3种奶牛乳房炎主要病原菌的PCR检测方法建立

奶牛乳房炎是影响奶业健康发展的一种重要细菌性疾病,迫切需要建立一种敏感、特异的检测方法,以实现奶牛乳房炎的快速、准确诊断。现根据奶牛乳房炎主要致病菌16~23S rRNA之间的序列设计引物,建立检测金黄色葡萄球菌,无乳链球菌,停乳链球菌等3种奶牛乳房炎主要致病菌的PCR检测方法。用建立好的PCR检测方法对临床患病奶牛获取的31份样品进行特异性和敏感性检测。结果显示：PCR检测方法能快速、特异地检测出3种奶牛乳房炎主要致病菌,从而确定致病菌型。对金黄色葡萄球菌,无乳链球菌,停乳链球菌的检测灵敏度分别为1×106 cfu/mL、1×106 cfu/mL、1×103 cfu/mL。因此,该方法可作为一种常规检测的替代方法。     

山东地区乳房炎和非乳房炎牛奶中金黄色葡萄球菌的分离鉴定与耐药分析

为了解山东地区不同类型牛奶中金黄色葡萄球菌流行情况和耐药特征,对37个牧场的乳房炎和非乳房炎奶样进行细菌分离鉴定及MIC测定试验。采用常规方法与PCR技术进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定,微量肉汤稀释法进行MIC测定,卡方检验进行数据差异显著性分析。①共分离到150株金黄色葡萄球菌,检出率为11.26%(150/1332),且乳房炎奶样显著高于非乳房炎(P=0.009);②12种药物的MIC与EUCAST分布趋势大致相同;③分离菌株对青霉素(91.38%)耐药最严重,且乳房炎/非乳房炎奶样差异显著(P=0.047);④116株分离菌株中多重耐药(≥3)菌株为34(29.31%)株,乳房炎/非乳房炎奶样差异不显著(P=0.611);⑤威海对6种药物的耐药率在60%以上,其他地区仅对1~2种药物的耐药率在50%以上。乳房炎奶样的金黄色葡萄球菌检出率显著高于非乳房炎;分离菌株对青霉素严重耐药且乳房炎奶样多重耐药问题突出;不同地区均呈现不同程度的耐药。     

病犬大肠杆菌16S rRNA甲基化酶基因检测研究

摘要：为了解郑州市发病犬大肠杆菌对氨基糖苷类药物高度耐药的16S rRNA甲基化酶流行情况,本研究测定了分离自河南郑州市宠物医院发病犬的123株大肠杆菌对氨基糖苷类代表药物阿米卡星的敏感性;分别设计6种16S rRNA甲基化酶基因特异性引物,对耐药分离株进行16S rRNA甲基化酶基因PCR扩增检测。检测结果显示,在发病犬大肠杆菌中仅检测到armA和rmtB,其检出率分别为3.25%（4/123）和38.2%（47/123）。其中,有3.25%（4/123）的大肠杆菌可同时检测到armA和rmtB。这些结果提示,此地区发病犬大肠杆菌16S rRNA甲基化酶基因以rmtB为主。病犬细菌一旦携带这些耐药基因,可导致对氨基糖苷类药物高度耐药,应引起重视。     

不同中药对奶牛乳房炎病原菌抑菌效果的观察

本试验采用琼脂平板扩散法(打孔法),研究了黄芩等21种中药对从乳房炎奶牛乳汁中分离出的3种主要致病菌的体外抑菌情况。结果发现,大肠杆菌对黄芩高度敏感,对丹参、青翘属中度敏感;金黄色葡萄球菌对黄芩、青翘、丹参、地榆、红花、蒲公英高度敏感,对枳壳、忍冬藤、萹蓄、苦地丁、蟾酥、木通中度敏感;无乳链球对地榆、当归属高度敏感,对青翘、黄芩、蒲公英、丹参、苦地丁、红花、川芎、枳壳中度敏感。为防治奶牛乳房炎有效中药复方的筛选提供了理论依据。     

