鸡VLDLR基因在不同组织中的表达分析

极低密度脂蛋白受体(VLDLR)是低密度脂蛋白受体家族的一员,能以高亲和力结合富含Apo E的脂蛋白,是机体细胞摄取血液中富含甘油三酯的极低密度脂蛋白(VLDL)的主要受体。本研究旨在探讨VLDLR基因在鸡不同组织内的表达水平和分布情况,为进一步研究VLDLR在肿瘤发生中的变化提供依据。采集成年鸡骨骼肌、肺脏、脂肪、脾脏、肝脏等组织,提取RNA,根据Gen Bank中的鸡VLDLR基因序列设计引物并进行RT-PCR扩增,检测鸡5种组织中VLDLR基因的相对表达水平。结果显示VLDLR基因在鸡不同组织间的表达存在差异,表现为肌肉表达量最高,肺脏和脂肪组织次之,肝脏表达量最低。相对表达量由高到低依次为骨骼肌(10.95±0.14)、肺脏(3.87±0.23)、脂肪组织(3.02±0.11)、脾脏(2.31±0.08)和肝脏(1.00±0.17)。本试验证实VLDLR基因在肺脏有较高的表达量,脾脏也有一定的表达。     

瘦素受体在小尾寒羊组织中的表达

为了研究瘦素受体在小尾寒羊组织中的表达,试验采用H.E.和免疫组织化学SABC染色方法对小尾寒羊下丘脑、垂体、皱胃和十二指肠的瘦素受体(OB-R)进行定位研究。结果表明:H.E.染色显示各组织结构正常,细胞形态均清晰可见;SABC染色可见在下丘脑的神经元胞质、脑垂体的腺垂体细胞、皱胃胃体部固有层的壁细胞和十二指肠固有层肠腺的柱状细胞均可见大小不等的棕黄色颗粒,呈阳性表达。表明瘦素对小尾寒羊的消化系统具有调节作用,瘦素受体对小尾寒羊的生长发育起着重要作用。     

黔北麻羊RARs基因在不同组织中的表达分析

为研究视黄酸受体α(Retinoic Acid Receptor Alpha,RARA)、视黄酸受体β(Retinoic Acid Receptor Beta,RARB)与视黄酸受体γ(Retinoic acid receptor gamma,RARG)基因在黔北麻羊不同组织中的表达情况,本研究提取黔北麻羊心、肝、脾、...     

FMR1基因在小尾寒羊卵泡期和黄体期组织中的差异表达分析

为了探索绵羊脆性X智力障碍1(Fragile X Mental Retardation 1,FMR1)基因组织表达及其与母羊发情调控之间的关系,选择卵泡期和黄体期小尾寒羊各3只,采用半定量RT-PCR和荧光定量PCR技术对该基因在各组织表达及在繁殖相关组织表达量进行分析。结果表明:FMR1基因在卵泡期小尾寒羊18个组织中均有表达,其中在大脑、小脑、卵巢(左、右)、输卵管、子宫体、子宫角中高表达,在其他各组织呈中等或低丰度表达;FMR1基因在输卵管和子宫体两个组织中卵泡期的表达量显著高于黄体期(P0.05),在垂体的表达量最高。综上可知,FMR1基因在小尾寒羊卵泡期和黄体期表达差异大,可能调控卵泡期到黄体期的发情状态转换,与小尾寒羊的发情调控相关。     

鸡CLOCK基因在不同组织中的表达

CLOCK基因是一种与生物节律相关的基因,对维持正常的近日节律起重要作用。本研究旨在分析鸡CLOCK基因在不同组织间的表达以及在同一组织中的节律性表达情况。根据鸡CLOCK基因mRNA序列(登录号:NM_204174)设计特异性引物,利用QRT-PCR方法,检测早上(06:00)、中午(12:00)、傍晚(18:00)3个时间点CLOCK基因在下丘脑、心脏、肝脏、脾脏等17种组织中的表达。结果表明:鸡CLOCK基因在各组织中均有表达,在胸肌中的表达量极显著高于其他各组织(P0.01),为心脏表达量的1.99倍;在同一种组织不同时间点的表达呈现出一定的节律性,心脏、肝脏、肌胃中表达量持续升高,下丘脑、回肠、空肠、盲肠、腺胃等先升高后降低,且在空肠、盲肠、腺胃中表现出显著的节律性,脂肪中先降低后升高,脾脏、卵巢中持续下降。结果显示,鸡CLOCK基因表达存在时空特异性,并呈现较强的节律性。     

