测能力验证的发展,提高中国水产品药物残留检测能力验证的水平、促进国际及国内各部委间组织的能力验证互认,笔者概述了国际著名权威机构FAPAS、APLAC及国内CNCA、中国合格评定委员会(CNAS)、中国检科院测试评价中心(ACAS)、农业部等对水产品药物残留检测能力的验证情况,比对分析了中国与国际权威机构在能力验证考核项目、样品制备方法、检测方法要求、结果反馈等方面的差异,并针对中国在水产品药物残留检测能力验证方面存在的问题提出了加强新参数项目研究、丰富样品制备考核手段、改进结果评定方法、加强技术交流等建议,以期为完善中国水产品药物残留检测能力验证活动提供参考。     

FAPAS能力验证样品中重金属的测定

分析化学检测实验室参与食品分析水平评估计划(Food Analysis Performance Assessment Scheme,FAPAS)国际比对计划结果,探讨能力验证工作中的有效质量控制措施。通过总结化学检测工作中的部分经验,重点分析了在FAPAS能力验证中重金属测定的关键点,并就提高实验室的检测水平、加强质量控制有效性及确保能力验证判断结果的准确性等进行了讨论。     

锦鲤疱疹病毒病病原检测能力验证结果分析

为了提高中国锦鲤疱疹病毒病(KHVD)病原检测的整体水平,加强相关实验室检测锦鲤疱疹病毒(KHV)的能力,2014—2016年开展了3次能力验证项目。能力验证样品为盲样,使用鲤鱼组织匀浆液,与包含了KHV TK基因片段和Sph基因片段的2种重组质粒溶液混合制成。对盲样进行了均匀性和稳定性检测。采用水产行业标准《鲤疱疹病毒检测方法 第1部分：锦鲤疱疹病毒》(SC/T 7212.1-2011)中,推荐使用的聚合酶链式反应(PCR)方法进行病毒检测,并对各参加单位锦鲤疱疹病毒的检测结果进行分析。2014年能力验证第一轮测试结果满意率为58%,第二轮满意率为96%;2015年能力验证第一轮测试结果满意率为77%,第二轮满意率为89%;2016年能力验证第一轮测试结果满意率为82.69%,第二轮满意率为92.73%。通过2014至2016年的能力验证活动,大多实验室具备了锦鲤疱疹病毒PCR检测能力和质量管理水平,可以承担锦鲤疱疹病毒的检测和监测工作。     

基因扩增检测领域的食品检测实验室认可应用研究

检测和校准实验室认可准则,包含了食品检测实验室为证明其按质量管理体系运行、具有全部技术能力并能提供正确技术测试结果所必须满足的全部要求。基因扩增是指以扩增检测DNA或RNA为方法的检测技术,适用于从事基因扩增检测领域食品质量检测类相关实验室的认可活动。从实验室和人员情况、管理体系、服务和供应品性能的技术要求、客户服务等方面阐述了管理要求,从人员情况、设施与环境条件、检验方法和数据控制、仪器和设备、测量的溯源性、测试及校准物品的处置、技术结果的质量保证和报告等方面阐述了技术要求。     

利用若干单株混合提取DNA方法进行玉米群体SSR的分析

以金皇后玉米群体90个单株：DNA和6个自交系DNA为供试材料，利用15对SSR引物，比较了同一群体4种DNA样品处理(单株DNA样品、3个单株混合DNA样品、10个单株混合DNA样品、15个单株混合DNA样品)的SSR遗传多态性。结果表明，利用单株DNA样品能获得等位基因数、基因频率、基因型杂合度等较全面的遗传信息，适宜进行单个或少量群体的遗传结构研究，但试验工作量大；利用混合DNA样品所能获得的遗传信息有所减少，比较4种DNA样品处理的检测结果发现，15个单株混合样品的检测结果误差较大，而采用3～10个单株DNA混合的样品基本可以反映出一个群体的等位基因数目和SSR带型的差异，由于试验工作量大大减少，可以应用于较多玉米群体间遗传差异的比较。     

山西种子检验能力验证情况初报

“实验室能力验证”是国际标准化组织为提高实验室内部质量管理而制订的一项通用标准，是实验室自身质量控制和验证的一种重要手段。通过能力验证可以对实验室的检测工作质量及能力做出评价，发现实验室在检测过程中可能存在的问题，提出改进方法和纠正措施，从而提高检验水平，增强客户对检验室所出具的检测数据的信任度。为此，山西省种子管理站于2005年3月在全省范围内开展了达标检验室的能力验证工作。     