猪源绿色气球菌的分离鉴定及16S rRNA基因序列测定与遗传进化分析

为研究引起广东部分地区猪场仔猪发生急性死亡的致病菌及其系统发育地位,本研究从广东英德、惠州龙门、翁源、汕头等地区猪场急性死亡病仔猪中分离到6株呈α溶血的细菌。通过细菌形态学观察、生化特性鉴定、药敏试验、致病性试验以及16S rRNA基因的序列分析,确定为猪源绿色气球菌,分别命名为HD、WY、ZQ、LM、YD和ST。动物感染试验表明：6株分离菌株均具有不同程度的致病性;药敏结果显示：6株分离株均对头孢曲松、头孢唑啉、恩诺沙星、阿莫西林高度敏感,对新生霉素、利福平、阿米卡星、庆大霉素、多粘菌素B中度敏感,对其他抗生素均耐药;同源性及遗传进化分析结果显示：6株分离株与12株国内外参考菌株核苷酸同源性在93%以上,其中与澳大利亚分离自犬的15MS株同源性最高,为98.1%,与广西分离自猪的GXBL-1株同源性最低,为83.6%;6株分离株与广东分离株和澳大利亚分离株亲缘关系最近,暗示进化不存在明显的地域相关性。本研究确定了广东部分地区引起规模化猪场仔猪发生急性死亡的病原菌,为该菌引起的疾病的防治提供了依据。     

奶牛乳房炎的防治

乳房炎是奶牛常见的疾病,是造成奶牛生产经济损失的重要原因之一。乳房炎的病原体有80～130多种,其中主要的病原为无乳链球菌、停乳链球菌、金黄色葡萄球菌、霉形体、乳房链球菌、大肠杆菌等。     

质粒介导的喹诺酮类耐药基因在鸡源大肠杆菌中的流行

为了解河南省质粒介导的喹诺酮类耐药基因(qnrA、qnrB、qnrS、qepA和aac(6′)-Ib-cr)在产16S rRNA甲基化酶鸡源大肠杆菌中的流行与分布,分别设计特异性引物对2005-2008年在河南省病鸡病料中分离保存的158株16SrRNA甲基化酶阳性鸡大肠杆菌进行PCR扩增。结果显示,在158株产16S rRNA甲基化酶鸡源大肠杆菌中,qnrA、qnrB、qnrS、qepA和aac(6′)-Ib-cr的检出率分别为0.6%,2.5%,13.9%,2.5%和58.2%。提示质粒介导的喹诺酮类耐药基因在河南省产16S rRNA甲基化酶鸡源大肠杆菌中普遍存在,且以qnrS和aac(6′)-Ib-cr为主。     

6株副猪嗜血杆菌的分离鉴定及16S rRNA序列分析

对福建省一些猪场临诊疑似副猪嗜血杆菌感染的病例的病例进行细菌分离鉴定,PCR扩增分离菌株的16S rRNA并进行测序分析,对分离菌进行细菌形态和PCR鉴定及序列分析。结果显示,获得6株副猪嗜血杆菌分离株,该6株分离株之间的同源性在99%以上,而与国内外参考菌株序列之间的同源性在84.5%-99.2%。发育进化树分析结果表明,分离菌株与血清4型和5型的关系较近,与其他血清型关系较远。     

一株家蚕病原菌的分离鉴定及其药敏试验

从自然死亡家蚕分离得到一菌株zl1-r,回复感染确定其为家蚕病原菌。对该菌进行形态学观察及16S rRNA序列分析,结果显示该病原菌为气单胞菌属(Aeromonas spp.)。药敏试验结果显示,该病原菌对庆大霉素,强力霉素,链霉素,环丙沙星,壮观霉素,卡那霉素,氧氟沙星,多粘菌素有很强的敏感性,对交沙霉素,青霉素,新霉素,阿奇霉素,罗红霉素中度敏感,对头孢唑啉,磺胺甲基异哑唑不敏感,对乙酰螺旋霉素,氨苄西林,头孢拉定片,有耐药性。     