CLCOK基因在母牦牛不同组织中的表达

CLOCK(Circadian locomotor output cycles kaput)是生物钟家族重要的核心基因之一,本实验提取了母牦牛的下丘脑、心、肝、脾、肺、肾、卵巢和肌肉8种组织,应用实时定量荧光PCR技术对青海高原母牦牛的八种组织中提取的RNA进行了CLOCK基因表达分析。结果显示:CLOCK基因的在八种不同的组织中均有表达,但存在差异,其中肝脏的表达量显著高于牦牛下丘脑、心脏、脾脏、肺脏、肾脏、卵巢和肌肉。     

小尾寒羊TGF-β3基因在同期发情处理过程中的表达分析

为了探索胚胎移植过程中妊娠率的根本原因。本研究以高繁殖力小尾寒羊为试验对象,采用公认的CIDR结合外源激素处理使其同期发情,与自然发情及乏情的小尾寒羊作对比,分析了转化生长因子TGF-β3基因在卵巢细胞中的表达差异,同时对其启动子区的甲基化岛进行了分析。结果发现,自然发情绵羊和外源激素处理发情的羊在发情表现和时间上无明显差别,但是TGF-β3基因在转录水平和蛋白水平上自然发情绵羊显著高于外源激素处理发情的羊,而同期处理发情的羊显著高于乏情期绵羊卵巢细胞内的表达。自然发情和激素处理的绵羊TGF-β3基因启动子甲基化水平分别为25.8%和53.3%,而乏情期绵羊TGF-β3基因启动子处于超甲基化水平达到70.0%。以上结果说明外源激素处理的同期发情小尾寒羊尽管在发情表现、时间等与自然发情的绵羊类似,但是胚胎发育和着床重要调控基因TGF-β3的表达和甲基化模式存在显著性差异这也许是目前胚胎移植后着床率低下的原因之一。     

小尾寒羊母羊在不同生理阶段适宜饲养水平的研究

小尾寒羊为多胎多产、常年发情绵羊品种 ,由于繁殖母羊负担相当重 ,往往是奶着 2～ 4只羔 ,又怀着 2～ 4只羔 ,空怀期较短。为此 ,加强小尾寒羊繁殖母羊的饲养管理比其他品种羊显得更为重要。本项试验研究了小尾寒羊繁殖母羊在舍饲条件下 ,各生理阶段的饲养水平对其生产性能的影响 ,为以后繁殖母羊的合理饲养提供科学依据。1　材料与方法1 1　试验羊的选择与分组试验羊选择年龄 2～ 2 5岁小尾寒羊繁殖母羊6 0只 ,体重相近 ,试前进行相同饲养条件的预试 ,并空腹称重 ,随机将试验羊分低、中、高饲养水平组 ,每组 2 0只。1 2　试验羊的饲养管理1 2 1　各组饲养水平的确定　根据试验羊的体重 ,结合所处生理阶段 ,参照肉毛兼用绵羊品种饲养标准 ,制定高、中、低三个饲养水平 ,高水平组饲养水平比肉毛兼用品种高 2 0 %左右 ,中水平组低 0～ 10 % ,低水平组低 2 0 %左右 ,不同饲养水平营养组成见表1。1 2 2　饲养管理　试验羊粗饲料有青干草、苜蓿干草、玉米秸、花生秧、红薯蔓、青贮玉米等。精饲料有玉米、豆饼、棉籽油粕、葵花籽油粕、麸皮、骨粉、食盐等 ,根据营养要求进行日粮配制。表 1　...     

