琼胶低聚糖清除自由基的活性

采用体外鲁米诺发光和DPPH体系对琼胶低聚糖清除氧自由基活性进行了研究。实验结果表明,琼胶低聚糖ML对水溶性的·OH和O2·-有很好的清除作用,IC50分别为0.05mg·mL-1、0.7mg·mL-1,效果与自由基清除剂肌肽相近。琼胶低聚糖ML对醇溶性的DPPH自由基有一定的清除活性(IC50为6.4mg·mL-1),但是清除效果远不如Vc和丙丁酚。对不同的聚合度、含硫量和摩尔浓度的琼胶低聚糖的清除O2·-的活性进行比较,实验发现含硫量高、分子量大的低聚糖在清除自由基过程中发挥主要作用。琼胶低聚糖ML对LPS+D-GalN急性肝损伤小鼠的实验表明,一定浓度的ML灌胃可以有效抑制肝损伤小鼠血清GPT活性和MDA浓度的升高,保护抗氧化酶SOD和GSH Px的活力,对肝损伤有很好的保护作用。     

海参水煮液酶解多肽的抗氧化活性

以海参水煮液的冻干粉为原料,选取中性蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶分别酶解制备多肽,测定其对·OH、O2-·和DPPH·自由基的清除能力,并与合成抗氧化剂TBHQ对比.结果表明,3种蛋白酶酶解制得的海参水煮液多肽对·OH、O2-·和DPPH·自由基的清除能力均随样品质量浓度的升高而增强;其中,中性蛋白酶酶解制得的海参水煮液多肽清除·OH、O2-·和DPPH·自由基的IC50值依次为8.565、6.658和2.015mg/ml,其对O2·的清除能力优于TBHQ.经液相色谱法测定,中性蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解制得的海参水煮液多肽分子量分别分布在＜2 500、＜3 500和＜1 000 D的小分子肽中.     

4种海藻膳食纤维清除自由基的比较研究

采用羟基自由基体系、超氧阴离子自由基体系、烷基自由基引发的亚油酸氧化体系和DPPH体系对江蓠(Gracilaria)、麒麟菜(Eucheuma)、马尾藻(Sargassum)、海带(Laminaria)4种膳食纤维清除自由基的活性进行研究。结果表明，在羟基自由基体系中，江蓠、麒麟菜、马尾藻、海带4种膳食纤维的IC50分别为5．2mg／mL、5．5mg／mL、4．4mg／mL和4．1mg/mL；在超氧阴离子自由基体系中，江蓠、麒麟菜膳食纤维的IC50分别为4．8mg/mL和5．3mg/mL，而马尾藻、海带膳食纤维的最高清除率分别为36％和42％；在烷基自由基引发的亚油酸氧化体系中，江蓠、麒麟菜膳食纤维的最高清除率分别为36％和26％，马尾藻、海带膳食纤维的IC50分别为4．1mg/mL和3．5mg/mL；在DlPIH体系中，江蓠、麒麟菜、马尾藻膳食纤维的最高清除率分别为31％、11％和26％，海带膳食纤维的IC50为6．2mg/mL。在各体系中，与相应的专一性阳性参照物对比，证明这4种海藻膳食纤维对自由基有一定的清除作用。     

刺参肠、性腺酶解多肽体外抗氧化作用研究

刺参（Apostichopus japonicus）肠和性腺是刺参加工过程中的副产物,为丰富其高值化利用的基础理论,研究了刺参肠、性腺酶解过程中可溶性蛋白和氨基酸态氮质量浓度变化,分析了酶解多肽对11-二苯基苦基苯肼（DPPH·）、羟基自由基（·OH）和超氧阴离子自由基（O2^-·）的体外清除效果。结果显示,刺参肠和性腺经生物酶水解后,水解度分别为53.63%和63.40%,酶解液中可溶性蛋白质量浓度分别为4.62 mg·mL-1和5.01 mg·mL-1,氨基酸态氮质量浓度分别为0.43 mg·mL-1和0.56 mg·mL-1。刺参肠和刺参性腺酶解多肽清除DPPH·的半抑制质量浓度（IC50）分别为3.31 mg·mL-1和0.88 mg·mL-1,清除·OH的IC50分别为9.53 mg·mL-1和8.81 mg·mL-1,清除O-2·的IC50分别为6.42 mg·mL-1和3.22 mg·mL-1。刺参肠和刺参性腺酶解多肽具有一定的体外抗氧化效果,应用前景广阔。     