规模养殖场奶牛乳房炎感染调查与免疫试验

奶牛乳房炎是由大肠杆菌、链球菌、葡萄球菌等多种原微生物引起的奶牛乳房发炎,牛奶中体细胞增多等为特征的综合性疾病,严重阻碍着奶牛业的发展。发生乳房炎后即可导致产奶量下降,奶品质降低,严重者乳区化脓、坏死、萎缩,永久失去泌乳功能,给奶牛场造成严重的经济损失。患病奶牛使用抗菌素,则因食品安全所带来的后果又严重影响公共卫生。为摸清奶牛乳房炎发病情况,寻找最佳防制措施,降低发病率,提高产奶量,增加经济效益,我们对某规模化奶牛场进口奶牛乳房炎发病情况及危害程度进行了调查,并引进乳房炎疫苗开展了免疫试验。     

新疆牛羊源耐药大肠杆菌β-内酰胺酶及16S rRNA甲基化酶基因检测

摘要：【目的】了解新疆某羊场、牛场耐药大肠杆菌携带 β-内酰胺酶和/或 16S rRNA 甲基化酶基因及其共存情况。【方法】通过 PCR 方法对 168 株羊源和32株牛源耐β-内酰胺类药物大肠杆菌进行 β-内酰胺酶及 16S rRNA 甲基化酶基因检测,并对检出基因的 PCR 产物测序。【结果】检测结果为：羊源大肠杆菌携带的 -内酰胺酶基因为blaTEM（42.26%,71/168）和blaCTX-M（2.98%,5/168）;牛源大肠杆菌携带的-内酰胺酶基因为blaTEM（15.63%,5/32）基因,未检出blaCTX-M;两个养殖场均未检出其他被检基因。羊源、牛源大肠杆菌携带的16S rRNA甲基化酶基因为rmtB基因,其检出率分别为4.17%（7/168）和50.00%（16/32）,均未检出armA基因。基因共存情况：3（1.79%）株羊源菌同时携带blaTEM和blaCTX-M基因,7（4.17%）株羊源菌同时携带blaTEM 和rmtB 基因;2（6.25% ）株牛源菌同时携带blaTEM 和rmtB基因。【结论】羊源和牛源分离的大肠杆菌中存在-内酰胺酶和16S rRNA甲基化酶基因介导的细菌耐药,均以blaTEM和rmtB基因为主。此外,存在不同类型耐药基因共存于同一株耐药菌的现象。     

丝状支原体山羊亚种FJ-GT株的分离和鉴定

为明确福建省某羊场发生的疑似山羊传染性胸膜肺炎病例的病原,对肺组织的病原进行分离培养和纯化,通过生化试验和特异性PCR方法进行鉴定,用16S rRNA通用引物对分离株进行克隆测序。将分离菌株命名为FJ-GT。结果显示菌落呈典型的油煎蛋状,中心有棕褐色突起;分离株能发酵葡萄糖,不能水解精氨酸,不分解尿素,血细胞吸附试验呈阴性,胆固醇需要试验、美兰还原反应和氯化四氮唑还原反应均呈阳性,溶血试验为β溶血;PCR结果扩增出丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoidessubsp. capri, Mmc)特异大小为394 bp 的目的片段;菌株16S rRNA 序列与丝状支原体山羊亚种标准株PG3 的序列比较,同源性为99.5%。鉴定结果表明本次分离到的支原体为丝状支原体山羊亚种。本研究首次从病原学角度证明了福建省存在由丝状支原体山羊亚种引起的羊支原体性肺炎,对福建省羊支原体性肺炎的诊断和有效防控具有重要的指导意义。     

家兔葡萄球菌病的临床症状与防治方法

<正>家兔葡萄球菌病是由金黄色葡萄球菌引起的一种多病症传染病的总称,临床上主要表现为脓肿、脓毒败血症、乳房炎、仔兔黄尿病等。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性,能产生高效价的8种毒素。一、流行特点家兔对金黄色葡萄球菌非常敏感,不同品种、年龄的家兔均有较强的敏感性。可通过皮肤、黏膜的损伤、脐带、消化道、乳房(乳汁)等不同途径直接接触感染。该病呈散发性或地方性流行,病兔和带菌兔是该病的主要传染源。二、临床症状(一)鼻炎     

