马立克氏病病毒Ⅰ型疫苗毒克隆株pp38基因同源物的扩增和克隆

用 Ｐ Ｃ Ｒ 技术,从马立克氏病病毒（ Ｍ Ｄ Ｖ） Ｃ Ｖ Ｉ９８８／ Ｃ 株感染的鸡胚成纤维细胞（ Ｃ Ｅ Ｆ）基因组 Ｄ Ｎ Ａ 中扩增出含起始密码子的 Ｍ Ｄ Ｖ ｐｐ ３８ 基因同源物编码序列。在以 Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ （ Ｄｉｇ．）标记的 ｐｐ３８ 基因作为探针,在 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ中,该探针能识别该 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增片段。将该 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增片段在 Ｂａｍ ＨⅠ和 ＰｓｔⅠ位点克隆进 ｐ Ｕ Ｃ１８ 质粒载体,酶切分析筛选到含 ｐｐ３８ 基因同源物的重组质粒并进行了全序列分析,证明该重组质粒是 ｐｐ ３８ 基因同源物克隆。     

马立克病病毒pp38基因的编码序列及译读框

马立克病病毒(MDV)与致肿瘤相关的38kd磷蛋白(pp38)基因的编码序列是一个不含有内含子的由870个碱基对组成的DNA片断。从对MDVpp38-λgtll Lac Z融合基因的定序及已知Lac Z基因的译读框,直接读出了MDVpp38基因的译读框。根据计算,由该译读框推导出的该基因编码的由290个氨基酸组成的初级多肽分子量约为31kd.     

鸡马立克氏病毒疫苗的种类和应用

鸡马立克氏病毒（ＭＤＶ）疫苗目前分为如下５类：血清Ｉ型马立克氏病毒疫苗,血清Ⅱ型马立克氏病毒疫苗,血清Ⅲ型马立克氏病毒疫苗,马立克氏病毒多价苗,马立克氏病毒基因工程苗。马立克氏病毒疫苗的应用,应结合鸡马立克氏病（ＭＤ）的流行病学特点和马立克氏病毒疫苗的特性进行合理选择应用。     

用萤光抗体试验筛选能表达鸡马立克病病毒pp38基因的重组昆虫杆状病毒

用抗鸡马立克病病毒(MDV)的38Kd磷蛋白的单克隆抗体作萤光抗体试验,直接从用可转染性野生型杆状病毒AcMNPV株DNA与含MDVpp38基因的重组转基因质粒载体DNA共同转染的Sf 9单层细胞培养中筛选到能表达pp38基因产物的重组杆状病毒感染斑,并从保存于琼脂醣凝胶上的复印斑中收复并进一步克隆了该基因重组病毒.该法易于实施,即使未能熟练掌握根据杆状病毒多角体来区别野生型杆状病毒斑与基因重组病毒斑的技术,也可顺利地筛选到能表达目的基因的重组合病毒。     

马立克氏病病毒（MDV）B抗原基因的克隆及鉴定

将ＭＤＶＧＡ株ＢａｍＨＩ基因文库中含Ｉ３片段的质粒ｐＡＣＹＣ１８４和Ｋ３片段的质粒ｐＨＣ７９扩增，用碱裂解法抽提质粒后，利用相应的限制性内切酶切出目的基因片段，连接到合适的载体上，构建了完整的ＭＤＶＢ抗原基因克隆载体。通过内切酶分析，地高辛（ＤＩＧ）－探针原位杂交，ＤＮＡ序列预测，确认克隆的Ｂ抗原基因正确。     

