牛IVP胚胎玻璃化冷冻技术的研究

作者比较了乙二醇传统冷冻和OPS玻璃化冷冻牛IVP胚胎的效果,目的是改善其冷冻效果,提高IVP胚胎的移植妊娠率。结果表明,玻璃化冷冻后的存活率(D7-71)明显高于D7-71L(P<0.01),D7-72组与D7-71L组(传统冷冻方法)的存活率基本一致(P>0.05)。     

牛胚胎玻璃化冷冻保存技术及国内近期研究进展

本文就胚胎玻璃化冷冻保存的原理、冷冻保护剂的作用和冷冻方法及近期国内牛胚胎玻璃化冷冻的研究进展情况进行了详细的综述.     

牛胚胎玻璃化冷冻技术的发展和应用概况

胚胎冷冻保存是动物胚胎工程的重要组成部分，它是胚胎移植技术在生产中推广应用的重要基础。和现在通用的常规冷冻法相比，玻璃化冷冻具有用时短，所需设备少和操作简单等优点，成为目前国内外胚胎冷冻保存领域发展新方向。本文就牛胚胎玻璃化冷冻的概念、方法和国内外发展状况做一简要综述。     

牛胚胎冷冻保存的研究进展

目前,牛的胚胎冷冻保存巳成为一种较成熟的常规技术,广泛应用于牛的繁殖科研与生产。本文回顾了牛胚冷冻保存技术的发展概况,对牛胚胎的常规冷冻技术、直接冷冻法及玻璃化冷冻技术的进展作了简要论述。     

哺乳动物胚胎玻璃化冷冻研究进展

近40年来,利用冷冻保存技术将哺乳动物胚胎长期保存起来,建立"胚胎库"是保护物种资源和拯救濒危动物的有效手段,同时也是加快家畜品种改良、建立动物基因库和实施胚胎移植产业化的重要组成部分,也可以为克隆、转基因等现代生物技术提供丰富的试验材料,使胚胎的供给不受时间和空间的限制。胚胎冷冻保存技术在人类辅助生殖方面也具有广阔的应用前景。本文主要介绍了玻璃化冷冻过程中胚胎冷冻主体承载工具特点和应用,并展望未来哺乳动物胚胎冷冻发展的方向。     

牛胚胎玻璃化冷冻保存研究初报

传统的胚胎冷冻方法需诱发结晶,按一定速率降温,不仅程序复杂费时间（需几小时）,而且还得使用价值昂贵的胚胎冷冻仪。为此,１９８５年Ｒａｌｌ等人首先发明了玻璃化冷冻法［１］,不使用冷冻仪,将冷冻时间缩短（约为３０ｍｉｎ）。但他们选用的是以大约７ｍｏｌ／Ｌ二甲基亚砜为主的抗冻剂,因其化学毒性大,对胚胎的存活带来一定影响［２,３］。１９８６年Ｓｃｈｅｆｆｅｎ等人,利用丙三醇及丙二醇为抗冻保护剂,因化学毒性仍较大,冷冻保存后的胚胎成活率仍不稳定［４］。针对化学毒性问题,１９９０年Ｋａｓａｉ等人利用化学毒性…     

哺乳动物胚胎玻璃化冷冻方法

哺乳动物胚胎冷冻技术自建立以来,已进行了一些重大改进。其主要进展有: 1.缩短冷冻时间:提高慢速(0.3℃/分钟)降温操作的中止温度,至到较高的零下温度(-30～-40℃)或者快速降温,降到一定低温便保持此温度一段时间(两步冷冻法)。这样做虽然时间缩短了,但胚胎仍含有水分,这些水分在胚胎投入液氮的急剧降温过程中,便形成小冰晶或者不太稳定的玻璃态。因此,需快速解冻,以防止升温过程中形成有损于胚胎的冰晶。 2.缩短解冻后脱除低温保护剂时间:用非渗透剂(蔗糖)一步稀释,以避免保护剂脱出后胚胎发生渗透性膨胀。 3.玻璃化冷冻法(Vitrification):这是前不久研究出的一种新冷冻方法。其设计根据是,保护剂的稀释液在急剧降温到很低温度时,能被浓缩,而不会形成冰晶。作者已试验成功用两种浓度的低温保护剂,作为胚胎内液(10％甘油和20％丙二醇混合液)和外液(25％甘油和25％丙二醇混合液),且均能达到玻璃化。用此法冷冻的小鼠和牛的晚期桑葚胚已移植成功并产仔。     

和牛体外受精胚胎玻璃化冷冻与解冻孵化试验

用添加5％犊牛血清(FCS)的TCM-199进行卵母细胞成熟,BO液进行体外受精后,在5％犊牛血清的CR1aa液进行体外培养获得和牛体外受精胚胎。经玻璃化冷冻保存后解冻,进行孵化试验,解冻后透明带完整率为100％,解冻后存活率为90％。用含20％和5％犊牛血清(FCS)的TCM-199培养孵化,经24h、48h存活率分别为77．8％、74．1％;51．9％、49．1％。两者差异不显著。     

