KAP16基因在苏博美利奴羊毛囊发育不同时期及不同组织中的表达分析

此研究旨在探讨KAP16基因在绵羊毛囊中的分子生物学功能。试验采用实时荧光定量PCR方法分析了苏博美利奴羊毛囊发育的2个关键时期(胚胎期65 d和135 d)KAP16基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉及皮肤中的表达量。结果显示:在胚胎期65 d中,KAP16基因在心脏、肝脏、脾脏及肾脏中的表达量显著高于其他3个组织(P0.05);而在胚胎期135 d中,KAP16基因在皮肤中的表达量极显著高于其他6个组织(P0.01),并且随着毛囊的逐渐成熟,KAP16基因在皮肤中的表达量也逐步增加。试验结果为进一步研究超细型细毛羊毛囊发育提供了理论依据。     

Dsg4基因在苏博美利奴羊毛囊发育不同时期及不同组织中的表达差异

为检测桥粒芯糖蛋白4(Dsg4)在苏博美利奴羊毛囊发育不同时期以及不同组织中的表达水平,本研究利用qPCR法测定Dsg4基因在苏博美利奴羊毛囊发育6个时期的皮肤组织,并选取毛囊发生和成熟2个关键时期进行Dsg4在心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏及肌肉中的表达分析。结果表明:Dsg4在各组织器官中均有表达,但在胚胎期65 d时,Dsg4在肝脏中的表达量极显著高于其他6个组织(P0.01);在肾脏中极显著高于脾脏、肺和肌肉(P0.01),且显著高于心脏和皮肤(P0.05);在胚胎期135 d时,Dsg4在皮肤中的表达量极显著高于其他6个组织(P0.01),而在其余6个组织间差异不显著(P0.05);Dsg4的表达量随着毛囊的逐步成熟呈上升的趋势,且在出生后30 d皮肤组织中的表达量极显著高于胚胎期的表达量(P0.01)。综上,Dsg4在苏博美利奴羊初级毛囊形成及毛囊成熟2个时期各组织器官中存在表达差异;且随着毛囊的逐步成熟,Dsg4的表达量也呈上调趋势,这提示Dsg4可能与毛囊的成熟密切相关。     

苏博美利奴羊毛囊发育不同时期ncRNA调控网络的构建

为探索苏博美利奴羊毛囊发育相关ncRNA分子调控网络,本研究通过挖掘苏博美利奴羊皮肤组织样本不同时期转录组数据,利用生物信息学方法构建lncRNA-miRNA-mRNA分子调控网络。结果表明：不同时期mRNA与lncRNA及miRNA具有复杂的网络连接。通过GO富集分析发现靶基因主要参与细胞增殖调控、凋亡过程及毛囊形态发生等生物学过程;参与细胞外空间、细胞外泌体、转录因子复合体、质膜的整体成分等细胞组分;参与转录因子活性、结构分子活性、细胞外基质结构组成等分子功能。通过KEGG通路分析发现差异的靶基因主要参与TGF-beta信号通路、癌症途径、MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路、细胞因子与细胞因子受体的相互作用等多种途径。筛选寻找调控网络中的关键基因,发现G2 vs.G1组中miR-133、miR-433-5p的靶基因TGFβ2和NOTCH1参与毛囊形态发生（GO:0031069）的生物学过程,因此TGFβ2和NOTCH1为毛囊发育的关键基因。通过构建苏博美利奴羊毛囊发育相关ncRNA分子调控网络,解析毛囊发生发育的分子调控机制,从转录组学层面对毛囊生长发育进行探讨,能够对苏博...     