基因探针技术检测血清1型马立克氏病病毒的研究

选用马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＧＡ株ＢａｍＨＩ基因文库中ＬＤＮＡ片段，制成ＤＩＧ－标记的ＭＤＶ核酸探针，分别对Ｉ型ＭＤＶ强毒株（ＢＪ－１株）和弱毒株（Ｍｄ１１／７５ｃ株）感染材料的核酸进行ｄｏｔ ｂｌｏｔ杂交检测，结果显示均有阳性呈色反应；而对ＭＤＶ血清２型（ＳＢ－１株）、３型（Ｆｃ１２６株）及禽网状内皮组织增殖病病毒（ＲＥＶ）和淋巴细胞性白血病病毒（ＬＬＶ）感染细胞的核酸，作上述同样检测，则均未见     

超强毒RB1B株马立克氏病UL49基因的克隆和序列分析

鸡马立克氏病病毒UL49基因编码的被膜蛋白VP22在病毒的复制和传播过程中具有非常重要的作用。根据已发表的MDV-1 Md5株的序列,从马立克氏病超强毒RB1B株感染的鸡胚成纤维细胞中提取病毒基因组DNA,经PCR扩增UL49基因并克隆入pMD18-T Simple载体。RB1B株UL49基因经核酸序列测定分析,全长为750碱基。将RB1B株与Md5株和GA株的UL49进行比较,发现马立克氏病病毒强毒株间的UL49基因高度同源,为利用RB1B的UL49基因作为基因治疗的靶序列奠定了理论基础。     

马立克氏病病毒P79抗原基因在大肠杆菌中的表达特性分析

马立克氏病病毒（ＭＤＶ）的７９ｋｄ蛋白质是该属３个血清型所共有的抗原。用能表达该蛋白质片段的重组噬菌体Ｌａｍｂｄａ ｇｔ１１克隆ＧＢ－２在宿主菌大肠杆菌株中表达该蛋白，免疫转印试验中的确产生了能为对７９ｋｄ蛋白质的单克隆抗体Ｔ８１所识别的表达产物。表达过程中，不论加入或不加蛋白分解酶抑制剂，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白电泳及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ中均未显示分子量大于β－半乳糖苷酶的融合蛋白的存在，而是     

鸡马立克氏病病毒的分离和初步鉴定

红花继木扦插苗白绢病是一种插床内扦插苗上普遍而严重的病害。该病寄主范围很广，在扦插的２０多个花木品种中，几乎都要受害，发病率在２１．７％－９６．７％，该病不仅危害寄主茎基部和根部，也危害苗木的其他部位，引起湿腐和干腐。经病原物分离、培养及接种试验证明，该病由齐整小核菌所引起。病害从６月上中旬开始发生，７－８月是病害盛发期，一般１０月后停止发生，有些年份可延迟到１１月中旬。病害流行与扦插床扦插时间长     

马立克氏病毒Z4株培养特性和免疫原性的研究

将鸡马立克氏病毒（ＭＤＶ）血清２型Ｚ４毒株第１０代（Ｚ４－１０），在对鸡马立克氏病（ＭＤ）高度易感的Ｐ系ＳＰＦ鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）单层上连续传代至第３０代（Ｚ４－３０），Ｚ４毒株空斑形成速度和空斑形态均未发生显著变化，分别以Ｚ４－１１，Ｚ４－２５和Ｚ４－３０细胞结合毒作单介疫苗，将Ｚ４－１１，Ｚ４－２０和Ｚ４－３０细胞结合毒分别与ＦＣ１２６细胞结合毒组成二价疫苗，免疫Ｐ系ＳＰＦ鸡，用ＭＤＶ强毒     

