非洲菊离体培养瓶内诱导生根的研究

以非洲菊试管苗为试材,探讨了IBA、IAA和NAA及以无机基质为载体的无琼脂固体培养诱导其生根的效果。结果表明:3种生长素类物质以IBA诱导生根的效果最好,其最适浓度为0 3mg·L-1;3种生长素类物质随着使用浓度的升高其驯化移栽成活率均表现出降低的趋势;以珍珠岩、蛭石取代琼脂进行无机基质固体培养来诱导生根的实验结果是生根率、单株根数及生长势虽略低于琼脂固体培养,但移栽驯化成活率高,从商业生产的角度看,可以降低生产成本,其中以珍珠岩的效果为好,其生根率达94 4%,移栽驯化成活达100%。     

猕猴桃若干优良株系的离体繁殖

以１ａ生硬枝的饱满的芽作外植体，接种于Ｎ６附加玉米素１ｍｇ／Ｌ的培养基诱导成苗．芽苗切成带腋芽的茎段转入“中华”＋Ⅰ、砂糖２％、琼脂０．７％、ｐＨ５．５的培养基中．每３０－４０ｄ继代一次，在获得大量芽苗后，把其转入Ｎ６附加ＩＢＡ０．４ｍｇ／Ｌ的培养基中生根成苗．健壮的试管苗经炼苗后移植到疏松、肥沃的土壤中并加强管理，成活率一般可达９０％左右．     

猕猴桃若干优良株系的离体繁殖

以ｌａ生硬枝的饱满的芽作外植体，接种于Ｎ６附加玉米素ｌｍｇ／Ｌ的培养基诱导成苗。芽苗切成带腋芽的茎段转入“中华“＋Ｉ、砂糖２％、琼脂０．７％、ｐＨ５．５的培养基中，每３０－４０ｄ继代一次，在获得大量芽苗后，把其转入Ｎ６附加ＩＢＡ０．４ｍｇ／Ｌ的培养基中生根成苗，健壮的试管苗经炼苗后移植到疏松、肥沃的土壤中并加强管理，成活率一般可达９０％左右。     

美味猕猴桃的离体繁殖及种质试管苗保存

美味猕猴桃(Actinidia deliciosaa C.F.liang et A. R. Ferguson)的试管苗离体腋芽,在附加.BA(3.0μg/g)、IBA(0.5μg/g)、GA(0.5μg/g)的MS培养基上,腋芽的萌发率达100%,可以代替昂贵的玉米素(ZT);用5μg/g NAA加在MS培养基中,促使小苗生根,生根率达100%,平均每株生根数19.9条;待茎木质化后移栽,移栽成活率在80%以上。美味猕猴桃种质试管苗,在MS培养基中附加50μg/g的B₉(N-dimethyl-succinamic acid),室温(8℃～34℃)下保存9个月后存活率达85%。     

胡杨离体快繁及生根技术研究

采用MS为基本培养基,通过加入不同浓度的的生长调节剂,对胡杨的离体增殖与生根培养基进行筛选,结果表明:胡杨离体增殖培养的最适培养基配方为MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.5 mg/L,增殖率达87%;最佳生根培养基为1/2MS+IBA1.5 mg/L,生根率达到了97%,并将生根的胡杨苗进行移栽,成活率达24%。     

单子山楂枝条的离体培养和生根

描述了单子山楂的离体繁殖方法.结果表明,BGS 培养基有利于扦插枝条侧芽的萌发.MS 基本培养基加入0.1 mg·L~(-1)的 IBA 和1 mg·L~(-1)的 BAP 就能有效地诱导芽丛分化,再提高 BAP 的浓度或加入 GA_3都没有增加分化芽效.在诱导单子山楂枝条在培养基中生根时,NAA 的效果显著优于 IBA,其中尤以 NAA 0.5 mg·L~(-1)的用量最佳.两种基本培养基(1/2MS 和 MS)的生根效果差异不显著.连续黑暗处理一周不仅未增加枝条的生根率,反而使生根率显著降低.叶片愈伤组织诱导的初步研究表明,当加入0.1 mg·L~(-1)IBA 时,1～2 mg·L~(-1)的 BAP 能够有效地诱导愈伤组织产生.     