猪BMP-6基因在不同组织中的表达谱分析

为了研究猪BMP-6基因的组织表达特性,试验采用实时定量PCR技术分析了BMP-6基因在猪脑、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、小肠、大肠、肌肉、卵巢等11种组织中的相对表达情况。结果表明:BMP-6基因表达谱广泛,其中BMP-6基因在卵巢中的表达量最高,肝脏中的表达量次之,胃和小肠中的表达量最低。说明BMP-6基因可能与繁殖性状相关。     

UCP2基因在小尾寒羊内脏中的差异性表达研究

解偶联蛋白2（UCP2）是一种具有解偶联功能的蛋白质,普遍认为其与脂肪酸代谢、调节ATP生成有关。利用实时荧光定量PCR技术,对不同月龄（6、8、10月龄）小尾寒羊4种内脏（心脏、脾脏、肾脏、瘤胃）组织中UCP2基因的表达量进行了分析。结果表明,UCP2基因在6～10月龄小尾寒羊相同内脏中的表达量差异不显著（P＞0.05）,但在脾脏中的表达量显著（P〈0.05）高于心脏、肾脏和瘤胃,而后三者之间表达量差异不显著（P＞0.05）。试验证明了UCP2基因在小尾寒羊内脏组织中有广泛表达,为UCP2基因可能与免疫相关的观点提供了证据,并且说明在6～10月龄的月龄段内,UCP2基因在小尾寒羊内脏组织中的表达受月龄的影响较小。     

小尾寒羊和苏尼特羊CRH和POMC基因在繁殖相关组织中的差异性表达

为了探索CRH和POMC基因与绵羊季节性发情之间的关系,利用荧光定量PCR检测了两个基因在四季发情小尾寒羊和季节性发情苏尼特羊8个重要繁殖相关组织中的表达水平。结果表明:CRH在下丘脑和大脑中高表达;POMC在垂体中表达量最高,其次是下丘脑,在其他组织中均呈痕量表达,但小尾寒羊与苏尼特羊各组织间CRH和POMC基因的表达均无显著性差异(P0.05)。     

小尾寒羊高繁殖力候选基因ESR在同期发情处理过程中的表达分析

试验选择高繁殖力小尾寒羊为试验动物,采用公认的CIDR结合外源激素处理使其同期发情,与自然发情及乏情的小尾寒羊作对比,利用反转录荧光定量RT-PCR和Western blotting技术研究雌激素受体(estrogen receptor, ESR)基因在卵巢细胞中的表达差异,同时对其启动子区的甲基化岛进行了分析。结果发现,自然发情绵羊和外源激素处理发情的羊在发情表现和时间上无明显差别;在转录水平的检测结果上也无显著性差异(P＞0.05);但是它们显著高于在乏情期绵羊卵巢细胞内的表达(P＜0.05)。尽管激素处理的同期发情羊卵巢细胞内的ESR蛋白表达量显著高于乏情期绵羊,但是仍然显著低于自然发情期绵羊卵巢细胞的表达(P＜0.05)。此外,自然发情和激素处理的绵羊ESR基因启动子区CpG岛甲基化水平分别为0和10.77%,而发情期绵羊ESR基因启动子处于超甲基化状态（92.30%）。以上结果说明,外源激素处理的同期发情小尾寒羊尽管发情表现、时间等与自然发情的绵羊类似,但是ESR基因在蛋白水平上差异显著,且其启动子区CpG岛甲基化水平也存在显著性差异,这也许是目前胚胎移植后着床率低下的原因之一。     

关岭牛PPAP2B基因mRNA在不同组织中的表达分析

为了研究关岭牛PPAP2B基因mRNA在不同组织中的表达水平及相关功能,试验以关岭牛为实验动物,分别提取心脏、肝脏、小肠、脂肪、大腿肌、背最长肌组织的总RNA,以不同组织的总RNA为模板,逆转录合成cDNA,以GAPDH基因作为内参,应用实时荧光定量PCR技术检测PPAP2B基因mRNA在不同组织中的相对表达量。结果:关岭牛PPAP2B基因mRNA在脂肪中表达量最高,在其他组织中表达量很少甚至几乎不表达。结论:PPAP2B基因可能在牛的脂肪沉积过程中发挥作用。     

