1株高产红色素海洋菌的初步鉴定及色素性质研究

对威海近海海水和海泥中的产色素细菌进行筛选,从样品中分离出1株高产红色素的细菌S15,对其进行了初步鉴定,并对其色素性质进行了初步试验.利用16S rDNA通过引物对S15菌株基因组DNA进行扩增,测序得到其部分16S rDNA序列,经Blast调出与菌株16S rDNA同源的序列,用软件MEGA(4.0) 按照Neighbor-Joining 方法构建16S rDNA系统发育树,判断该菌为沙雷氏菌属的一个种.提取色素后,对该红色素理化性质的试验发现,其光、热等稳定性强,而H2O2、Ca2+、Fe3+对其稳定性影响显著.     

一株红色素产生菌H2的初步鉴定

从海泥中分离纯化得到1株产红色素细菌,对该菌进行生理生化分析和16SrDNA鉴定。结果表明:该菌为革兰氏阴性,H2S、V.P.、酶触及明胶液化试验呈阳性,可在4～37℃下生长。可利用的碳源有麦芽糖、纤维二糖、甘油、D-葡萄糖、D-果糖、海藻糖、蔗糖及D-甘露醇等,可利用的氮源有蛋白胨、酵母膏和牛肉膏等;16SrDNA鉴定为Serratia marcescens,并建立了H2系统发育树。     

Nisin产生菌的筛选及鉴定

从新鲜牛奶样品中用M17G筛选培养基定向筛选出20株目的菌株.应用琼脂扩散法,以黄色微球菌(Micrococcus flavus)NCBI8166为指示菌对其发酵产物进行效价测定,经反复筛选,获得1株稳定的高产菌株KY08,产Nisin效价为813IU·mL-1.用细菌鉴定系统Vitek-32进行生化特征鉴定,并参照了<伯杰氏细菌学鉴定手册>(第八版),将KY08菌株初步鉴定为乳酸链球菌种的一个亚种.     

一株耐高温抑菌黏质沙雷氏菌的鉴定及其红色素的初步分离

[目的]为了了解黏质沙雷氏菌的抑菌机理及温度对其产生色素的影响。[方法]从土壤中分离纯化得到1株产红色素细菌,对该菌进行生理生化和16S rDNA鉴定,同时对该菌产生的红色素进行了初步的探讨。[结果]该菌为黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens),在28℃条件下培养红色素产量最高,37℃下仍能产生色素,说明该菌株是耐高温红色素产生菌。紫外全波长扫描分析和薄板层析结果表明,其红色色素有可能是灵菌红素。[结论]该菌对霉状杆菌和镰刀菌等病原菌具有一定的抑制作用。     

2株哌嗪-2-羧酸单一对映体产生菌的鉴定

通过对分离得到的哌嗪-2-羧酸单一对映体产生菌的鉴定,从分类学上为筛选得到生物安全性高的生产菌株提供指导。通过形态培养特征观察、生理生化特征鉴定和基于16SrDNA序列分析的系统发育分析对实验菌株进行鉴定。结果表明2株哌嗪-2-羧酸单一对映体产生菌,均为G-杆菌,通过16SrDNA序列同源性比较及系统发育分析,菌株210属于短波单胞菌属（Brevundimonas）、菌株418属于假单胞菌属（Pseudomonas）。菌株210、418的生理生化特征与其系统发育关系最近的种存在差异。通过将目的菌株的系统发育分析结果和形态生理结果与相关已知菌的比较,菌株210、418生物安全性较高,具有应用于工业生产的潜力。     

一株沙雷氏菌红色素的理化性质研究

[目的]为沙雷氏菌红色素的结构分析和开发利用奠定基础。[方法]从一株产天然红色素沙雷氏菌培养物中提取红色素,通过薄层层析、质谱分析和光谱扫描对色素成分进行分析,并研究温度、光照、pH值、金属离子、氧化剂及还原剂对色素稳定性的影响。[结果]所提取色素中主要含有分子量分别为393．5、324．0和754,0的3种成分;色素醇溶液在535和469nm处有特征吸收峰;色素对温度和pH值3—11较稳定,对光照较敏感;Mg^2＋和Mn^2＋对色素具有保护作用,K^＋对色素持续增色,其他多种金属离子对色素具有破坏作用;色素的抗氧化性和抗还原性良好。[结论]沙雷氏菌所产红色素被初步判定为灵菌红素类物质。     