桂花幼胚的离体培养及生根诱导

对3个桂花品种大花金桂、籽银桂、籽丹桂进行幼胚的离体培养,研究了不同消毒时间、基本培养基及生长调节剂组合对离体幼胚萌发的影响,以及不同培养条件和培养基配方对萌发苗生根的影响。结果表明,适合幼胚萌发的适宜培养基,大花金桂为:B5+1 mg/L 6-BA+3 mg/L GA;籽银桂:B5+2 mg/L 6-BA+2 mg/L GA;籽丹桂:B5+1.5 mg/L 6-BA+1 mg/L GA。生根适宜培养基为:1/2 MS+2 mg/L NAA。     

3个蓝莓品种叶片离体再生及生根技术研究

[目的]筛选具有较高诱导分化率的蓝莓品种。[方法]以Sierra、Bluecrop和Toro蓝莓品种试管苗为试材,以改良WPM为基本培养基,研究不同浓度的玉米素(ZT)和生长素(IBA)对3个蓝莓品种叶片离体再生分化率及生根速度的影响。[结果]不同的蓝莓品种叶片离体再生能力不同,以Toro叶片的再生能力最强,Bluecrop最差。ZT浓度在0.15 mg/L时对蓝莓叶片离体再生效果最佳,IBA对蓝莓叶片离体再生能力影响较小。不同品种之间的叶片生根速率差异十分显著,在相同生长素浓度下,3个品种的生根率由低到高依次是Bluecrop相似文献   

软枣猕猴桃离体快速繁殖技术

以软枣猕猴桃(Actinidia arguta)枝条萌发的幼芽为外植体,以MS为基础培养基,添加不同质量浓度的细胞分裂素6-BA、生长素NAA和IBA,探索了软枣猕猴桃的离体快速繁殖技术。结果表明,软枣猕猴桃丛生芽增殖的最佳培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA+30 g/L蔗糖,p H为5.8~6.0,在此条件下,其平均增殖系数为4.69,且诱导的无菌苗健壮;最适生根培养基为1/2MS+0.4 mg/L IBA+30 g/L蔗糖+2.0 g/L活性炭,生根率达100%,且根系健壮、数量繁多。     

小鼠心肌细胞的体外培养

对采用组织块法和酶消化法体外培养小鼠心肌细胞的结果进行了比较,并对体外培养心肌细胞的生理活性进行了初步测定。结果表明,用组织块法分离培养胎、乳鼠心肌可得到自主节律性搏动的心肌细胞;分别用1g/L胶原酶+10g/LBSA,0.5g/L胰酶+1g/L胶原酶,1g/L胰酶分离培养胎、乳鼠心肌,均可得到大量心肌细胞,且细胞活力较好,能自主博动20d以上;用上述2种方法分离培养成年鼠心肌,结果均不理想;在载有自主节律性搏动的小鼠心肌功能性细胞团的培养皿中加入Ca2+和肾上腺素后,细胞团搏动速度加快,搏动力加强;加入K+后则细胞团搏动速度减缓,搏动力减弱,其对钾、钙、肾上腺素的反应与在体内基本一致,表明体外培养的小鼠心肌细胞具有与在体心肌细胞相似的功能。     

培养条件对牛卵母细胞体外受精后胚胎发育的影响

以屠宰场牛卵巢为材料,采用体外成熟、体外受精、早期胚胎的体外培养等方法,研究了牛卵泡液(BFF)浓度、颗粒细胞单层(GCM)和培养微滴大小对牛卵母细胞体外发育潜力的影响。结果表明:(1)与未添加BFF的对照组相比,成熟培养液中分别加入10%,20%和40%的混合BFF,均可明显促进卵母细胞受精后的发育(P<0.05),但20%组和40%组出现卵母细胞或胚胎粘连。因此,成熟培养液中以添加10%的混合BFF较为适宜。(2)添加GCM对1级卵母细胞的卵裂率、6~8细胞发育率和囊胚率无显著影响(P>0.05);但添加GCM的2级、3级卵母细胞受精后的卵裂率、6~8细胞发育率和囊胚率分别显著高于未添加组(P<0.05)。(3)将取自每头牛的约20枚卵母细胞,分别置于不同大小的微滴(30,50,100和200μL)中培养、受精,结果表明,30和50μL组的囊胚发育率显著高于100和200μL组(P<0.05)。     