ITGB2基因在苏博美利奴羊不同细度皮肤组织中的DNA甲基化及mRNA表达水平分析

本研究旨在分析ITGB2基因在苏博美利奴羊不同细度皮肤组织中的DNA甲基化和mRNA表达水平。以苏博美利奴羊周岁母羊为试验动物,以不同细度的皮肤组织样为试验样本,对ITGB2基因(GenBank登录号:NC_040252.1)启动子区CpG岛进行预测并设计BSP引物,并对ITGB2基因(GenBank登录号:NM_001009485.1)、GAPDH基因(GenBank登录号:NM_001190390.1)mRNA序列设计引物,采用重亚硫酸盐测序法(BSP法)进行扩增纯化后将其连接pMD19-T载体,转化JM109细胞过夜培养,形成单菌落,筛选阳性克隆菌进行测序,对所获序列进行分析,分析ITGB2基因启动子区CpG岛在周岁母羊皮肤组织的甲基化模式,并运用实时荧光定量PCR检测ITGB2基因在苏博美利奴羊不同细度皮肤组织中的mRNA表达水平。结果显示,极细组苏博美利奴羊CpG岛甲基化率(94.29%)高于极粗组苏博美利奴羊的CpG岛甲基化率(87.62%),其中,极细组苏博美利奴羊CpG2、CpG3、CpG4、CpG7甲基化率(100%、100%、100%和80.00%)均高于极粗组(86.67%、93.33%、80.00%和73.33%);ITGB2基因在苏博美利奴羊极粗皮肤组织中的表达量极显著高于极细皮肤组织的表达量(P0.01),且ITGB2基因的DNA甲基化水平与mRNA表达量呈明显负相关。研究表明,DNA甲基化对皮肤生长发育有一定作用,可作为一个候选的表观遗传标记用于苏博美利奴羊。     

ITGB2基因在苏博美利奴羊不同细度皮肤组织中的DNA甲基化及mRNA表达水平分析

本研究旨在分析ITGB2基因在苏博美利奴羊不同细度皮肤组织中的DNA甲基化和mRNA表达水平。以苏博美利奴羊周岁母羊为试验动物,以不同细度的皮肤组织样为试验样本,对ITGB2基因（GenBank登录号：NC_040252.1）启动子区CpG岛进行预测并设计BSP引物,并对ITGB2基因（GenBank登录号：NM_001009485.1）、GAPDH基因（GenBank登录号：NM_001190390.1）mRNA序列设计引物,采用重亚硫酸盐测序法（BSP法）进行扩增纯化后将其连接pMD19-T载体,转化JM109细胞过夜培养,形成单菌落,筛选阳性克隆菌进行测序,对所获序列进行分析,分析ITGB2基因启动子区CpG岛在周岁母羊皮肤组织的甲基化模式,并运用实时荧光定量PCR检测ITGB2基因在苏博美利奴羊不同细度皮肤组织中的mRNA表达水平。结果显示,极细组苏博美利奴羊CpG岛甲基化率（94.29%）高于极粗组苏博美利奴羊的CpG岛甲基化率（87.62%）,其中,极细组苏博美利奴羊CpG2、CpG3、CpG4、CpG7甲基化率（100%、100%、100%和80.00%）均高于极粗组（86.67%、93.33%、80.00%和73.33%）;ITGB2基因在苏博美利奴羊极粗皮肤组织中的表达量极显著高于极细皮肤组织的表达量（P < 0.01）,且ITGB2基因的DNA甲基化水平与mRNA表达量呈明显负相关。研究表明,DNA甲基化对皮肤生长发育有一定作用,可作为一个候选的表观遗传标记用于苏博美利奴羊。     

苏博美利奴羊皮肤组织中WNT2基因的DNA甲基化与表达量分析

毛囊是皮肤的衍生物,WNT信号通路是已知与毛囊发育密切相关的通路之一,为研究WNT信号通路中关键基因WNT2的DNA甲基化和基因表达对羊毛性状的调控作用,本研究以周岁苏博美利奴羊为研究对象,采用亚硫酸氢盐测序法(BSP),并结合前期MeDIP-seq结果检测了WNT2基因在第5外显子及前后100bp处的DNA甲基化模式,通过实时荧光定量PCR法检测WNT2基因在苏博美利奴羊皮肤组织中的表达量。结果显示:WNT2基因在2组中的甲基化水平均较高,且2组的表达水平与DNA甲基化水平变化趋势一致,同时,CpG11位点的甲基化水平与表达量之间呈现显著正相关,该位点可能与羊毛纤维直径有关,表明WNT2基因的DNA甲基化水平对羊毛纤维直径有一定作用。本实验为后期深入研究DNA甲基化对毛囊的影响提供了重要参考,也为该基因的进一步研究提供理论基础。     