Bad基因在小尾寒羊输卵管上皮组织的表达

采用免疫组织化学方法检测小尾寒羊输卵管上皮组织中Bad基因的表达水平,利用计算机图像分析技术测量小尾寒羊生殖周期的不同阶段输卵管上皮组织Bad基因表达的平均光密度和平均阳性面积。结果显示,小尾寒羊输卵管伞部、壶腹部和峡部上皮组织中的部分纤毛细胞在卵泡期和黄体期呈阳性,黄体期纤毛细胞较卵泡期表达强。同时期各部位表达强度的差异不明显。黄体期和卵泡期的分泌细胞均呈阳性,同时期不同部位差异不大,但同部位的分泌细胞黄体期比卵泡期表达强。壶腹部和峡部上皮组织阳性细胞的平均光密度值与阳性面积率差异不显著(P>0.05)。输卵管伞部在黄体期和卵泡期与同时期壶腹部和峡部比较,平均光密度和阳性面积率差异显著(P<0.05)。同一部位不同时期平均光密度值和阳性面积率差异显著(P<0.05)。表明Bad基因参与了输卵管上皮组织周期性变化的调控。     

小尾寒羊ACAA1基因CDS克隆及组织表达谱分析

为探索乙酰辅酶A酰基转移酶1(acetyl-coenzyme A acyltransferase 1,ACAA1)基因的生物学功能,明确该基因在小尾寒羊不同组织中的表达差异,试验采集小尾寒羊心脏、肝脏、胃、十二指肠、小肠、背最长肌、皮下脂肪组织,提取总RNA,根据GenBank中公布的绵羊ACAA1基因序列(登录号:XM_004018227.3)设计引物,利用RT-PCR和分子克隆技术获得小尾寒羊ACAA1基因完整CDS,并对其进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR检测该基因在小尾寒羊不同组织中的表达差异。结果显示,小尾寒羊ACAA1基因CDS长为1 071 bp,编码356个氨基酸;小尾寒羊ACAA1基因氨基酸序列与绵羊、山羊同源性最高,约为100%,与食蟹猴、狒狒和野猪的同源性均为93.0%;系统进化树结果显示,小尾寒羊与绵羊、山羊位于同一分支,亲缘关系较近,与穿山甲、狒狒的亲缘关系较远;各物种间同源性较高,保守性较强。ACAA1蛋白分子质量约为36.92 ku,分子式为C_(1603)H_(2638)N_(458)O_(501)S_(18),理论等电点为7.48,半衰期为30 h,消光系数为9 440,稳定系数为40.88,脂溶系数为92.67,亲水性氨基酸残基约占58%,为不稳定的碱性脂溶性亲水蛋白;不存在跨膜结构与信号肽,不是分泌蛋白;主要分布在过氧化物酶体,存在25个磷酸化位点、3个潜在的N-糖基化位点和4个O-糖基化位点。ACAA1蛋白二级结构含有α-螺旋(37.92%)、β-折叠(12.64%)和无规则卷曲(49.44%),三级结构预测结果与其一致。实时荧光定量PCR结果显示,ACAA1基因在小尾寒羊不同组织中均有表达,其中在肝脏、皮下脂肪、小肠中表达量相对较高。本试验结果为进一步探索小尾寒羊ACAA1基因生物学功能及筛选与肉质性状相关的候选基因提供依据。     

