动物转基因技术的研究和应用前景

文章综述了目前使用的各种转基因动物技术——显微注射法、反转录病毒法、扎刺法、精子载体法、电击法、胚胎干细胞介导法和基因打靶技术 ,并简述了各种方法的优缺点。同时对转基因动物在提高生产性能、异种器官移植、基因治疗和生物反应器方面的研究现状做了较系统的概述。指出了目前存在的问题 ,对其前景进行了展望。     

转基因动物研究进展

在综合了转基因动物近年来的研究进展基础上 ,简述了目前使用的各种转基因方法 ,对各种转基因方法整合表达过程中存在的问题以及提高表达效果等方面进行了初步探讨     

水平显微注射法制备转基因小鼠的研究

由于传统显微注射法具有操作繁琐、技术要求高和外源基因导入率低等局限性,本试验对常规显微注射法进行改进,旨在建立一套比较完善的水平显微注射方法。采用水平微注射系统,将外源DNA片段导入胚胎的雄原核中,获得子代鼠,分娩后3周提取鼠尾基因组DNA,PCR法筛选转基因阳性鼠。本试验采用Puc/BLG IN S和Chym os in基因,共使用710枚鼠原核胚进行研究,胚胎经注射后移植了25只受体,产下仔鼠77只;妊娠率分别为33.3%(5/15)和50%(5/10),胚胎成活率分别为9.47%(41/433)和l3.00%(36/277),阳性率分别为4.88%(2/41)和8.33%(3/36)。将阳性雌鼠配种妊娠后,对外源基因整合情况进行检测,结果表明初步获得了转基因阳性小鼠。     

转基因鸡的制备技术及其利用现状

转基因动物(Transgenic Animals)是指人们对其基因组进行遗传操作(导入目的基因或改变原有基因结构)后,能够使这种改变的遗传信息在其后代中稳定遗传的一类动物,是人类按照自己的意愿有目的有计划地改变动物的遗传组成.     

鼻咽癌来源LMP1转基因小鼠的制备

本试验利用显微注射技术，制备鼻咽癌来源LMP1基因（N-LMP1）的转基因小鼠。共获得15只首建鼠，经小鼠尾部组织DNA分析，PCR法证明其中两只小鼠有N-LMP1基因扩增带，Southern杂交显示PCR阳性小鼠有特异的杂交信号，整合率为13.3%，N-LMP1转基因小鼠的建立为研究N-LMP1转基因小鼠的建立为研究N-LMP1在鼻咽癌变过程中的作用机制奠定了基础。     

转基因动物研究应用及其存在问题

转基因动物(Transgenic animal)是指用物理的、化学的、生物的手段将确定的外源基因通过生殖细胞或早期胚胎导入动物染色体上,在其基因组内稳定的整合导入外源基因,并能遗传给后代的一类动物。转基因动物研究是人类按照自己的意愿有目的、有计划、有根据、有预见地改变动物的遗传组成,是基于现代分子生物学、动物胚胎学和配子生物工程技术的一项综合技术。通过这种遗传修     

转基因小鼠后代乳汁中外源基因的表达

运用传统育种方法，用整合有人凝血因子Ⅸ(hFⅨ）的转基因小鼠交和远交。通过选育，在其后代中出现4只双重杂合子（3♀，1♂）及2只纯合子小鼠（2♀）。收集雌鼠乳汁，用ELISA测定其中hFⅨ蛋白含量。结果表明，相对于单纯杂合子小鼠，纯合子小鼠的表达量无增高（P＞0．05），而双重杂合子小鼠的表达量有显著提高（P＜0．01）。结果提示 ，选育双重杂合子转基因后代小鼠，是一条提高转基因动物外源基因表达水平的有效途径。     

转基因小鼠IL-4T与C57BL/6J小鼠生长繁育状况的比较

转基因小鼠IL-4T和C57BL/6J小鼠都为近交系小鼠。IL-4T小鼠是白介素4缺损小鼠,其体内B细胞和T细胞数量正常,但血清IgG1和IgE的浓度大幅降低,它是由C57BL/6J小鼠基因剔除而来。转基因小鼠在生命科学及医学研究领域有着巨大的市场潜力。现将它们在同样饲养环境下的繁殖性能和生长发育进行比较观察。1材料和方法1.1实验动物:转基因小鼠IL-4T和C57BL/6J小鼠由本公司提供,各45对。1.2饲养环境:动物饲养在SPF屏障环境内,温度:22±1℃,相对湿度:40%~60%,明暗交替:12h∶12h。1.3饲养管理:动物饲喂由本公司生产的高压全价颗粒饲料,饲料、…     