中草药治疗奶牛急性乳房炎的疗效观察

应用乳康散,以青、链霉素和公英散为对照,对150头奶牛的急性乳房炎进行临床治疗试验。结果显示:乳康散、青链霉素和公英散对奶牛急性乳房炎的治愈率分别为86.0%、72.0%和60.0%,在2个疗程(6 d)内的治愈率分别为72.0%、30.0%和44.0%。经统计学分析,试验与对照组的治愈率和疗程都存在显著差异,说明乳康散疗程短,临床疗效好。     

外敷药防治隐性乳房炎的临床研究

试验采用杨凌莱夫尔公司生产的“乳炎宁” 搽剂，对隐性乳房炎奶牛进行治疗试验。将年龄、胎次、分娩时间、日产奶量接近的14头患隐性乳房炎的奶牛随机分为试验组和对照组，另选7头年龄、胎次、分娩时间与以上两组接近的健康牛作为健康对照组。试验组外敷用药，每日两次，对照组和健康组不用药，其它饲养管理条件相同。一周后，进行 BMT检测隐性乳房炎情况，并采混合乳测定体细胞数和乳成分。试验结果显示：实验组奶牛乳中体细胞数显著下降67.3%，与对照组相比，差异极显著（P<0.01），药物对隐性乳房炎的有效率为 79.8%，表明“乳炎宁”对奶牛隐性乳房炎有显著疗效。     

中华鳖3种细菌的鉴定及致病性研究

针对一例中华鳖(Trionyx sinensis)爆发性死亡疾病,本研究旨在寻找其致病因子,明确分离菌的生物学地位、致病性和耐药特征。从患病中华鳖体内获得菌株C1、C2 和C3,经人工回归感染健康鳖,测定分离菌的致病作用;经形态学观察、生理生化鉴定及16S rRNA测序,结合系统发育学分析,做菌种的归类判定;用琼脂扩散(K-B)法测定菌株对抗生素药物的敏感性。分离纯培养的3 株菌分别为弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)、摩氏摩根氏菌(Morganella morganii)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae);能引起中华鳖急性感染性疾病,3 种菌共同致病死亡率最高,可达100%。药敏试验结果显示：弗氏柠檬酸杆菌对头孢他啶、头孢曲松、左氧氟沙星高度敏感,对万古霉素等17 种药物耐药;摩氏摩根氏菌对头孢他啶和头孢曲松高度敏感,对克林霉素等17 种药物耐药;肺炎克雷伯氏菌对恩诺沙星等13 种药物敏感,对青霉素等6 种药物耐药。本研究所检出的弗氏柠檬酸杆菌、摩氏摩根氏菌和肺炎克雷伯氏菌为该例中华鳖爆发性死亡疾病的病原菌,3 菌混合致病力强于单一菌液。弗氏柠檬酸杆菌和摩氏摩根氏菌呈现高度多重耐药,肺炎克雷伯氏菌耐药趋势异于前两者,表现为弱耐药株。     

罗氏沼虾维氏气单胞菌的分离鉴定

为了判断罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)幼虾发病死亡的原因,本研究从濒死的罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)中,分离了一株具有生长优势的菌株,对分离菌株形态学、革兰氏染色、生理生化进行鉴定。结果表明,该分离菌株为革兰氏阴性,氧化酶、赖氨酸脱羧酶、枸缘酸盐、吲哚、甘露醇、蔗糖、麦芽糖、V-P、纤维二糖为阳性,并对该分离细菌16S rRNA基因进行序列以及系统发育树分析,该分离菌株与维氏气单胞菌聚为一支,其亲缘关系较近,对该分离菌株理化性质和16S rRNA序列综合分析,可判断该分离菌株为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii,登录号MN733186)。以浸泡法进行人工感染实验,证明了该分离菌株对罗氏沼虾幼虾具有较强致病性,对分离细菌的药物敏感性进行检测,结果显示,该菌株对头孢曲松、氯霉素、氟苯尼考、多西环素和利福平5种药物高度敏感,对新生霉素和复方新诺明2种药物中度敏感,对环丙沙星、诺氟沙星、红霉素、阿奇霉素、链霉素、卡那霉素、四环素7种药物耐药。本研究实验结果为罗氏沼虾维氏气单胞菌的病原鉴定及药物诊治提供一定的参考和理...     

