传染性法氏囊病病毒VP2基因植物表达载体的构建

采用含传染性法氏囊病病毒(HK46毒株)VP2基因的质粒FA-pAlter为模板，根据其序列设计引物进行PCR扩增，得到1．3kb左右的VP2基因产物；用Bgl Ⅱ和Nhe Ⅰ酶切后纯化，并在T4DNA连接酶的作用下，将其定向克隆到经Bgl Ⅱ和Nhe Ⅰ不完全酶切后的pcAMBIA3301质粒上，构建成VP2植物表达载体。以电击转化法将重组质粒导入根癌农杆菌LBA4404中，并用PCR方法进行了鉴定，为下一步的植物转基因研究生产可食用疫苗打下了基础。     

紫花苜蓿病毒病病株空间分布型及抽样技术研究

【目的】 明确紫花苜蓿病毒病病株空间分布型及其适合的抽样方法。【方法】 通过扩散型指标Iδ及其偏离度显著性F0检验、聚集指标（C,M*,M*/xˉ,I,K 与C）和Iwao 回归分析法研究了紫花苜蓿病毒病病株空间分布型。【结果】 紫花苜蓿病毒病病株空间分布型为聚集分布,分布的基本成分为个体群,个体群之间分布是聚集的;分析并确定了在不同病株率下保证抽样质量的理论抽样数量;通过对采用平行线、“Z”字型、“W”型、五点式、单对角线、双对角线6 种抽样方法获得的调查数据统计分析、比较,发现平行线抽样方法变异系数最小,更适合苜蓿病毒病病株空间分布型的调查。【结论】 紫花苜蓿病毒病病株空间分布型为聚集分布,适合的抽样方法为平行线法。     

利用转基因植物生产口蹄疫可饲疫苗的研究进展与前景

从口蹄疫可饲疫苗的研究概况、生产技术要点、优缺点及需要改进的问题几方面阐述了利用植物反应器生产口蹄疫可饲疫苗的研究前景。综述了口蹄疫可饲疫苗的研究进展，介绍了利用植物反应器生产口蹄疫可饲疫苗的技术要点，包括在口蹄疫病毒遗传转化质粒载体系统中最常用的农杆菌介导法，提出了生产口蹄疫可饲疫苗需要改进的技术问题。     

AMV和WCMV在转基因红三叶中的基因累集

随着转基因技术的发展及其在植物育种中的应用,出现了一大批表现优良、经济效益高的转基因植物,但生产实践要求一种植物同时具有多个优良的转基因性状。目前解决这一问题的方法主要是基因累集(Gene pyramiding),就是将多个基因集中到同一植株,可以将已经转入1个基因的植株做原材料,用农杆菌介导或基因枪等方法将另一基因转进去。也可以采用人工杂交,在不同转基因植株之间进行人工授粉,从后代中筛选出所需要的基因型。本研究对抗苜蓿花叶病毒(AMV)的转基因红三叶和抗白三叶花叶病毒(WCMV)的转基因红三叶进行了人工杂交,以期获得兼有2个基因、同时抵抗2种病毒的新植株,为下一步的育种打好基础。几乎所有的杂交组合都结了种子,杂交一代的发芽率随杂交亲本转基因拷贝数的不同而有所变化,只有1个转基因拷贝的亲本其杂种发芽率最高。对所有幼苗先用PCR进行检测,从中挑出较理想的基因型作进一步的分子生物学分析。Southern和Northern印迹分析结果表明,有些杂交一代的转入基因多于1个拷贝,有一部分同时兼有2种抗病基因,并且得到了表达。为进一步检测其抗病性,对它们进行了温室接种和田间评估,结果显示,尽管有的个体Northern分析呈阳性,但在田间仍然对病毒敏感,不过其感病程度都比对照有显著降低。大多数兼有2种转入基因的植株都能同时抵抗2种病毒,可以作为免疫个体供下一步育种之用。与遗传转化相比,人工杂交以其操作简单、省时省力、预见性强和准确率高而具有明显优势,是常规育种方法在分子育种中的具体体现。     

Estimation of roaming dog populations in Timor Leste

The continued spread of rabies through the eastern islands of Indonesia poses a risk of rabies introduction to Timor Leste. To prepare for such an incursion and to undertake surveillance activities, the size and distribution of the roaming dog population needs to be estimated. We present the results of the first such surveys ever undertaken in Timor Leste.     