蜈蚣藻多糖纯化及抗氧化作用的研究

采用热水浸提法提取蜈蚣藻多糖,通过对超氧阴离子（·O2-）、羟基自由基（·OH）清除效果的研究,评价了蜈蚣藻多糖的体外抗氧化活性,以及对蛋白脱除率和多糖损失率的分析,比较了TCA法和Sevage法脱蛋白的效果,利用Sephadex G-150柱纯化蜈蚣藻多糖,并分析了其部分理化性质和相对分子质量分布.结果表明,蜈蚣藻多糖对·OH清除率的IC50为4.62 mg/mL,对·O2-清除率的IC50为0.62mg/mL,具有体外抗氧化效果;Sevage法脱蛋白效果优于TCA法,蛋白脱除率达85.55％,多糖损失率为15.93％;蜈蚣藻多糖是一种以多糖为主、含有糖蛋白的复合物,其相对分子量的分布范围在3.5×105 ～1.2 ×105 Da.     

鳙鱼蛋白酶解液清除自由基的研究

以鳙鱼肉为原料,通过对水解度的分析和对可溶性短肽的测定研究了不同蛋白酶的酶解效果,并分别利用分光光度法、Deoxyribose筛选法及邻苯三酚氧化法对鳙鱼蛋白酶解液在体外清除自由基的能力进行了比较。试验结果表明:鳙鱼蛋白经酶解后可提高对自由基DPPH.、.OH和O2.-的清除活性,水解至一定时间后酶解液的清除活性达到最大,随后减少;不同的酶对清除能力的影响不同,碱性蛋白酶Alcalase的酶解液清除能力较强;酶解液对不同的自由基表现出不同的清除活性,提示酶解液对不同自由基存在着不同的抗氧化机制。     

舌状蜈蚣藻蛋白质的提取及其抗氧化活性研究

该研究以舌状蜈蚣藻(Grateloupia livida)为原料,以蛋白质提取率为指标,探究不同破壁技术对舌状蜈蚣藻蛋白质的提取效果,并通过单因素分析和正交试验对超声波辅助水提法进行工艺优化,所得蛋白质经硫酸铵盐析法粗提纯后考察其体外抗氧化能力。结果显示,溶胀法、反复冻融法、珠磨法的最高蛋白质提取率分别为(29.66±0.86)%、(24.52±0.04)%、(26.52±0.79)%,均低于超声波辅助水提法;超声波辅助水提法提取舌状蜈蚣藻蛋白质的最佳工艺为:液料比160 mL·g^?1,超声全程时间60 min,超声功率1440 W,pH 6.0,此条件下蛋白质提取率可达58.16%;舌状蜈蚣藻粗蛋白质量浓度在1~8 mg·mL^?1内均具有较强抗氧化活性,其质量浓度为8 mg·mL^?1时的还原力为0.43±0.01,对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基的半数清除浓度(IC50)为4.00 mg·mL^?1,对2,2'-二氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)自由基的IC50为3.96 mg·mL^?1。     

低分子量海带岩藻聚糖硫酸酯的清除活性氧自由基和体内抗氧化作用

用化学发光分析法研究了3种低分子量涨带岩藻聚糖硫酸酯（LMWF－M，LMWF－I，LMWF－IV）体外清除超氧阴离子自基基（O2^-)及羟基自同基（．OH）的作用，并观察了LMWF－M对高脂血症大鼠的抗氧化作用，结果表明阴离子分量海带岩藻聚糖硫酸酯组分均有清除活性氧自由基的能力，随体系中LMWF浓度的增加，其清除活氧自由基的能力增强，LMWF－I清除自同基的能力最强，它对O2^-的IC50为0.044mg.mL^-1,对.OH的IC50为0.062mg.mL^-1,，LWMF－M能显著降低高脂血症大鼠箅清和组织中LPO含量（P＜0．01），增强SOD活力（P＜0．01）.     