苏博美利奴羊S100A11基因序列分析及表达研究

为了探讨S100A11基因在苏博美利奴羊中不同类型细度的细毛羊中的表达模式,试验以苏博美利奴羊为研究对象,克隆了钙囊素S100A11基因,采用生物信息学方法进行遗传进化分析,对S100A11蛋白的理化性质进行分析,并对其二级蛋白结构进行预测,且通过RT-PCR相对定量方法检测S100A11基因在不同绵羊个体中的表达规律。结果表明:绵羊S100A11基因的CDS全长序列为866 bp,编码了105个氨基酸,与绵羊、山羊、牛、猪、鼠、兔、鸡、狗和斑马鱼的CDS同源性分别为96%、96%、96%、87%、24%、44%、70%、70%、60%;分别在1 bp、220~336 bp、415~864 bp有3个开放式阅读框(ORF);S100A11基因全长为4 798 bp。S100A11蛋白含有1个信号肽、19个磷酸化位点;同时S100A11基因在超细型细毛羊皮肤组织表达量极显著高于细型细毛羊的表达量(P0.01),差异倍数为2.048。     

苏博美利奴羊主要经济性状的遗传参数估计

苏博美利奴羊是我国近年来培育出的超细型细毛羊品种,为了解该品种主要经济性状的遗传参数以及群体改变的速度和方向,本研究收集2014—2020年新疆巩乃斯种羊场苏博美利奴羊的周岁母羊鉴定记录共计9140条、剪毛称重记录共计7158条以及初生重记录5540条;利用DMU软件采用AIREML模块结合EM算法配合单性状动物模型估...     

内蒙古绒山羊毛囊发育不同时期皮肤中BMP4基因的表达

试验应用RT-PCR技术对骨形态发生蛋白4(BMP4)基因在内蒙古绒山羊毛囊发育不同时期的表达情况进行了定量检测,为深入探讨该基因对毛囊发育的作用及机理提供线索和依据.     

苏博美利奴羊核心群级进杂交不同世代对产毛性状影响的研究

本试验旨在研究苏博美利奴羊选育过程中杂交不同世代对产毛性状的影响。选择新疆3个核心群场2.5岁母羊为试验羊,按育种进程分为基础群、级进一代、级进二代、横交一代、横交二代、横交三代、横交四代,共计7个世代组,以基础群为对照组,分别测定细度、剪毛量、净毛率、净毛量、毛长度和剪毛后体重等6个产毛性状,分析各性状遗传参数与选择进展变化曲线。结果表明:羊毛细度、毛长度随杂交世代增加呈缓慢下降趋势,细度与毛长度存在较高的遗传相关(r_A=0.388),选择细度会导致毛长度变短;各世代净毛量、剪毛后体重整体平稳,基本维持了杂交前水平。经过7个世代的选择,细度由基础群的21.18μm达到17.20μm超细毛标准,遗传进展明显;毛长由9.90 cm降至9.13 cm;净毛量由3.12 kg降至3.05 kg。结果显示,级进杂交不同世代对产毛性状有影响,选择细度会降低毛长度和净毛量。     

