马铃薯Y病毒两分离物特性及其侵染寄主的超微结构比较研究

报道了马铃薯Y病毒两分离物的生物学和血清学特性、病毒粒体形态大小以及它们引起的寄主细胞病变特征等方面的差异.从山东省主要烟草和马铃薯种植区病毒样品中分离到两个马铃薯Y病毒分离物,分别为PVY-T 和PVY-P.两分离物在寄主植物上的症状表现、体外抗性、蚜传特性、血清学以及病毒粒体大小等方面存在着明显的差异.同时,这些结果与作对照的PVY标准株系PVYN 和PVYO相比较,初步推测分离物PVY-T属于PVYO株系 ,而P VY-P则属于PVYN.通过对受侵染寄主的细胞超微结构观察比较发现,这两种PVY分离物在寄主细胞内的分布特征、内含体以及与寄主互作后所引起的细胞病变也明显不同,这些可能成为区别PVY不同株系的依据之一.     

河北省马铃薯Y病毒株系分子鉴定及其RT-PCR检测

根据马铃薯Y病毒(PotatovirusY,PVY)的外壳蛋白基因序列,设计合成了一对寡核苷酸引物,从感染PVY的马铃薯田间病叶组织中提取出病毒的RNA,进行cDNA合成及PCR扩增,得到一条长度约800bp的特异PCR扩增产物,与理论设计的基因片段大小一致,本试验建立了快速、灵敏、简便的PVY检测的方法。将RT-PCR扩增产物克隆到质粒pGEM-T上,并进行了序列分析。结果表明,克隆的cDNA片段由801个核苷酸组成,编码267个氨基酸组成的理论分子量为29kD蛋白,与PVY外壳蛋白的大小一致,与基因库登记的代表性株系相比,它们之间的核苷酸序列同源性为89 6%～98 8%,氨基酸序列的同源性为93 3%～98 5%,说明PVYCP基因具有高度的保守性(记为PVY-HBEI),与国内报道的PVY-CHU、PVY-ZHJ和PVY-ZHOU株系的氨基酸序列同源性分别为96 6%、98 5%和97 8%,与PVYN和PVYO株系的氨基酸序列同源性分别为93 6%和97 8%,从分子水平上确定PVY-HBEI归属于普通株系(PVYO株系)。     

Aphids and their transmitted potato viruses: A continuous challenges in potato crops

Aphid is one of the most destructive insect pests on cultivated plants in temperate regions. Their piercing-sucking mouthparts and phloem feeding behavior directly damage crops and deplete plant nutrients. Potato(Solanum tuberosum L.) is one of the most important food sources on the planet, and several aphid species, e.g., Myzus persicae(Sulzer)(green peach aphid) and Macrosiphum euphorbiae(Thomas)(potato aphid)(Hemiptera: Aphididae) colonize potato and transmit several economically important viruses. Aphid-transmitted potato viruses have been emerging all over the world as a very serious problem in potato production, inducing a wide variety of foliar and tuber symptoms, leading to severe yield reduction and loss of tuber quality. In this review, recent advances in understanding the interactions of potato viruses with their hosts, aphid vectors and the environment are described.     

青海省部分地区马铃薯Y病毒cp基因序列分析

马铃薯Y病毒(PVY)是危害我国马铃薯的主要病毒之一,其在自然条件下极易发生基因变异而产生株系分化现象。为揭示青海马铃薯Y病毒分离物cp基因的分子变异,利用RT-PCR方法扩增获得了16个马铃薯Y病毒分离物的cp基因序列,采用SDT、DANMAN、RDP和MEGA软件对其进行分子变异分析。序列一致率结果表明,16个分离物的核苷酸序列均为801个碱基,一致率为98.0%~100%,编码267个氨基酸,一致率为94.8%~100%。重组分析表明,16个分离物未发生基因重组。系统发育分析发现,11个分离物与PVY^N-Wi株系相聚成簇,表明其在系统发育关系上与PVY^N-Wi株系的亲缘关系最近,占被检出病毒分离物的68.7%;另外5个分离物与PVY^O株系相聚成簇,表明其在系统发育关系上与PVY^O株系亲缘关系最近;未发现PVY^C株系、PVY^N株系、PVY^E株系和PVY^NTN株系存在。     