金枪鱼鱼骨胶原肽的制备及抗氧化活性研究

为制备金枪鱼鱼骨胶原肽,并对其抗氧化活性进行研究,利用酶解、超滤、凝胶色谱和反相高效液相色谱制备抗氧化胶原肽,采用氨基酸序列分析仪测定其氨基酸序列,利用质谱(ESIMS)确定其分子量,采用羟自由基、DPPH自由基、ABTS自由基和超氧阴离子自由基清除实验和脂质过氧化抑制实验对胶原肽抗氧化能力进行评价。结果显示,金枪鱼鱼骨胶原蛋白经胃蛋白酶和胰蛋白酶2步酶解和分离纯化得到1个十肽(TFCH-P2),经氨基酸序列分析和质谱(ESIMS)确定其氨基酸序列为Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Ala-Gly-Glu-Gln-Gly(GPAGPAGQEG),分子量为839.87 u([M+H]+840.68 u)。体外抗氧化实验结果表明,GPAGPAGQEG对羟自由基(EC500.18 mg/mL)、DPPH自由基(EC500.97 mg/mL)、ABTS自由基(EC500.52 mg/mL)和超氧阴离子自由基(EC500.38 mg/mL)具有良好的清除作用;GPAGPAGQEG亦显示出良好的脂质过氧化抑制作用。研究表明,胶原肽GPAGPAGQEG抗氧化活性良好,可以用于抗氧化相关的功能食品、药物或者食品添加剂。     

海洋活性胶原肽酶解液的脱色脱腥工艺

以富含胶原的海产品下脚料为原料,用海洋碱性蛋白酶894水解,得到具有清除羟自由基活性的酶解液.采用一次正交回归实验设计及结果分析,建立回归方程,研究了活性炭、β-环糊精、酵母三者用量及温度、pH和作用时间6因子及其可能存在交互作用的变化关系对该酶解液综合脱色脱腥效果的影响.结果表明,在给定取值范围内,pH对综合脱色脱腥效果影响高度显著,酵母添加量、pH与酵母添加量的交互作用影响显著,其它因子及其可能的交互作用影响不显著,得最佳工艺为:温度37℃、pH 4.0、活性炭0.8%、β-环糊精和酵母分别为0.1%,作用30 min.此时,综合脱色脱腥效果值为90.90,蛋白回收率为98.02%,羟自由基清除率的IC50浓度从原来的1.42 mg·mL-1增加到1.62 mg·mL-1.     

自由基化学改性氧化石墨烯对亚甲基蓝的吸附性能

氧化石墨烯（Graphene Oxide,GO）拥有较大的比表面积和较高的稳定性，可用来吸附水体中的多种污染物，其潜在功能稳定性具有规模化应用前景。考虑到GO在高级氧化体系中结构和形貌会发生改变，探究了经UV/H2O2和UV/过硫酸盐(Persulfate, PS)产生强氧化性自由基的体系处理后所得GOs对亚甲基蓝(Methylene Blue, MB)的吸附性能。氧化性自由基体系光源为300 W中压汞灯，30 mL GO储备液(1 mg/mL)在2种氧化体系下反应1、2、4 h后制得GOs。实验考察了不同反应条件对GOs吸附动力学的影响，傅里叶变换红外光谱(FTIR)研究了GOs氧化前后表面官能团的变化。结果显示，经UV/H2O2, UV/PS氧化1 h后，GOs表面的含氧官能团数量开始明显减少；吸附动力学过程更符合准二级动力学模型（R2>0.999）；吸附热力学过程更符合Langmuir模型，MB饱和吸附量(经UV/H2O2和UV/PS氧化1、2、4 h后分别记G1-1, G1-2, G1-3, G2-1, G2-2, G2-3)依次为580.26, 591.80, 598.63, 521.77, 554.91, 568.00 mg/g。研究表明，GO可以快速吸附较大浓度范围内的MB，且对低浓度染料表现出更好的去除效果；GO对MB的吸附量随着pH值的增加逐渐增大，且在碱性条件下的增加得更明显；经氧化处理后，GOs的吸附性能随着氧化时间的增长，性能减弱，尤其在UV/PS体系中更为显著。     