利用流式细胞术鉴定黑麦草倍性方法的研究

为了测定几种不同倍性的黑麦草核DNA含量,利用流式细胞术（Flow Cytometry,FCM）检测黑麦草的染色体倍性,并通过传统的染色体制片的方法对其结果进行验证。结果表明不同品种间细胞核DNA含量差异显著,且随着倍性水平的增加,细胞核DNA相对含量随之成倍增加。流式细胞术检测结果与染色体制片检测结果一致。利用流式细胞仪测定黑麦草核DNA含量,具有样品制备简单,测量快速,精度高等优点,是进行倍性鉴定的理想方法。     

农作物种子转基因成分检测能力验证样品制备技术分析与总结

能力验证是评价检验机构技术水平和质量控制的重要手段,对近年来陕西省农作物种子检验站承担的各项转基因成分检测能力验证样品的制备工作进行回顾,总结了在能力验证样品制备工作中获取的经验与教训,分析了样品制备工作中一些好的做法和存在的问题,并提出了进一步改进的建议,为能力验证样品制备工作更为科学、规范地开展提供参考。     

3种试剂盒对烟丝DNA提取及其微生物群落多样性分析效果的比较

筛选能高效提取烟丝DNA,并能获取其微生物群落多样性较高的试剂盒。选择3种不同的试剂盒提取烟丝DNA,比较DNA的纯度和浓度,并将提取的DNA进行原核生物16S rRNA基因V3～V4区和真菌ITS2区的PCR扩增及高通量扩增子测序,进而比较烟丝样品微生物群落多样性和结构差异。结果表明:(1)DNeasy?PowerPlant?Pro Kit植物基因组提取试剂盒(P)提取的烟丝DNA浓度为(103.67±1.7) ng/μL,显著高于其他试剂盒(P0.01),且3种试剂盒提取的DNA纯度均达到合格水平。(2)3种试剂盒提取的DNA样本均能反映样本中原核生物群落多样性与结构,从门分类水平看,试剂盒P检测到11个门类,E.Z.N.A.TMHP Plant DNA Kit植物基因组提取试剂盒(M)检测到8个门类,DNeasy?PowerSoil?Kit土壤基因组提取试剂盒(S)检测到5个门类;从属分类水平看,试剂盒P检测到83个属,试剂盒S检测到71个属,试剂盒M检测到69个属。(3)3种试剂盒均能检测到Unclassified类群、子囊菌门Ascomycota、接合菌门Zygomycota和Others等4个真菌门类,但试剂盒P检测到的类群比例最高;在属分类水平上,试剂盒P检测出30个属,试剂盒S检测出20个属,试剂盒M检测出11个属。DNeasy?PowerPlant?Pro Kit植物基因组提取试剂盒(P)能有效提取烟丝及其所含微生物的总DNA,并能检测出更高的烟丝微生物群落多样性,推荐该试剂盒用于烟丝样品中微生物群落多样性与结构的分析。     

不同试剂盒对烟丝DNA提取及其微生物群落多样性分析效果的比较

筛选能高效提取烟丝DNA,并能获取其微生物群落多样性较高的试剂盒。选择3种不同的试剂盒提取烟丝DNA,比较DNA的纯度和浓度,并将提取的DNA进行原核生物16S rRNA基因V3~V4区和真菌ITS2区的PCR扩增及扩增子高通量测序,进而比较烟丝样品微生物群落多样性和结构差异。结果表明：（1）DNeasy? PowerPlant? Pro Kit植物基因组提取试剂盒(P)提取的烟丝DNA浓度为(103.67±1.7) ng/μL,显著高于其他试剂盒(P<0.01),且3种试剂盒提取的DNA纯度均达到合格水平。（2）3种试剂盒提取的DNA样本均能反映样本中原核生物群落多样性与结构,从门分类水平看,试剂盒P检测到11个门类,E.Z.N.A.TM HP Plant DNA Kit植物基因组提取试剂盒(M)检测到8个门类,DNeasy? PowerSoil? Kit土壤基因组提取试剂盒(S)检测到5个门类;从属分类水平看,试剂盒P检测到83个属,试剂盒S检测到71个属,试剂盒M检测到69个属。（3）3种试剂盒均能检测到Unclassified类群、子囊菌门Ascomycota、接合菌门Zygomycota和Others等4个真菌门类,但试剂盒P检测到的类群比例最高;在属分类水平上,试剂盒P检测出30个属,试剂盒S检测出20个属,试剂盒M检测出11个属。DNeasy? PowerPlant? Pro Kit植物基因组提取试剂盒(P)能有效提取烟丝及其所含微生物的总DNA,并能检测出更高的烟丝微生物群落多样性,推荐该试剂盒用于烟丝样品中微生物群落多样性与结构的分析。     