猪伪狂犬病毒PCR检测方法的建立及应用

根据猪伪狂犬病毒（PRV）gE基因序列保守区段,设计一对特异性引物,通过优化反应条件,建立了可区分猪伪狂犬病毒野毒株与基因缺失疫苗株的PCR检测方法,并对该方法的敏感性、特异性和重复性进行了验证。结果显示,该PCR方法可扩增出388 bp的目的片段;对模板的最低检测量为1.1 pg;与猪圆环病毒Ⅱ型、猪细小病毒、猪支原体、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪乙型脑炎病毒、猪流行性腹泻病毒无交叉反应,具有高特异性。采用建立的PCR方法对2014年以来全国不同地区81个猪场421份疑似病料进行检测,发现PRV猪场平均阳性率为35.80%,样品平均阳性率为 25.42%。该方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于PRV的临床诊断和流行病学调查。     

表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒疫苗免疫持续期试验

用表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因的重组鸡痘病毒（rFPV～gB—F）制备的疫苗免疫4周龄SPF鸡,免疫后的7、14、21、30、60、90、120、150、180d分别采血,分离血清,检测抗FPV和gB的抗体。结果表明重组疫苗免疫后14d,免疫鸡血清抗体已经全部阳转,免疫后的21d血清抗FPV的抗体出现峰值;此后便开始回落,到免疫后的6个月抗体水平已经接近阴性对照的水平。抗gB的抗体在免疫后的第二周达到阳性,之后的六个月都为阳性。在免疫后的每个月将免疫鸡取20只再分成两组。分别用新城疫强毒与传染性喉气管炎强毒的攻击。在免疫后的第一个月对新城疫的保护率为8／10,第2个月对新城疫的保护为7／10,第3个月为2／10,因此对新城疫的免疫保护期为2个月。在免疫后的5个月内可以使免疫鸡对传染性喉气管炎强毒攻击的保护率达到8／10以上,免疫后的6个月对ILT为8／13．因此rF—PV-gB—F对传染性喉气管炎的免疫保护期为5个月。     

表达传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒疫苗免疫持续期试验

将200003批疫苗免疫4周龄SPF鸡,免疫后的7、14、21、30、60、90、120、150、180和225 d分别采血,分离血清,采用ELISA方法检测血清抗FPV抗体,结果表明重组疫苗免疫后14 d,免疫鸡血清抗体已经全部阳转,免疫后的21 d血清抗FPV的抗体出现峰值,此后便开始下降,到免疫后的6个月抗体水平已经接近阴性对照的水平.用ILTV WG株和FPV 102株强毒进行的攻毒保护试验与血清检测的结果基本一致,在免疫后的5个月内可以使免疫鸡获得100%(10/10)保护,免疫后的6个月对ILT和FP的免疫保护分别为1/7和2/10,此时需要对鸡群实施二次免疫.其他5批疫苗(200001、200002、200101、200102和200103)免疫SPF鸡后5个月用ILTV WG株和FPV 102株攻击也获得了完全保护.     

鸭源流感病毒人工感染鸡的病毒抗原定位动态

研究了由南京地区分离的鸭源流感病毒A/duck/Nanjing/21/95（H9N2？）感染商品来航鸡后,各组织脏器中病毒分离情况和病毒抗原分布。结果表明,禽流感病毒（AIV）可以从肾脏、肺脏、脾脏和心脏中分离出来,接种后3d(PI3）,病毒在组织中的分离率最高,且又以肾脏的分离率最高。病毒抗原主要分布在肾小管上皮细胞、呼吸系统单核细胞和少量上皮细胞的胞核内,PI3时病毒抗原的检出率最高。这些结果表明,肾脏是该毒株复制的主要部位,肾脏的病变是病毒直接损伤的结果,而且该株AIV具备在呼吸系统内复制的潜力。     

桑树病毒与病毒病的研究进展(Ⅰ)

桑树病毒病是危害桑树的一类重要病害。简要介绍已发现的10种桑树病毒病的病原分类、分布及部分病毒病危害桑树的典型病征,重点总结了桑坏死病毒病、桑潜隐病毒病、桑环斑病毒病、桑大斑块花叶病毒病等在病原物分离提取和病毒的基本性状、基因组等基础研究,以及病毒的寄主范围、侵染特征和病害诊断与防治方面的研究进展,为桑树病毒病的综合防治提供指导。