山羊胎儿成纤维细胞的冷冻保存和体外培养

将胎儿成纤维细胞悬浮于不同的冷冻保护液中 ,在不同的温度下进行冷冻保存试验。结果显示 ,当保护液中含有 90 0 m L / L胎牛血清 (FBS)时 ,- 196℃下保存的山羊胎儿成纤维细胞解冻后的细胞贴壁率高于- 80℃ ,且前者贴壁细胞增殖也较后者快 ,二者间差异显著 ;而在 - 2 0℃条件下只有一小部分细胞能够存活 ,与前两者相比差异极显著 ,说明 - 2 0℃不适合冷冻胎儿细胞。冷冻保护液中含有 10 0 m L / L二甲基亚砜 (DMSO)的保护效果明显好于 5 0 m L / L DMSO,二者间差异显著。用组织块法培养的细胞 ,在两种培养基 DMEM和 M199中添加 10 0 m L / L FBS和 2 mm ol/ L 2 -巯基乙醇 (2 - Me) ,其组织块成活率及细胞生长速度均高于单纯添加 10 0 m L / LFBS,同时证明 DMEM和 M199都能用于胎儿成纤维细胞的体外培养。以 DMEM培养液为基础 ,分别添加 2mm ol/ L 2 - Me,5 m L / L FBS,10 0 m L / L FBS和 2 m mol/ L 2 - Me+10 0 m L / L FBS对山羊胎儿成纤维细胞进行体外培养 ,结果显示 ,细胞在 10 0 m L / L FBS和 2 mm ol/ L 2 - Me+10 0 m L / L FBS培养液中生长迅速 ,两者间无明显差异 ,2 - Me的存在促进了细胞的增殖 ;两者都与添加 2 m mol/ L 2 - Me组存在显著差异 ;添加 2 m mol/ L 2 - Me和 5m L / L FBS相     

杜梨组培苗两步生根技术体系优化

为解决杜梨组培苗生根率低和移栽成活率低的问题,本研究以杜梨组培苗为试材,通过不定根诱导、不定根生长培养和试管苗驯化移栽环节,筛选出最适杜梨组培苗生长的培养基配方和炼苗方式。结果表明:1)健壮组培苗在添加了1.0 mg/L吲哚乙酸(IAA)和1.0 mg/L萘乙酸(NAA)的NN₆₉(Nitsch & Nitsch Medium)培养基中暗培养7 d后进行不定根诱导,再转接至无生长素类物质的相同培养基中光照培养,组培苗生根率达96%;2)生根组培苗闭瓶炼苗和水培炼苗3周后移栽,成活率均达90%以上。综上所述,前期“高浓度生长素和黑暗培养”和后期“无激素和光照培养”的“两步生根法”适宜杜梨组培苗的生根诱导。杜梨组培苗生根技术的优化,为杜梨无性系砧木的商业化生产提供了技术支持。     

木棉纤维的基本结构和性能

目的进一步完善木棉的组培快繁体系,实现木棉组培苗不定根的定向诱导,提高木棉生根苗的移栽成活率。方法以木棉组培丛生芽为材料,通过激素、纵向划痕和暗培养等3种处理促进根系诱导,比较不同处理下木棉组培苗的生根率、根系数量和移栽成活率,同时对生根过程进行显微观察。结果在单独添加NAA和IBA时,最高生根率分别为19.66%和39.15%;而NAA与 IBA组合处理的生根率可达95.80%,优于两者单独添加处理,且生根苗以1条不定根为主。纵向划痕处理以2~3个划痕效果较好,其生根率可达94%以上,生根苗以2条不定根为主。暗培养处理以6 d最佳,生根率为97.36%,生根苗以1条不定根为主。显微观察发现：木棉组培苗生根属于皮层生根类型。对1、2和3条不定根等3种类型的生根苗进行移栽,其移栽成活率之间无显著差异(P>0.05),但生物量存在显著差异(P<0.05),其中3条不定根的移栽苗生物量最大。结论本研究优化了木棉组培苗的生根条件,为木棉组培苗的移栽炼苗以及不定根的定向调控提供了理论参考。     

鸡胚原壳体外培养研究

以种蛋原壳为鸡胚体外培养的孵化蛋壳,就开孔位置、开孔大小以及鸡胚胚龄对鸡胚体外培养效果的影响进行了研究。结果表明:(1)小头侧面开孔明显优于小头顶端开孔(P<0.01),小头侧面开孔的已孵化3 d鸡胚的孵化率为80.0%,而小头顶端开孔的则只有60.0%;(2)随着开孔直径的增加,鸡胚孵化率呈下降趋势,开孔直径为0.5,1.0和1.5 cm时的孵化率分别为80.0%,30.0%和16.7%;(3)在小头侧面开孔且孔直径为0.5cm时,X期鸡胚和已孵化3 d鸡胚的体外培养孵化率差异达极显著水平(P<0.01),已孵化3 d鸡胚的体外培养孵化率为80.0%,X期鸡胚的孵化率则为0。     

