柔嫩艾美耳球虫各阶段虫体纯化方法的改进

本文报道了改进的柔嫩艾美耳球虫各阶段虫体纯化方法。用胃蛋白酶消化盲肠道组织，铜筛过滤除去大颗粒杂质后，以1．1mol·mL－1蔗糖离心漂浮卵囊，然后用小于0．5mol·mL－1蔗糖溶液反复漂洗，最后以5％次氯酸钠消毒处理，获得了大量纯化柔嫩艾美耳球虫卵囊。孢子化卵囊经研磨，消化，游离出子孢子后，过DEAE-纤维素52层析柱，以0．05mol·mL-1，Tris－HCl，（pH＝80，0．15mol·mL1-NaCl）洗脱，层析往高5cm，洗脱液水柱高3cm，流速为2mL·min－1，纯化出了子孢子。取人工感染球虫鸡的120h后的盲肠，游离出第二代裂殖子，铜筛过滤后，过柱方法同前，纯化出了第二代裂殖子。结果证明本法分离的子孢子和第二代裂殖子活性好，回收率达87％。     

表面活性素体外抗球虫作用研究

[目的]探讨表面活性素体外抗鸡柔嫩艾美耳球虫的效果。[方法]实验前将柔嫩艾美耳球虫活化,配成2.5×106/ml细胞悬液加入细胞培养板,实验组各孔分别加入不同浓度表面活性素,对照组加入等量MEM,采用定量法作柔嫩艾美耳球虫生长曲线,观察其增长速率。用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法,观察表面活性素对柔嫩艾美耳球虫成活率的影响,用乳酸脱氢酶(LDH)测定法测定表面活性素对柔嫩艾美耳球虫的损伤。[结果]在5 mg/ml表面活性素作用下其20~120 h增殖率为0,5 mg/ml表面活性素可使其破裂。[结论]表面活性素具有较强的抗柔嫩艾美耳球虫作用,有可能成为预防的理想药物。     

银杏叶提取物和茶多酚联用对缺氧环境中内皮细胞的影响

[目的]研究银杏叶提取物和茶多酚联用对HU-VEC的影响。[方法]用缺氧缺糖方法体外模拟血管供血不足,观察缺氧诱导下人脐内皮细胞(HU-VEC)中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力及乳酸脱氢酶(LDH)泄漏量的变化,研究银杏叶提取物和茶多酚对HU-VEC的作用。[结果]缺氧诱导可使内皮细胞GSH-PX活力降低,LDH泄漏量增加;银杏叶提取物、茶多酚以及两者联用组与模型组相比细胞GSH-PX的活力升高,LDH泄漏量有所下降;银杏叶提取物和茶多酚联用效果优于银杏叶提取物组和茶多酚组。[结论]缺氧可损伤HU-VEC的形态和功能;银杏叶提取物和茶多酚对缺氧诱导下的HU-VEC有保护作用,且联用组效果优于单独作用组。     

柔嫩艾美耳球虫端粒DNA重复序列的South-ern印迹杂交分析

为进一步确定柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)端粒DNA的重复序列,为下一步端粒酶活性检测奠定基础,根据已克隆发表的E.tenella端粒DNA重复序列信息,设计了由4个端粒重复序列串联的寡聚核苷酸探针(TTTAGGG)4,并以生物素地高辛标记。将该探针与经BAL31-EcoRⅠ酶切后的E.tenella基因组DNA进行Southern印迹杂交分析。结果显示:E.tenella基因组DNA与探针杂交获得了清晰的杂交条带,随BAL31酶切时间的延长,杂交信号逐渐减弱,进一步证明了E.tenella端粒DNA重复序列为5-′TTTAGGG-3′,且此重复序列在E.tenella染色体的末端。     

CMV启动子与艾美耳球虫基因侧翼序列对黄色荧光蛋白表达调控作用的研究

探索CMV启动子与艾美耳球虫基因侧翼序列对串联型黄色荧光蛋白(YFP)表达的调控作用,将含有串联型YFP、CMV启动子、柔嫩艾美耳球虫组蛋白4(Histone4)上游启动序列和肌动蛋白(Actin)下游调控序列的重组载体pCMV-YFP-YFP、pH4-YFP-YFP-ACT电转染Vero细胞和柔嫩艾美耳球虫子孢子,观察荧光情况.结果证明,CMV启动子不能驱动YFP在柔嫩艾美耳球虫中正常表达,而其自身基因的侧翼序列能够启动和调控串联型YFP在柔嫩艾美耳球虫中的正常表达.     