牛胚胎生产的全程质量控制

本文介绍了供体牛的准备、供体牛同期发情处理、供体牛的超排和配种以及胚胎回收、胚胎质量评定、胚胎冷冻等牛胚胎生产的各个环节中应采取的全程质量控制措施。     

牛胚胎移植技术的研究与应用

本文总结了牛胚胎移植技术在国内外的研究与发展概况,同时从供、受体母牛的选择与饲养管理、供体的超排、发情鉴定与配种、受体的同期发情与发情鉴定、胚胎的收集与质量鉴定、胚胎的移植等方面对牛胚胎移植技术的具体操作过程作了较详尽地论述,最后阐述了牛胚胎移植存在的问题与发展前景。     

影响牛胚胎移植效果的因素分析

近年来,胚胎移植技术在我国发展迅速,并在生产中得到了一定的应用,但由于费用比较高,且移植成功率受到很多因素影响,使其推广受到了很大限制。本文就牛胚胎移植过程中影响其移植成功率的几个方面因素,包括供体和受体牛的选择、供体和受体牛的同期发情程度、胚胎质量、移植者的技术操作水平、受体牛的饲养管理以及移植季节等作一综述。     

我国牛胚胎工程技术研究与应用进展

本文就牛胚胎工程技术的研究成果,实际应用现状及研究新进展等方面进行了综合论述,并就这一高新技术产业化建设中的问题与对策发表了自己的看法。     

牛胚胎冷冻与移植受胎技术研究

本文进行了牛胚胎冷冻与移植受胎技术研究。摸索出了提高牛冷冻胚胎成活率和移植受胎率的综合配套技术。牛冷冻胚胎解冻成活率达８４．４％（５７／１２２）。其中１９９６年移植受胎率达到５５．６％（２０／３６）。Ａ级胚胎达以７７．８％（２１／２７），并在我国首次获得中国荷斯坦牛冷冻胚胎的二分胚的同孵孪生牛犊。且达到４２．９％（３／７）移植受胎率。     

牛早期胚胎发育影响因子研究进展

早期胚胎的死亡给畜牧业的发展带来了巨大的经济损失,本文分析了影响牛早期胚胎发育的诸多因素,阐述了黄体功能对早期胚胎发育的影响,指出生长因子和细胞因子可能是非人为因素中早期影响胚胎发育的最重要的因素。     

牛早期胚胎体外发育条件的研究

本试验研究了精卵共育时间和培养液等因素对牛早期胚胎体外发育的影响。精卵共育6～12h能显著提高受精卵的囊胚发育率,受精卵的囊胚发育率为23．2％～25．3％,共育时间为24h时,囊胚发育率降低,但精卵共育6h时卵裂率较低;TCM199、mBECMaa、mSOFaa均能支持体外受精卵的发育,其囊胚发育率分别为18％、30．7％和29．2％。试验结果表明：精卵于BM受精液中共育9h后,将其置于添加5％OCS的mBECMaa或mSOFaa中培养,能得到较高的体外生产胚胎的囊胚发育率。     

酒泉地区不同受体牛胚胎移植效果观察

本试验对酒泉地区不同品种、年龄、胎次、体况受体牛的胚胎移植效果进行了分析研究.结果发现,移植妊娠率为：西杂受体牛（52.42％）＞土杂受体牛（47.78％）＞中国荷斯坦受体牛（46.94％）;2～6周岁的受体牛移植妊娠率（51.94％）高于7岁以上的受体牛（40.56％）;经产1～3胎受体牛移植妊娠率（51.61％）高于4胎以上牛（51.28％）和育成牛（47.06％）;体况上等受体牛的移植妊娠率（52.31％）高于体况中等受体牛（48.87％）.其中除2～6周岁与7岁以上受体牛的移植妊娠率差异极显著外（P＜0.01）,其余均差异不显著（P＞0.05）.     

体外成熟对牛卵母细胞孤雌激活后发育潜力的影响

本试验在卵母细胞体外成熟的研究基础上,研究了培养用水、卵泡液和成熟时间对卵母细胞体外成熟及孤雌激活后发育潜力的影响.结果表明(1)将卵母细胞分别于蒸馏水和Milli-Q超纯水配制的成熟培养液中培养22～24 h, 孤雌激活后, 卵裂率无显著差异(P>0.05); 但孤雌卵在超纯水配制的胚胎培养液中培养,囊胚发育率为22.3%, 明显高于在蒸馏水配制的培养液中的囊胚发育率14.1%(P<0.05).(2)在成熟培养液中添加10%、20%卵泡液,成熟卵母细胞孤雌激活后的囊胚发育率(32.3%, 30.9%)明显高于添加5%和0%卵泡液组的囊胚发育率(21.8%, 22.7%,P<0.05).卵母细胞在添加20%卵泡液的培养液中成熟培养,孤雌激活后囊胚孵化率明显低于添加0、5%、10%卵泡液组的囊胚孵化率(P<0.05).(3)成熟28 h或30 h的卵母细胞孤雌激活后,其囊胚发育率(30.5%或29.4%)明显高于成熟24 h或26 h组的囊胚发育率(20.5%或22.1%,P<0.05).