刀孢轮枝菌产红色素条件及稳定性研究

分离了一株在PDA上强烈产生红色素的小叶杨(Populus simonii)内生菌, ITS-nrDNA序列分析及形态学初步鉴定为:刀孢轮枝菌(Lecanicillium psalliotae)。其产红色素是一种水溶性色素,在513 nm处有强吸收峰,该色素在以葡萄糖为碳源的培养基中生长迅速,培养至23 d色素达到最大的浓度2.73 mg·mL^-1,随后浓度逐渐下降。氧化剂H₂O₂和还原剂Na₂SO₃浓度逐步增大对色素有减色反应,色素在中性和碱性条件下红色加深,紫外光下长时间放置无大变化,但在紫外光照射3 h时色素达到最大色度,温度对色素稳定性的影响较小。金属离子Ca²⁺、Fe²⁺、Cu²⁺和Zn²⁺对色素影响较大,能改变色素颜色。该色素浓度为2.11 mg·mL^-1时,对Escherichia coli和Pseudomonas syringa pv. actinidia拮抗作用明显。     

一株甘蔗黑穗病菌的分离与系统发育分析

甘蔗黑穗病是由黑粉菌(Ustilago scitaminea Syd.)引起的一种世界性病害,严重危害甘蔗的生产,对该病病原菌的研究有助于甘蔗抗黑穗病育种。由于rDNA序列兼具保守区域和进化水平不同所致可变区,因此,rDNA序列分析是研究真菌系统发育、分类鉴定和分子检测非常有效的手段。笔者采用单孢分离方法,从高抗品种NCo376的病株上分离单孢,培养菌丝体,提取基因组DNA,分析其rD-NA序列,以期丰富该真菌的遗传多样性研究。用真菌rDNA序列分析的通用引物ITS1和ITS4,通过ITS-PCR得到目的片段,克隆在pMD18-T载体上后进行测序,结果显示该片段的长度为692bp,与Genebank中已报道的真菌序列进行Blast和系统发育树分析,表明所获得的序列与Sporisorium属真菌具有更高的亲缘关系,而与Ustilago属真菌的亲缘关系较远,这与一直沿用的甘蔗黑穗病菌的命名似乎并不吻合,有待进行更多的研究以证实。     

黄河湿地降解菌的分离鉴定及系统发育树的构建

采用富集培养法分离提纯出了6株降解菌,通过研究其降解能力,筛选出降解效果较高的两株菌H3和H6,利用16S rRNA基因克隆法鉴定其基因序列,同时将基因序列与NCBI数据库中已有细菌的16S rRNA序列进行相似性比较分析后构建系统发育树,最后结合菌落的形态学特征和生理生化特征确定其生物学地位。结果表明,6株菌对污染物均有一定的降解能力,而且对CODcr的降解效果要优于对TP和NH3-N的;菌株H3和H6对CODcr、TP、NH3-N的去除率分别为50.2%、26.83%、44.89%及52.19%、25.16%、46.79%,降解能力较突出;菌株H3与荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens（NR₁13647.1）亲缘性最近,同源性达99%;菌株H6与解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens（NR₀75005.1）同源性达99%。分离所得到的荧光假单胞菌和解淀粉芽孢杆菌对生活污水具有一定的净化作用,且安全性有保障,可以应用于湖泊湿地水体的生态修复和生活污水处理中。     

吸水链霉菌新种的筛选和鉴定

从土壤中分离得到一株产生对叶螨等有高活性抗生素的新链霉菌株。该抗生素对各种叶螨(红蜘蛛)、蚜类等都有较高的防治效果。通过对该菌株进行形态特征、培养特征、生理生化、细胞壁组份分析及16S rDNA序列分析,确定该菌种为吸水链霉菌的一株新菌,命名为冰城链霉菌(Streptomyces bingchengensis.n.sp.)     

一株产生内切β-1,4-木聚糖酶的菌株的分离、鉴定及其酶学特性研究

内切β-1,4-木聚糖酶作为饲料添加剂可明显改善麦类的营养价值,显著提高畜禽生长速度和饲料转化率;用在纸浆漂白中可减少漂白剂的用量并提高纸张质量.利用透明圈法从长期排放食堂锅炉污水口污泥中筛选分离到一株产内切β-1,4-木聚糖酶的细菌菌株,该菌株菌体呈长杆状、革兰氏染色可变、兼性厌氧、产芽孢(次端生、孢囊膨大),鞭毛周生,命名为A3.据部分片断长度的16S rDNA序列同源性分析和生理生化试验结果,发现分离菌株与浸麻芽孢杆菌(Bacillus macerans)最为相近.A3菌株所产内切β-1,4-木聚糖酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH为5.0～7.0,pH 7.0条件下该酶在50℃下稳定,40℃条件下该酶在pH 4.0～10环境中相对稳定.     