小鼠卵巢颗粒细胞的体外培养

为了探讨小鼠卵巢颗粒细胞体外生长的特点及增殖的调控因素,分别添加2μg/mL胰岛素、50ng/mL FSH和20 ng/mL EGF的培养液培养小鼠卵巢颗粒细胞,每隔24 h对细胞进行计数,研究其对小鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响。此外,还对培养过程中出现的卵巢颗粒细胞集落进行了AKP染色和C-kit免疫组化染色鉴定。结果显示,在培养的第4天添加EGF组和FSH组与对照组相比均具有显著的促增殖作用(P<0.05),添加胰岛素组促增殖作用不显著(P>0.05);卵巢颗粒细胞集落经AKP染色和C-kit免疫组化染色均呈阳性。提示EGF和FSH对小鼠卵巢颗粒细胞具有促增殖效应,小鼠卵巢颗粒细胞具有干细胞的部分特性。     

牡丹试管苗与扦插苗生根过程中相关酶活性的变化

【目的】研究牡丹品种‘凤丹白’无根试管苗和扦插苗生根过程中过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)和吲哚乙酸氧化酶(IAAO)活性的变化,探讨酶活性变化与牡丹生根的关系。【方法】以牡丹品种‘凤丹白’无根试管苗和扦插苗为材料,测定生根过程中POD、PPO和IAAO酶活性变化。【结果】在生根过程中,牡丹试管苗POD活性呈"下降-上升-下降-上升"趋势,PPO和IAAO活性均呈"上升-下降-上升"趋势。而扦插苗POD和PPO活性均呈"上升-下降-上升"趋势,IAAO活性呈"下降-上升-下降-上升"趋势。试管苗POD活性在第3天降到最低值,第1个峰值出现时间较扦插苗推迟1d;PPO活性第1个峰值较扦插苗提前2d,低值推迟1d;IAAO活性第1个峰值和低值出现时间均较扦插苗提前2d。【结论】与试管苗相比,牡丹扦插苗生根过程中POD、PPO及IAAO酶活性的极值出现时间均推迟,这可能与扦插苗生根时间较晚有关。     

野生梭梭的离体培养和植株再生

以野生梭梭带腋芽茎段为外植体进行离体再生研究,探讨不同植物生长调节剂、硝酸银和蔗糖的质量浓度对其愈伤组织诱导、不定芽分化和生根的影响。结果表明,野生梭梭带腋芽茎段愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.0 g/L,诱导率为100%;不定芽分化的最佳培养基为MS+NAA 0.5 mg/L+TDZ 1.0 mg/L+AgNO33.5 mg/L+蔗糖26 g/L+琼脂6.5 g/L,不定芽分化率为97.8%;影响野生梭梭再生的最主要因素是NAA,其次是TDZ和AgNO3,蔗糖影响最小。     

HA对牛卵母细胞体外成熟和早期胚胎体外发育影响的研究

在TCM-199中添加一些确定的辅助成分,探讨在无血清培养基中添加不同浓度HA对牛卵母细胞体外成熟及早期胚胎体外发育的影响。结果表明,在卵母细胞成熟培养液(TCM-199-m)中添加4.0mg/mL的HA时,卵母细胞的成熟率和卵裂率与对照组(BSA)无显著差异(P>0.05),分别为85.14%,83.57%和89.47%,85.24%,但显著高于其他各浓度组(P<0.05),表明HA在卵母细胞无血清成熟培养中可代替BSA。在受精卵体外培养液(TCM-199-c)中添加HA时,囊胚发育率与对照组(BSA)差异不显著(P>0.05),分别为27.64%和26.51%,但显著高于TCM-199-c组(P<0.05),表明HA对牛胚胎体外发育具有明显的促进作用,在无血清培养中可以代替BSA。当在TCM-199-c+HA中添加少量的BSA时,囊胚发育率(31.19%)显著高于其他各组(P<0.05),表明HA欲完全代替BSA还有不完善之处,有待进一步研究。