β干扰素转基因小鼠的建立和特性研究

选择ICR小鼠为受试动物,应用显微注射仪,将线状人β干扰素基因,按2940～10000拷贝,1～3pL的剂量注射到供体受精卵的雄前核,然后移植到假孕受体的输卵管。实验先后注射了301个受精卵,移植到20只假孕受体,其中5只妊娠,产仔25只。从所获得的25只亲代小鼠的尾组织提取DNA,用内切酶BamHI消化,以[α-~(32)P]-dCTP标记的上述外源基因为特异性核酸探针,应用DNA印迹法检测这些小鼠DNA内外源基因的整合状况.结果表明,亲代小鼠中有人β干扰素基因重组子的转基因小鼠,杂交带在6.8kb位置。应用上述同样方法对亲代转基因小鼠的子1代组织DNA检测发现,绝大多数小鼠的标本除见到1条1.8kb人β干扰素基因的较弱杂交带外,还有数条5.0kb以上强弱各异的杂交带,表明这种外源基因不仅整合到了亲代小鼠的遗传物质内,而且可经垂直方式传给子代。人β干扰素基因的鼠体水平表达检测发现,1只子1代转基因小鼠的肿瘤组织浸出液中含有人β干扰素,滴度达160U/mL,表明整合在小鼠DNA内的人β干扰素外源基因不经诱导而有一定表达。     

跨膜蛋白66生物信息学分析及其突变体转基因小鼠构建

跨膜蛋白66(TMEM66)是与细胞凋亡以及癌症发生密切相关的重要功能基因,为了在个体水平研究其生物学功能,我们进行了TMEM66基因突变体(TMEM66V)转基因小鼠的构建。本研究通过原核注射法进行转基因操作,将获得的312个受精卵移植到13只代孕母鼠中,运用PCR、Southern blotting对出生的小鼠进行转基因鉴定,对于转基因阳性小鼠通过传代试验研究外源基因是否稳定整合,并通过反向PCR方法研究外源基因的整合方式。结果显示在出生的55只小鼠中有6只为转基因阳性,其中3只转基因小鼠可以稳定传代,表明这些小鼠中外源基因发生了稳定整合。反向PCR检测结果发现外源片段是以串联重复的方式整合到转基因小鼠的基因组中。本研究成功构建了TMEM66基因突变体转基因小鼠,为进一步研究TMEM66基因的功能奠定了基础。     

转基因小鼠生化标志基因检测

IL-4T和IL-10T均为中英合资上海西普尔-必凯实验动物有限公司从英国总公司引进的转基因小鼠,其来源均为C57BL/6,其中IL-4T小鼠主要特征为白介素4缺损,其体内B细胞和T细胞数量正常,但血清IgG1和IgE的浓度大幅度降低。IL-4T小鼠主要用于研究T细胞的免疫应答反应、细胞分裂和IgE对     

Wip1过表达转基因小鼠模型的制备与鉴定

本研究旨在构建Wip1过表达转基因小鼠,并对Wip1过表达转基因小鼠进行RNA水平上的筛选,为研究动脉粥样硬化的发生机制提供一种动物模型。通过逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）获得小鼠组织的cDNA,并以其为模板进行PCR扩增,对扩增片段进行胶回收,然后进行扩增片段和空载体的双酶切,将酶切后胶回收得到的Wip1基因全长与载体pcDNA3.1（+）进行连接,获得Wip1-pcDNA3.1（+）过表达载体,最终得到Wip1过表达转基因原代小鼠,并利用Southern blotting方法和实时荧光定量PCR方法对小鼠进行鉴定筛选。试验获得Wip1过表达转基因原代小鼠30只,利用Southern blotting方法鉴定出阳性小鼠11只,阳性率为36.67%,实时荧光定量PCR筛选Wip1过表达转基因小鼠阳性率为32.84%。以上结果表明,试验成功构建了Wip1-pcDNA3.1（+）过表达载体,并且经过Wip1基因在小鼠组织DNA和RNA水平上的鉴定筛选,成功获得了Wip1过表达转基因小鼠。     

一次保证转基因小鼠运输福利的经验分享

实验动物运输福利是保障动物福利的重要一环。为顺利完成数量大、分组多且有围产期、哺乳期的转基因小鼠运输,创新性地采取独立通风笼具整体搬迁方式,将317笼(1 521只)品系为C57BL/6的SPF条件性敲除小鼠,在2 h内运输到代养单位饲养。通过制定运输计划、规范装卸与装载密度、控制运输环境、减少颠簸与运输时间、给予动物适应期等一系列运输措施,减少动物应激。据数据统计,运输的1 521只小鼠均未死亡,发生应激反应小鼠132只,占比8.68%。该运输实例既保障了实验小鼠的运输福利,又保证了科研数据的取得和试验结果的可信性。     

转基因动物研究进展

转基因动物研究进展杜坚广西兽医研究所５３０００１转基因动物（Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃａｎｉｍａｌ）是以实验方法导入外源基因，在染色体组内稳定整合，并能遗传给后代的一类动物。利用这种方法，人们可以建立转基因动物模型，以研究外源基因在整体动物中的表达调控规律...