成年辽宁绒山羊皮肤毛囊周期性发育不同时期FGF_5 mRNA的表达分析

成纤维细胞生长因子(FGF_5)基因在次级毛囊的周期性发育过程中具有重要的调控作用。利用RT-PCR技术检测了FGF_5基因mRNA在成年辽宁绒山羊皮肤毛囊不同时期(兴盛前期、兴盛期、退行期和休止期)的表达规律。结果表明:FGF_5基因mRNA在不同时期的辽宁绒山羊皮肤组织中均有表达,表达量由高到低顺序依次为休止期、兴盛期、退行期和兴盛前期;在休止期表达量最高,兴盛前期表达量最低;其中休止期表达量与兴盛前期和退行期间差异均显著(P0.05),兴盛前期与其余3个时期间也差异显著(P0.05),但休止期与兴盛期、兴盛期与退行期间差异均不显著(P0.05)。因此,FGF_5基因表达可能控制着绒山羊的毛囊从兴盛期向退行期转换。     

力克斯兔不同发育时期皮肤及毛囊组织形态的研究

本试验旨在研究力克斯兔不同发育时期皮肤组织形态结构的变化规律。取胚胎20、26、29 d和出生后1、15、30、60 d及90 d的力克斯兔的皮肤组织,进行石蜡切片,H.E.染色。结果显示,胚胎20 d²6 d,是力克斯兔的皮肤表皮和真皮发育形成时期,其衍生物毛囊原基出现并发育形成初级毛囊;29 d时次级毛囊出现,皮肤的结构基本完整;仔兔出生后皮肤发育基本成熟,随着年龄的增长皮肤变厚其结构无明显的变化。试验表明,力克斯兔的皮肤结构从胚胎20 d到出生后这段期间处于剧烈的分化状态,皮肤内的大部分结构都是这一时期分化形成的,出生后的皮肤结构已基本完整。     

角蛋白5基因在内蒙古绒山羊皮肤毛囊发育周期中的表达模式分析

为揭示角蛋白5(Keratin 5)基因与内蒙古绒山羊皮肤毛囊发育周期的关联作用,实验采用RT-q PCR和West-blotting方法,从m RNA水平和蛋白质水平探索周岁母羊体侧部皮肤组织一年12个月毛囊发育周期中Keratin 5表达量的变化。结果表明:Keratin 5在皮肤毛囊发育周期中的表达量在m RNA水平和蛋白质水平上均有明显差异,在10月皮肤毛囊发育兴盛期表达量显著增高(P0.05),在3月毛囊发育休止期表达量显著降低(P0.05)。结果显示,Keratin 5与绒山羊皮肤毛囊发育周期有关联作用。     

乾华肉用美利奴羊皮肤毛囊性状及其遗传特性的研究

乾华肉用美利奴羊(暂定名)是正在培育中的肉毛兼用型细毛羊新品种群,除具有较高的产肉性能外,还具有生产同质细毛的特性,其产毛性能是与其皮肤毛囊结构密切相关的。因此,通过采集不同年龄阶段的皮肤样品,采用组织切片技术观测其皮肤毛囊性状,并对其相关性状的遗传力进行了估测。结果表明:乾华肉用美利奴羊皮肤的表皮层随年龄的增加而增厚;其真皮层中毛囊层较为发达,母羊在初生、断奶、1.5岁3个年龄段的毛囊层厚度占皮肤总厚度的比率分别为63.27%、67.54%和66.89%,而公羊在断奶、1.5岁的毛囊层厚度占皮肤总厚度的比率分别为70.58%和57.75%;公母羊毛囊群的S/P值均随年龄的增长而增大,其断奶期和1.5岁时的遗传力分别为0.727和0.384,均为高遗传力性状,说明其毛用性状能稳定遗传。     