16S rRNA与Vitek-32对临床感染猪肠球菌鉴定结果比较

【研究目的】旨在研究两种常用的细菌分型方法对感染猪的肠球菌鉴定结果进行比较。【方法】对从河南洛阳、济源、许昌、南阳等地送检病猪体内分离到42株革兰阳性球菌分离纯化后,分别用16S rRNA基因序列和Vitek-32全自动细菌鉴定系统对其进行鉴定。【结果】Vitek-32对42株分离菌中的34株鉴定到种的水平,分别是粪肠球菌(E. faecalis) 10株、屎肠球菌(E. faecium) 2株、铅黄肠球菌(E. casseliflavus) 22株;另有8株未成功鉴定。16S rRNA基因序列分析对42株分离菌成功进行了鉴定,分别为粪肠球菌12株,屎肠球菌30株。通过对两种方法鉴定结果比较发现,Vitek-32鉴定的10株粪肠球菌中除1株被16S rRNA鉴定为屎肠球菌外,其余9株均相同;Vitek-32鉴定的2株屎肠球菌与16S rRNA鉴定结果相同;Vitek-32鉴定的22株铅黄肠球菌除了1株被16S rRNA鉴定为粪肠球菌外,其余全部被鉴定为屎肠球菌;8株未被Vitek-32鉴定的肠球菌中,16S rRNA将其鉴定为2株粪肠球菌和6株屎肠球菌。【结论】在感染猪的肠球菌分型鉴定中,Vitek-32对粪肠球菌鉴定结果与16S rRNA比较具有较高的一致性（75％）;而对于屎肠球菌的鉴定结果与16S rRNA比较出现了较大的差异（93.3％）。     

一株牛源醋酸钙不动杆菌的分离鉴定、药敏试验及耐药基因检测

为研究醋酸钙不动杆菌的致病机制及防控措施,对疑似患有醋酸钙不动杆菌的病死牛肺脏组织进行病原分离,得到了1株优势菌命名为9-1。对分离菌株进行形态学观察、生化试验、16S rDNA基因序列测定,动物致病性试验和药敏试验。结果显示,分离菌株为革兰阴性杆菌且对试验小鼠具有较强的致病性,经生化试验和16S r DNA基因序列测定分析确定为醋酸钙不动杆菌。药敏试验结果显示该分离菌株对氟苯尼考、头孢噻肟、头孢氨苄、阿奇霉素耐药,对其余8种测试药物敏感。经β-内酰胺类(TEM、DHA、OXA-23、OXA-58)耐药基因检测结果显示均为阴性。为醋酸钙不动杆菌引起的疾病选择合理的抗菌药物提供了一定科学依据,并为进一步研究其耐药机制奠定了基础。     

一例鸡金黄色葡萄球菌感染的分离与药敏试验

采集鸡关节肿胀渗出液、骨髓等进行细菌分离,对分离菌进行形态学观察、革兰氏染色、PCR鉴定、16S rDNA序列测定和药敏试验。经分离培养试验,从病鸡采集样品中分离出1株,在LB固体培养基上呈圆形,表面光滑湿润整齐有隆起,普通PCR检测16S rDNA结果呈阳性,细菌16S rDNA核酸序列Blast比对结果显示为葡萄球菌。分离菌对萘啶酸、磺胺复合物、氧氟沙星、环丙沙星、诺氟沙星具有耐药性。