免疫鸡群马立克氏病病毒分离物的生物学特性

本实验在对内蒙古呼和浩特和包头的７个鸡场进行ＭＤ流行情况调查的基础上，通过病毒分离实验，首次自内蒙古呼和浩特、包头地区经ＭＤ疫苗免疫过的５个发病鸡群和１个健康鸡群中分离到６株马立克氏病毒（分别命名为ＨＡ、ＨＢ、ＨＣ、ＨＥ、ＨＦ和ＢＧ），并对６株病毒在鸡胚成纤维细胞（ＥＦ）上的增殖特性、蚀斑形成、形态和毒力等生物学特性进行了鉴定。结果表明，ＭＤ在呼和浩特、包头地区鸡群中广泛流行。自然感染鸡羽囊中ＭＤＶ抗原与病毒血症呈正相关。雏鸡接种法和组织培养法用于分离ＭＤＶ时，敏感性无显著差异。应用ＣＥＦ分离ＭＤＶ是１种快速、简便、敏感、经济的方法；６株ＭＤＶ在ＣＥＦ上能良好地增殖，并引起比较规则的细胞病变，还能在ＣＥＦ上产生圆形或椭圆形的小细胞蚀斑、大小为１．０８～１．４２ｍｍ。６株ＭＤＶ对雏鸡均有致病性，其中ＨＢ、ＨＥ、ＨＦ和ＢＧ４株之间毒力差异显著，ＨＢ和ＢＧ株的毒力比京—１株ＭＤＶ强。根据以上结果判定６株ＭＤＶ均属血清Ⅰ型ＭＤＶ强毒。结合接种雏鸡的病理学检查结果确定，ＨＡ、ＨＢ、和ＨＥ为内脏型ＭＤＶ，属Ⅰ生物组；ＨＣ、ＨＦ和ＢＧ为神经型ＭＤＶ，属Ⅱ生物组。     

马立克氏病鸡MDV血清基因的克隆与鉴定

[目的]克隆马立克氏病鸡MDV血清基因,并对其进行鉴定。[方法]从潜伏期感染马立克氏病鸡淋巴组织中提取基因组DNA,采用梯度PCR扩增马立克氏病毒的L-meq基因。将其插入pMD18-T克隆载体并进行测序,并用DNAman软件进行序列分析。[结果]获得的DNA片段的序列与已发表的L-meq基因序列相一致,表明该试验成功获得了目的基因。[结论]该研究可为鸡马立克氏病的预防与治疗提供新思路和新方法。     

马立克氏病病毒河南分离株Meq基因的克隆与序列分析

【目的】了解马立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)河南分离株Meq基因的分子特性,为中原地区MDV流行情况提供较详细的信息,为更好地防控MD奠定基础。【方法】应用PCR方法分别扩增了17株MDV河南省野毒分离株的Meq基因片段,克隆测序后,将各毒株Meq基因序列与vv+MDV 648A株、vvMDV RBIB株、vMDV GA株、mMDV疫苗株CVI988株和814株的Meq基因序列进行比对分析。【结果】17株分离株中除HNGS201和HNLC503的Meq基因扩增产物较预期稍大外,其余15个的片段长度为1 020bp,与预期长度相符;MDV河南分离株之间及其与参考毒株Meq基因的核苷酸同源性为99.0%~100%,部分毒株Meq基因的氨基酸序列有10个位点的氨基酸存在规律性突变;MDV河南分离株和参考株共组成3个进化分支,其中强毒株GA、RB1B和648A位于一个分支,分离株HNGS201、HNLH304、HNLC503与mMDV毒株CVI988和814位于同一分支,其余14株分离株位于另一个较大的分支。【结论】河南省可能流行着不同毒力的MDV,一些mMDV毒株的Meq蛋白存在59个或60个氨基酸的插入。     

不同毒株马立克氏病病毒囊膜糖蛋白gI基因的克隆和序列分析

根据马立克氏病病毒 (MDV)国际标准株 GA的基因序列 ,设计合成一对引物。通过 PCR技术 ,分别以弱毒疫苗株 81 4和广西分离强毒株 G2 株基因组为模板 ,扩增获得预期大小的 PCR产物 ,将 PCR产物和 p UC1 8分别经 Bam H 和 Sma 酶切后 ,连接、转化 TG1 ,筛选获得了 81 4 -g I和 G2 -g I的基因克隆 ,将所得克隆进行测序 ,并将它们与已发表的MDV其他毒株 g I的序列进行比较分析 ,获得了它们的同源性 ,绘制了系统发生树