乾华肉用美利奴羊皮肤毛囊结构及周期性变化规律的研究

为了揭示绒毛生长不同时期乾华肉用美利奴羊皮肤毛囊结构与变化规律,进而为其毛囊发育的分子调控机制奠定组织学基础,本试验采用组织学方法,对乾华肉用美利奴羊绒毛生长的兴盛期、退行期、休止期毛囊结构及毛囊密度变化的差异进行比较研究。结果表明:不同时期的乾华肉用美利奴羊皮肤毛囊密度存在一定的差异,且各时期初级毛囊密度变化不明显(P0.05),次级毛囊密度兴盛期最大(42.73±4.71个/mm~2),其次为退行期(32.53±3.32个/mm~2),休止期次级毛囊密度最小(28.21±2.79个/mm~2),且不同时期次级毛囊密度差异显著(P0.05);绒毛生长兴盛期S/P值最大,退行期、休止期差异显著(P0.05)。     

细毛羊皮肤毛囊不同发育时期miR-1298-5p靶基因预测及验证

为了探讨miR-1298-5p及其靶基因与细毛羊毛囊生长发育的关系,以细毛羊不同发育时期皮肤毛囊组织为材料,通过生物信息学方法预测miR-1298-5p的靶基因,采用RT-PCR对miR-1298-5p与其潜在靶基因FGF_2进行核酸水平相对定量检测,利用Western Blot对潜在靶基因FGF_2进行蛋白相对定量检测。生物信息学预测结果表明,FGF_2的3'UTR存在miR-1298-5p种子区结合位点;miR-1298-5p在皮肤毛囊不同发育时期呈现差异性表达;miR-1298-5p与其潜在靶基因之间呈现一种负调控趋势,说明miR-1298-5p可能通过负调控FGF_2从而调控皮肤毛囊生长发育。表明结合靶基因预测结果、miR-1298-5p在核酸水平表达规律及FGF_2在核酸水平表达规律和蛋白表达水平表达规律初步确定FGF_2为miR-1298-5p的靶基因。     

BMP_2 mRNA在不同时期成年辽宁绒山羊皮肤毛囊中的表达

辽宁绒山羊是全世界公认的高产绒量的绒山羊品种之一,其皮肤次级毛囊是山羊绒生长的"发源地"。在次级毛囊周期性发育过程中,骨形态发生蛋白(BMP_2)基因对其起重要调控作用。本研究利用RT-PCR技术检测BMP_2基因mRNA在成年辽宁绒山羊皮肤毛囊不同时期(兴盛前期、兴盛期、退行期和休止期)表达规律。研究结果表明:BMP_2基因mRNA在不同时期的辽宁绒山羊皮肤组织中均有表达,在时期1表达量达到最高,呈逐渐下降趋势,但在时期3有一个小的上升趋势,且相邻时期之间(时期2和时期3,时期3和时期4)表达量几乎没有差异(P 0. 05),但时期1和时期2,时期1和时期3之间表达量差异显著(P 0. 05)。其中时期1和时期4表达量差异极显著(P 0. 01),而时期2和时期4之间表达量几乎没有差异(P 0. 05)。     

BMPR-IB基因在内蒙古绒山羊皮肤毛囊中的表达

利用地高辛标记探针的组织原位杂交技术将BMPR-IB基因特异性定位于内蒙古绒山羊各发育阶段皮肤毛囊中,电镜下观察其表达情况.结果表明BMPR-IB基因在胚胎期和成年羊初级毛囊、次级毛囊的内根鞘均有表达,有可能影响内蒙古绒山羊出生前后毛囊的分化和增生.     

Wnt10b在乾华肉用美利奴羊毛囊周期中的表达规律

为研究Wnt10b在乾华肉用美利奴羊毛囊发育周期中的表达规律,试验采用荧光定量RCR、免疫印迹与免疫组化方法对兴盛期(9月)、退行期(1月)、休止期(3月)皮肤中Wnt10b的表达规律进行了测定。结果从基因与蛋白水平上证明,Wnt10b的表达具有规律性,兴盛期表达量最高,主要表达于毛母质细胞,内外根鞘也有少量表达;退行期表达量逐渐减少,进入休止期后表达量降至最低,几乎不表达。进一步说明Wnt10b对乾华肉用美利奴羊毛囊的周期性生长具有重要的调节作用。