黄曲霉毒素B_1检测能力验证分析

为确保实验室对黄曲霉毒素B1实验项目的检测能力,保证检测结果的可靠性,实验室在CNAS认可周期内参加了黄曲霉毒素B1能力验证活动。对能力验证的定义、目的、实施过程、统计方法及结果评价进行了介绍,并对黄曲霉毒素B1能力验证的测量结果进行了不确定度分析。黄曲霉毒素B1能力验证Z比分数为ZA=0.18、ZB=-1.35,能力验证获得满意结果。结果表明我中心黄曲霉毒素B1实验数据准确、可靠,CNAS认可项目有效。     

种子企业能力验证活动中存在的问题及对策

<正>1种子企业能力验证活动的作用及现状针对我国种子企业开展能力验证活动的作用及现状,本文分析了开展能力验证工作可能遇到的问题,并针对能力验证活动提出建议。能力验证是利用实验室间比对来判定实验室能力的活动。能力验证体系在很多领域已经逐步成型,但我国种业实验室能力验证活动起步较晚,还未能引起大家的足够重视,能力验证在种业实验室领域的应用还有待深入研究和完善。     

农业转基因生物安检中心如何做好能力验证样品的检测

能力验证是指通过检验机构间检测结果的比对来判定检验机构能力的合格评定活动.能力验证组织机构通过发送统一制作的检测样品给各个检验机构进行实际检测,再将检验机构的检测结果进行统计分析.通过各个检验机构结果的一致性来判定检验机构对于特定项目的检测能力.通过开展能力验证,可以发现检验机构存在的问题,监控检验机构的运行状态,提高其检测能力和检测水平,确保检测报告的质量.在检验机构资质考核活动中,能力验证是重要的考核方式之一.     

定量PCR快速检测动物食品中沙门菌污染

摘 要： 沙门氏菌是动物性食品中的重要食源性致病菌,建立其快速检测方法对动物性食品的质量控制具有重要作用。本研究根据沙门氏菌16srDNA、 dT fermentation等基因或DNA功能区序列设计PCR引物, 通过比较3种不同的基因组DNA提取方法,提取待检样品总DNA, 进行多基因定量PCR检测。结果表明,该方法简单快速且灵敏度高,在动物食品中的检测灵敏度可达10 CFU/g,整个检测时间在10h 以内。说明本方法对检测动物中沙门氏菌具有特异性高且灵敏、快速等特点,适用于快速、准确地检测动物中沙门氏菌的需要。     

农作物种子质量检验机构能力验证的关键环节与应对策略

能力验证是评价农作物种子质量检验机构检验能力、管理状况的必要手段和重要依据。能力验证活动一般时间紧、要求高、任务重,样品检测难度也高于平时检验,分析总结能力验证过程中易出问题的关键环节,有助于种子检验机构监控本级实验室日常运营状态,及时识别检验机构不符合或潜在不符合因素,不断进行自我修正和整改,从而能够有效提升种子检验机构的检验水平和体系管理能力。     

高通量提取西红柿基因组DNA方法探究及其在SNP分型中的应用

随着植物分子生物学的发展，植物分子试验对于大规模样品DNA提取的需求越来越大。本研究旨在开发快速、简便、高通量的DNA提取技术。以西红柿叶片为试验材料，用96孔盒对西红柿叶片进行冷冻干燥及粉碎，基于改良的SDS提取DNA方法，采取排枪“两步加样一步抽提”，简化提取步骤，实现DNA的高通量提取。该方法提取DNA样品的平均浓度在138.6 ng/μL左右，满足一般性的PCR扩增要求；琼脂糖凝胶电泳结果显示绝大部分样品泳道可见清晰完整的DNA条带，无明显降解，并伴有少量的RNA污染。利用3个等位基因特异的定量PCR基因分型系统(AQP)分子标记对192个样本进行检测，结果显示3个标记的整体检测结果良好，均能有效区分样品间的不同等位基因位点。样品的有效荧光值占比在97%～99%之间，可以用于分子标记检测或遗传群体的基因分型。本研究在前人基础上探讨了一种简便、快速、高通量的西红柿基因组DNA提取方法，对于提取其他植物叶片组织DNA同样适用，并且该方法能够成功应用于AQP等其他类似的荧光分子标记检测，为大规模分子标记检测等实验DNA样品准备提供了借鉴。