云芝葡聚糖对烟草马铃薯Y病毒的抗性研究

【目的】研究云芝葡聚糖对烟草马铃薯Y病毒(PVY)的抑制作用,为新型杀菌剂云芝葡聚糖水剂的开发应用提供依据。【方法】以PVY枯斑寄主苋色藜(Chenopodium amaranticolor)、系统寄主心叶烟(Nicotiana glutinosa)为材料,采用枯斑法、叶圆片法及室内盆栽试验,测定云芝葡聚糖的抗PVY活性及其诱导抗病性,同时测定其对烟草防御酶POD、PAL活性的影响。【结果】云芝葡聚糖对PVY具有很强的预防作用和诱导抗性,700μg/mL云芝葡聚糖的预防效果达73.98%,诱导抗性达59.84%;对PVY有一定的钝化和抑制增殖作用,其中700μg/mL云芝葡聚糖对PVY的钝化效果为28.79%,对PVY的增殖抑制率达40.25%;云芝葡聚糖处理能提高烟草叶片POD和PAL活性;室内盆栽试验结果表明,云芝葡聚糖对PVY寄主表现出很强的保护活性,保护效果优于治疗效果,接种病毒14d后1.1%云芝葡聚糖水剂300倍液的保护、治疗效果分别为73.33%和38.46%。【结论】云芝葡聚糖是一种很强的免疫增强剂,对PVY的抑制作用显著,提前施用对寄主可起到很好的保护作用。     

烟草马铃薯Y病毒病的发生及综合防治研究进展

综述了烟草马铃薯Y病毒病发生的原因来源于气候变化、种植结构变化、品种和田间管理不当。主要采取通过建立预测预报体系、选育品种、栽培措施、规范使用化学药剂、利用生物天敌对烟草马铃薯Y病毒病进行预防。并对防治烟草马铃薯Y病毒病的前景进行了展望。     

马铃薯Y病毒外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达

用内切酶BglⅡ和EcoRⅠ将PVY-cp基因自pGEM-pvy切下,定向插入到经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切的表达质粒pBV220的启动子Pr、Pl的下游,构建了该基因的原核表达载体pBV-pvy。SDS-PAGE凝胶电泳结果表明:PVY-cp基因在大肠杆菌HB101中经温度(42℃)诱导后,可特异地高效表达大小约30KD蛋白。Western印迹杂交进一步鉴定了该表达蛋白确为PVY外壳蛋白。     

马铃薯Y病毒黑龙江分离株外壳蛋白基因克隆及序列分析

为研究马铃薯Y病毒的检测方法,参考GenBank中马铃薯Y病毒的全基因序列,应用Primer 6.0引物软件设计并合成了一对特异性引物PVYF、PVYR,利用RT-PCR方法对PVY病毒黑龙江分离株CP基因进行特异性扩增,对扩增片段进行序列测定并进行序列比对。结果表明:引物PVYF、PVYR可以扩增出包含PVY病毒CP基因全长的cDNA特异性片段,序列分析结果表明PVY病毒黑龙江分离株CP基因与GenBank上的40个不同PVY病毒分离株的CP基因氨基酸序列同源性为92.1%~97.4%,说明PVY病毒CP基因保守性较高,可以用作制备PVY病毒血清型检测方法的抗体基因。     

中国部分马铃薯产区马铃薯Y病毒(PVY)的株系分化与鉴定

分别克隆了黑龙江、山西、贵州等3省内的4个马铃薯产区的PVY p1基因和cp基因,通过系统地基因序列分析对各分离物的株系种类进行了鉴定.结果表明中国马铃薯产区PVY株系分化现象明显,其中黑龙江省克山农场分离为PVYNTN株系;贵州省贵阳市分离物、威宁自治县分离物、山西省临县分离物为PVYN:O株系.PVYN:O株系分布普遍,可能已经成为中国部分马铃薯产区PVY的主要流行株系.     