小尾寒羊ACAA1基因CDS克隆及组织表达谱分析

为探索乙酰辅酶A酰基转移酶1（acetyl-coenzyme A acyltransferase 1,ACAA1）基因的生物学功能,明确该基因在小尾寒羊不同组织中的表达差异,试验采集小尾寒羊心脏、肝脏、胃、十二指肠、小肠、背最长肌、皮下脂肪组织,提取总RNA,根据GenBank中公布的绵羊ACAA1基因序列（登录号：XM_004018227.3）设计引物,利用RT-PCR和分子克隆技术获得小尾寒羊ACAA1基因完整CDS,并对其进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR检测该基因在小尾寒羊不同组织中的表达差异。结果显示,小尾寒羊ACAA1基因CDS长为1 071 bp,编码356个氨基酸;小尾寒羊ACAA1基因氨基酸序列与绵羊、山羊同源性最高,约为100%,与食蟹猴、狒狒和野猪的同源性均为93.0%;系统进化树结果显示,小尾寒羊与绵羊、山羊位于同一分支,亲缘关系较近,与穿山甲、狒狒的亲缘关系较远;各物种间同源性较高,保守性较强。ACAA1蛋白分子质量约为36.92 ku,分子式为C₁₆₀₃H₂₆₃₈N₄₅₈O₅₀₁S₁₈,理论等电点为7.48,半衰期为30 h,消光系数为9 440,稳定系数为40.88,脂溶系数为92.67,亲水性氨基酸残基约占58%,为不稳定的碱性脂溶性亲水蛋白;不存在跨膜结构与信号肽,不是分泌蛋白;主要分布在过氧化物酶体,存在25个磷酸化位点、3个潜在的N-糖基化位点和4个O-糖基化位点。ACAA1蛋白二级结构含有α-螺旋（37.92%）、β-折叠（12.64%）和无规则卷曲（49.44%）,三级结构预测结果与其一致。实时荧光定量PCR结果显示,ACAA1基因在小尾寒羊不同组织中均有表达,其中在肝脏、皮下脂肪、小肠中表达量相对较高。本试验结果为进一步探索小尾寒羊ACAA1基因生物学功能及筛选与肉质性状相关的候选基因提供依据。     

MYH7基因在鸡不同组织中的表达差异研究

肌球蛋白重链(MHC)作为肌球蛋白的组成单位,在维持肌细胞的正常工作中发挥重要作用。研究利用实时荧光定量PCR方法对MYH7基因在鸡不同组织与生长发育阶段的表达差异进行了比较。结果显示:鸡腿肌和胸肌组织中MYH7基因的表达量都极显著高于肝脏组织,在肝脏组织中几乎没有表达,在胸肌组织中表达量最高;鸡胸肌组织中MYH7基因在10周龄表达量高于2和6周龄,且在10周龄表达量显著高于6周龄。由此推测该基因在肌肉组织的生长和发育过程中有调节作用。     

MYNN基因在猪不同组织及肌肉中的表达规律

试验旨在研究myoneurin（MYNN）基因在猪不同组织中的表达特征及其在肌肉（背最长肌、股二头肌和腰大肌）、小脑、肝脏、胰脏、肾脏、胃、脾脏、肺脏组织中的发育性表达规律。采用实时荧光定量PCR技术研究猪MYNN mRNA在90日龄大白猪和马身猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、小脑、小肠、胰脏、胃、股二头肌及脂肪共11个组织中的表达谱,以及在大白猪和马身猪1、90、180日龄3个发育阶段的肌肉、小脑、肝脏、胰脏、肾脏、胃、脾脏、肺脏组织中的发育性表达规律。结果表明,MYNN在猪的各种组织中广泛表达,且各组织间表达差异显著或极显著（P < 0.05;P < 0.01）;MYNN在大白猪和马身猪的肌肉、小脑、肝脏、胰脏、肾脏、胃、脾脏、肺脏组织中的不同发育阶段表达差异显著或极显著（P < 0.05;P < 0.01）,并具有特定规律,由此推测其可能在猪的这几种组织中发挥重要作用。MYNN基因的表达与组织、日龄及品种的遗传背景有关。本试验为研究猪MYNN基因的生物学功能提供了依据,但还需要深入的研究来探索其作用的具体机制,尤其是在骨骼肌发育中的调节机制。     

CAPN3基因在草原红牛不同组织中的表达差异

钙激活中性蛋白酶（CAPN3）参与哺乳动物体内多种重要的生理生化过程,但是有关它的确切生理功能和作用机制研究较少。本研究采用实时荧光定量PCR技术检测CAPN3基因在草原红牛多种组织中的表达水平差异情况。试验结果表明,CAPN3基因在所检测草原红牛的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、十二指肠、瘤胃和背最长肌8种组织中均有表达,且在不同组织中的表达水平有所不同。草原红牛脾脏中的CAPN3基因表达量显著高于其他组织,十二指肠和瘤胃中的CAPN3基因表达量显著高于心脏、肝脏、肺脏、肾脏和背最长肌。本试验为肉牛肉质性状的改良提供了分子遗传学依据,并为深入研究草原红牛体内CAPN3基因的生物学作用及作用机制奠定了基础。