自由基氧化法制备海带岩藻聚糖硫酸酯的抗凝血活性

以海带(Laminaria japonica)为原料,采用阴离子交换和自由基氧化降解反应制备了不同分子量和硫酸根含量的岩藻聚糖硫酸酯,然后以血浆复钙时间(RT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)为指标,研究海带岩藻聚糖硫酸酯抗凝血活性的构效关系.结果表明,采用离子交换,可从海带糖提取物中分离出低硫大分子组分F-A和高硫大分子组分F-B.粗糖经自由基氧化降解,可得到分子量为1.5 kD和8.0 kD左右的低分子组分,实验重复性好,产物分子量集中,其中分子量8.0 kD左右的低分子组分硫酸根含量最高.抗凝血实验表明,岩藻聚糖硫酸酯能显著延长RT、APTT和TT,尤以高硫组分大分子F-B抗凝血效果最好,而对PT影响不大,说明岩藻聚糖硫酸酯对外源凝血系统影响很小,它的抗凝血活性主要是通过内源性凝血途径来实现的.岩藻聚糖硫酸酯分子量对抗凝血活性的影响要比硫酸根含量的影响更大,其抗凝血活性随着分子量的降低而显著降低.对于分子量相近的岩藻聚糖硫酸脂,硫酸根含量越高,则抗凝血活性越高.总之,岩藻聚糖硫酸酯分子量和硫酸根含量越高,其抗凝活性越高.     

Antioxidant Activity of Protein Isolate Obtained by the pH Shift Technique from Hydrolyzed and Unhydrolyzed Shrimp Processing Discards

Protein isolates from hydrolyzed and unhydrolyzed shrimp waste were prepared using the pH shift method. The conditions for protein isolation from unhydrolyzed shrimp waste by the pH shift method were standardized with respect to waste to distilled water ratio (1:2.5, 1:5, 1:7.5, and 1:10 w/v) and the alkaline pH (9.0, 10.0, and 11.0) to which the waste was to be adjusted before protein precipitation for higher yield of protein isolate. The yield of precipitate with waste to distilled water ratio of 1:2.5 (17.3 ± 0.9) was lower (p < 0.05) compared to the other three dilutions. The pH to which the waste is adjusted before precipitating the proteins at pH 4.5 had no effect (p > 0.05) on the yield. The antioxidant activity of the protein isolate obtained by the pH shift method from unhydrolyzed waste was compared with that obtained from the waste hydrolyzed with Alcalase®. The DPPH scavenging activity of protein isolate after enzyme hydrolysis was significantly higher than that of protein isolate from unhydrolyzed waste. With respect to recovery of total antioxidant activity, protein isolation from unhydrolyzed waste was superior to hydrolyzed waste due to higher yield.     

虾夷扇贝内脏多糖的提取及清除羟基自由基作用的研究

通过正交试验确定最佳提取条件为:温度50℃,pH 8.0,加酶量0.25%,料液比1∶45,提取时间2.5 h;最佳条件下提取的虾夷扇贝内脏多糖具有清除羟基自由基的能力。试验结果表明,6.5 mg/m l虾夷扇贝内脏多糖对羟基自由基的清除率可达84.75%。     

尼罗罗非鱼鱼皮胶原蛋白中游离基清除肽的制备及其抗氧化活性

采用菠萝蛋白酶和Alcalase酶依次对尼罗罗非鱼皮胶原进行复合酶解.研究了该酶解产物的体外抗氧化活性.实验表明,该酶解产物具有较强的超氧阴离子/羟基自由基清除活性和还原能力.采用不同截留分子量的超滤膜将该酶解物分离成5个组分,即TGH-Ⅰ(＞10 ku),TGH-Ⅱ(10～5 ku),TGH-Ⅲ(5～3 ku),TGH-Ⅳ(3～1 ku)和TGH-Ⅴ(10 ku).其中TGH-Ⅴ组分显示出最强的超氧阴离子自由基清除活性,因此采用凝胶过滤、离子交换和反向高压液相色谱技术对该组分进一步分离纯化.纯化得到的肽具有很强的超氧阴离子自由基清除活性,其IC50值为4.6 μg·mL-1.通过质谱分析可知,该肽的分子量位于311.3～932.8 u之间.     