源于马铃薯Y病毒CP基因的dsRNA原核表达及提取

以马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)为基础构建了含PVY CP基因3’端253bp反向重复片段的双链RNA(dsRNA)原核表达载体,并转化大肠杆菌HT115(DE3),经IPTG诱导产生dsRNA,用LiCl沉淀法提取,获得了高质量的dsRNA。     

烤烟普通花叶病毒病田间自然传播能力研究

通过田间试验,研究了8类不同有效成分农药对烟草病毒病的防治效果.结果表明:8类参试药剂中除18%抑毒星和0.5%抗毒丰在烤烟生长前期对病毒病的预防有微弱效果外,其他参试药剂对烟草病毒病均未表现出预防效果,烤烟在有病原存在的情况下,施药预防与不施药预防几乎没有区别.     

甘薯资源抗(耐)病毒的鉴定

2001~2002年采用嫁接法接种对“国家种质广州甘薯圃”保存的162份甘薯资源进行病毒抗性的鉴定,结果表明所有资源在指示植物Ipomoea setosa上显示出带毒症状,但是资源的病毒病潜育期之间存在着差异,甘薯地上部分不显症并不意味不带病毒。     

陕北地区马铃薯Y病毒的RT-PCR检测及其序列分析

以陕北地区8个县(区)种植2~3代疑似带毒的马铃薯叶片为材料,Trizol法提取马铃薯叶片总RNA,以已公布的马铃薯Y病毒外壳蛋白(coat protein,CP)基因序列设计1对特异引物,反转录合成cDNA,RT-PCR扩增目的 DNA片段,1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。回收纯化CP基因片段并进行克隆和测序,采用DNAstar软件分析序列一致性。结果显示,所有马铃薯叶片中均扩增到与预期大小一致的、长度为400 bp的目的片段,表明这些马铃薯均感染了Y病毒;陕北8个县(区)马铃薯Y病毒CP基因与国内外其他地区12个样品之间的序列一致性为88.4%~99.8%,表明马铃薯Y病毒的CP基因序列比较保守,不易发生变异。RT-PCR方法可快速、准确地检测马铃薯Y病毒,从而为马铃薯茎尖剥离脱毒生产脱毒种苗(薯)提供依据。     

延边地区烟草马铃薯丫病毒病发生规律研究初报

从１９９７年开始进行调查研究,结果表明,马铃薯种薯携带ＰＶＹＮ．延边地区从６月下旬开始发生ＰＶＹＮ,在靠近马铃薯田的烟地和未及时防治蚜虫的烟地发生较重,覆膜烟地比裸地栽培的烟地发病较轻．在供试的８个品种（系）中,ＮＣ８９品种发病较轻．     

马铃薯Y病毒的株系种类、分子特征及鉴定方法研究进展

马铃薯Y病毒(PVY)株系分化现象明显,具有多个株系类型。随着分子生物学技术和免疫学技术逐渐被引入PVY的株系鉴定中,产生了一系列的株系鉴定方法。为此,对PVY的主要株系、亚株系的种类及分类依据、分子特征以及近年来应用于PVY株系鉴定的传统生物学方法、分子生物学方法、免疫学方法等进行了综述。     

陕西马铃薯卷叶病病原的分子生物学鉴定

【目的】对陕西榆林疑似感染马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PLRV)的病株毒源进行分子生物学鉴定,为陕西省马铃薯卷叶病的防治提供参考。【方法】根据GenBank数据库已报道的马铃薯卷叶病毒外壳蛋白(Coat protein,CP)基因序列设计了1对引物,利用RT-PCR技术成功扩增了陕西PLRV.CP基因,然后进行克隆、测序,并与GenBank中已报道的27个PLRV分离物的CP基因进行同源性分析。【结果】获得的陕西PLRV.CP基因大小为627 bp,含有1个ORF,编码208个氨基酸的多肽,其与已报道的27个国内外PLRV.CP高度同源。【结论】陕西榆林的疑似病株确定为感染PLRV的马铃薯病株。     