一株产低温蛋白酶菌株的筛选鉴定及纯酶研究

从土壤中分离筛选获得一株产低温蛋白酶菌株,并对其进行了形态和生理生化鉴定,对部分长度的16S rDNA同源性作了分析,将其鉴定为Chryseobacterium sp.HL221.通过硫酸铵沉淀、G-75和DEAE Sepharose F.F.柱层析从发酵液分离纯化得到纯酶,测得分子量为35000 Da,等电点为4.9.酶促反应最适温度25℃,最适pH为7,酶活在低于25℃,pH7～10范围内稳定.     

台湾蝴蝶兰上一种病原细菌的初步鉴定

从来自台湾的蝴蝶兰病叶上分离到一种引起叶斑症状的病原细菌.该病原菌为革兰氏阴性杆菌,1根或几根极生鞭毛,在蘑菇菌盖上引起凹陷斑点.经致病性测定、菌体形态、培养性状、生理生化特性和16S rDNA序列同源性以及系统发育学等方面的分析鉴定,确定该病原菌为托拉斯假单胞杆菌(Pseudomonas tolaasii Paine 1919).     

一株芽孢杆菌16S rRNA的基因序列测定和系统进化分析

从河南黄河稻区土壤中分离出一株具有较强稻瘟病菌拮抗活性的芽孢杆菌菌株BS501,经过形态观察、生理生化特性检测和电镜技术,确定其为芽孢杆菌属细菌,为进一步确定其分类学地位,扩增了 BS501基因组的16S rDNA.并将测序结果提交GenBank数据库(登录号:FJ755787).利用BLAST软件将该序列与枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌等芽孢菌属细曲及大肠杆菌16S rDNA序列进行同源性比对.系统进化树表明,BS501与芽孢菌属细菌存进化关系上组成一个大的分支,与枯草芽孢杆菌最为接近,与大肠杆菌较远.同源性分析表明该序列与枯草芽孢杆菌PRE23同源性达99%,证实该菌株的分类学地位为枯草芽孢杆菌.     

苯酚高效降解菌的筛选鉴定及其降酚特性研究

将焦化厂排水沟污泥中的细菌,通过以苯酚为惟一碳源的培养基逐步驯化,筛选苯酚降解菌株;通过形态观察、生理生化试验、16SrDNA序列分析对其进行初步鉴定,利用4-氨基安替比林分光光度法测定菌株在不同温度、pH、接种量及最适条件下的降酚能力.结果表明:筛选获得1株耐酚能力达2 200mg/L的苯酚高效降解菌株JDM-2-1,初步鉴定其为球形芽孢杆菌(B.sphaericus).菌株JDM-2-1降酚的最佳温度为35℃,最佳pH值为5.0,降酚能力与接种量成正相关.在最适条件下,当接种量为2%时,菌株JDM-2-1能在42h内将800mg/L的苯酚完全降解,且对浓度为1 600mg/L的苯酚有一定的降解能力.     

产蛋氨酸益生菌的筛选和鉴定

由于益生菌产蛋氨酸的特性有利于益生菌发酵食品的开发利用,从发酵食品的酸面团、米酒、白酒曲,以及实验室提供的菌种中分离纯化出48株菌株。将这些菌株进行纯化培养,利用高效液相色谱检测各菌株发酵液中蛋氨酸的含量,筛选出蛋氨酸含量相对较高的2株菌。利用16SrDNA扩增及Blast分析、特异性引物PCR等技术鉴定这2株菌,分别为纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp).,两株菌发酵液中蛋氨酸分别为21.08、19.38g·L-1。     

一株来源于人体的双歧杆菌的分离与鉴定

文章从人体粪便中分离出一株革兰氏阳性专性厌氧的杆菌B001,根据16S rDNA序列分析结果,其与两歧双歧杆菌亚种S83624的同源性高达99.9%,结合糖发酵试验以及菌体形态学特征,将菌株B001鉴定为两歧双歧杆菌。     

番茄叶霉病拮抗链霉菌BPS2的筛选及鉴定

从江苏昆山、吉林图门等地采集的土壤样品中分离到1株对番茄叶霉病菌有强烈抑制作用的BPS2菌株。研究其拮抗性表明,对革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌以及多种病原真菌均有强烈的抑制作用。根据形态特征、培养特征、生理生化特性及16S rDNA序列等方面的多项分类研究,确定其属于链霉菌属,并被命名为Streptomyces tumenensis BPS2。该菌株在大多数培养基上生长良好,基内菌丝无横隔,不断裂,气生菌丝体形成孢子丝,孢子丝呈波曲或直形。