Purification and Characterization of a New DPPH Radical Scavenging Peptide from Shrimp Processing By-products Hydrolysate

A peptide with high antioxidant activity was isolated and identified from shrimp processing by-products hydrolysate. The 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical scavenging activity was used to evaluate the antioxidant activity of fractions. The purified antioxidant peptide was identified as Ser-Val-Ala-Met-Leu-Phe-His (804.4 Da) by electrospray ionization tandem mass spectrometry. The purified peptide at 50 μg/mL showed antioxidative activity of 65.7 ± 0.9%, which was 3.18-fold higher compared with the first step separation by ion-exchange chromatography. It is possible to produce natural antioxidative peptides from shrimp processing by-products hydrolysate. The high antioxidant activity may be due to the presence of Phe-His segment at the C-terminus of the peptide.     

缢蛏蛋白肽制备工艺优化及其清除羟自由基作用

以缢蛏为试验材料,采用羟自由基清除率为评价指标,从胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶5种蛋白酶中筛选最适水解用酶,在单因素试验基础上使用响应面法优化酶解工艺条件,考察缢蛏蛋白肽的羟自由基清除能力并通过Sephadex G-15凝胶层析测定其分子质量分布。结果表明,碱性蛋白酶酶解制备的缢蛏蛋白肽清除羟自由基能力明显强于其他蛋白酶,优化后的碱性蛋白酶水解缢蛏蛋白工艺条件为底物浓度6mg/ml、加酶量3%、pH8.0、温度55℃、酶解时间4h,蛋白肽的羟自由基清除率为76.60%,IC50值为1.89mg/ml,蛋白肽中80%以上是分子质量小于1500Da的小分子肽。     

磁处理水对贻贝棘尾虫(Stylonychia mytilus)衰老无性系抗氧化能力的影响

将贻贝棘尾虫衰老无性系（分裂2000代以上）随机分成两组：一组在经H型强场磁化杯磁处理的无机液中培养;另一组做为对照组,在不经磁处理的无机培养液中培养。在喂食、温度等其他条件一致的情况下培养三个月,分别测定两组消除·OH自由基、O2-自由基能力、脂质过氧化程度及脂褐素含量。结果表明,经磁处理的贻贝棘尾虫衰老无性系,其消除·OH自由基、O2-自由基能力（P＜0．01）显著高于对照组,脂质过氧化程度（P＜0．05）、脂褐素含量（P＜0．01）显著低于对照组。根据Harmann（1956）的衰老自由基学说,本文从增强抗氧化能力的角度上证实了磁处理水在保持细胞活力和延缓细胞衰老方面的作用。     

南极冰藻Chlorophyceae L4抗氧化酶活性对温度升高的响应

为了阐明南极冰藻Chlorophyceae L4抗氧化酶活性对温度升高的响应以及了解冰藻细胞内抗氧化酶系统对活性氧自由基的清除作用,对不同温度下（包括最适温度6℃、高于最适温度10℃和15℃）Chlorophyceae L4细胞中自由基的产生速率、丙二醛含量的变化和相应的抗氧化酶系统活性的变化进行了测定。结果表明,在环境温度高于最适生长温度的初期（24～72h）,Chlorophyceae L4中自由基产生速率、丙二醛含量迅速提高,但随后（96～144h）很快降低,恢复到细胞能容忍的水平。各种抗氧化酶SOD、POD和CAT活性在初期显著降低,但随后响应温度的变化很快升高,明显比对照组的高,而且温度越高酶活性增幅越高。