烟草感染马铃薯Y病毒脉坏死株系后PPO活性及其同工酶变化的研究

感染马铃薯Ｙ病毒脉坏死株系（ＰＶＹ＾Ｎ）后,敏感烟草体内的多酚氧化酶（ＰＰＯ）活性升高,而抗性烟草的ＰＰＯ活性降低,但其活性值均高于敏感烟草健康植株;敏感烟草从接种ＰＶＹ＾Ｎ后第８ｄ起出现２条新的ＰＰＯ同工酶谱带,而且随着病害程度的加重其强度增加,抗性烟草则没有新的ＰＰＯ同工酶谱带出现,在未接种的情况下,抗性烟草体内的ＰＰＯ活性明显高于敏感烟草,其ＰＰＯ同工酶谱带数比敏感烟草多１条。     

马铃薯病毒试管苗保存技术及病毒侵染力的研究

无菌条件下切取毒源马铃薯茎尖于MS培养基中培养,当毒源试管苗长至10 cm时切取单节段扩繁。通过免疫电镜法、电镜负染法和DAS-ELISA法鉴定,筛选出4管纯毒源材料。筛选出的试管苗毒源经18个月保存病毒仍存在,将毒源试管苗移至花盆中栽培,试验管苗表现出马铃薯病毒A(PVA)侵染症状,用毒源马铃薯汁液接种的指示植物也表现典型PVA症状,说明毒源试管苗保存的PVA具有侵染力。用试管苗保存马铃薯病毒,可提高毒源保存效果。     

马铃薯X病毒贵州分离物的分子鉴定

从贵州威宁县染病马铃薯植株中分离得到马铃薯X病毒贵州分离物(PVX-GZ),采用RT-PCR扩增并克隆了该分离物的外壳蛋白基因(CP).经测序,该CP基因长714 bp,编码237个氨基酸残基,分子量25.2 ku;与19种已报道的PVX各地分离物的同源性相比,其核苷酸和氨基酸序列分别在78.6％～97.5％和84.8％～99.6％之间,其中,与两种典型的PVX X3株系(荷兰分离物X3和英国分离物UK3)的基因序列同源性达97.1％以上.结合寄主鉴别结果,判断该分离物属PVX的X3株系.     

Monoclonal antibody-based serological detection of potato virus M in potato plants and tubers

Potato virus M(PVM) is one of the common and economically important potato viruses in potato-growing regions worldwide. To investigate and control this viral disease, efficient and specific detection techniques are needed. In this study, PVM virions were purified from infected potato plants and used as the immunogen to produce hybridomas secreting PVM-specific monoclonal antibodies(MAbs). Four highly specific and sensitive murine MAbs, i.e., 1 E1, 2 A5, 8 A1 and 17 G8 were prepared through a conventional hybridoma technology. Using these four MAbs, we have developed an antigen-coated plate(ACP)-ELISA, a dot-ELISA and a Tissue print-ELISA for detecting PVM infection in potato plants and tubers. PVM could be detected in infected potato plant tissue crude extracts diluted at 1:10 240(w/v, g mL~(–1)) by the dot-ELISA or at 1:163 840(w/v, g mL~(–1)) by the ACP-ELISA. The Tissue print-ELISA is the quickest and easiest assay among the three established serological assays and is more suitable for onsite large-scale sample detection. Detection results of the field-collected samples showed that PVM is currently widespread in the Yunnan and the Heilongjiang provinces in China. The field sample test results of the developed serological assays were supported by the results from RT-PCR and DNA sequencing. We consider that the newly established ACP-ELISA, dot-ELISA and Tissue print-ELISA can benefit PVM detection in potato plant and tuber samples and field epidemiological studies of PVM. These assays can also facilitate the production of virus-free seed potatoes and breeding for PVM-resistant potato cultivars, leading to the successful prevention of this potato viral disease.