硒对氧化应激小白鼠肝脏酶活的影响

为研究硒对氧化应激小白鼠肝脏酶活的影响,选取45日龄36只健康昆明品系雄性小白鼠,按体重相近的原则随机分为3组:1组为对照组(硒的水平0.3mg·kg-1 W,腹腔注射10mg·kg-1 W的生理盐水);2组为低硒应激组(硒的水平0.3mg·kg-1 W,腹腔注射D-半乳糖150mg·kg-1 W);3组高硒应激组(硒的水平0.6mg·kg-1 W,腹腔注射D-半乳糖150mg·kg-1 W)。试验结束后,屠宰所有试验小白鼠,摘除眼球采血,分离出肝脏,测定MDA、T-AOC、GSH-PX、LDH、ALT、ASTD的活性。结果表明:与对照组相比,低硒应激组GSH-PX活性、T-AOC水平极显著降低,MDA浓度极显著升高;高硒应激组GSH-PX、T-AOC含量差异不显著。低硒应激组与高硒组之间ALT和ALP活性差异显著。与对照组相比,低硒组ALT活性显著,ALP活性极显著增高,高硒应激组LDH、ALT和ALP活性差异不显著,低硒应激组和高硒应激组之间差异显著。0.6mg·kg-1 W硒对D-半乳糖诱导的肝脏损伤有明显的保护作用,这种保护作用可能与硒提高抗氧化酶活性、增强机体的抗氧化防御能力有关。     

氯沙坦对过氧化氢诱导乳鼠心肌细胞凋亡的保护作用机制研究

目的 探讨氯沙坦对过氧化氢诱导心肌细胞凋亡的保护作用机制.方法 在原代培养SD乳鼠心肌细胞上建立H2O2损伤模型,分别以低、中、高剂量(1、3、10μmol/L)氯沙坦、10μmol/L氯沙坦+50μmol/L LY294002处理,检测各组心肌细胞存活率及丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD...     

A Plasmodium falciparum antigen that binds to host erythrocytes and merozoites

Antigens that bind to erythrocytes were identified in the supernatant fluids of a cultured human malaria parasite (Plasmodium falciparum). A 175-kilodalton (175K) antigen bound only to erythrocytes susceptible to invasion. The 175K antigen from the Camp or the FCR-3 strain also bound to merozoites. However, the antigen did not bind to merozoites when merozoites and supernatant antigens were from different strains unless proteinase inhibitors were present. Moreover, erythrocytes coated with supernatant antigens from the Camp or FCR-3 strain were invaded normally by merozoites of the homologous strain but were partially resistant to invasion by merozoites of the heterologous strain. The 175K antigen may be a receptor acting as a "bridge" between erythrocytes and merozoites.     

5株堆型艾美耳球虫顶质体rpoB基因的扩增及序列分析

以5株堆型艾美耳球虫为研究对象,对其顶质体rpoB基因的部分序列进行了PCR扩增、测序及序列分析,并与GenBank上发表的柔嫩艾美耳球虫及其他顶复门寄生虫相关序列进行比较,研究顶质体的遗传变异情况。结果表明,从堆型艾美耳球虫不同来源虫株均获得了469bp的目的片段,应用DNAStar软件进行序列对比发现,5株堆型艾美耳球虫的顶质体rpoB序列完全一致,与柔嫩艾美耳球虫相应序列的相似性为92.75%,而与刚地弓形虫和疟原虫的相似性分别为67.23%和64.62%。首次报道了堆型艾美耳球虫rpoB序列,显示rpoB基因序列保守,不同来源堆型艾美耳球虫虫株的序列没有差异,为进一步研究艾美耳球虫的群体遗传学奠定了基础。     

柔嫩艾美耳球虫A08基因的阶段表达分析与毕赤酵母表达系统构建

对A08蛋白基因在柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段(未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子和裂殖子)的转录情况进行分析,同时以A08蛋白cDNA为模板扩增出1 083 bp的目的基因片段,将该基因连接到pGEM-T-easy载体上,经序列测定和双酶切鉴定表明为A08基因.用EcoRI和NotI酶切回收目的片段连接至用同样酶切的真核表达载体pPIC9k上,构建了重组质粒pPIC9k-A08,转化大肠杆菌TOP10后,提取质粒,经酶切鉴定正确后用SacI将重组质粒线性化,再电转入毕赤酵母GS115菌株,G418筛选抗性重组子,经PCR鉴定正确重组子后做甲醇诱导表达.RT-PCR结果显示该基因在子孢子阶段的转录拷贝数显著高于其他发育阶段,是一个子孢子高表达基因.重组酵母诱导表达产物经SDS-PAGE检测证实,柔嫩艾美耳球虫A08基因在毕赤酵母中获得表达.Western-blot初步分析表明,表达产物具有免疫学反应活性.     

小鼠实验性缺氧脑和肺组织MDA·LD含量和LDH活性变化

[目的]探讨小鼠实验性缺氧脑和肺组织丙二醛、乳酸含量和乳酸脱氢酶活性变化。[方法]将18只小鼠随机分为3组:正常对照组、急性缺氧组、急性一氧化碳染毒组,测定脑和肺组织MDA、LD含量、LDH活性。[结果]急性缺氧组和急性一氧化碳染毒组小鼠脑和肺组织MDA和LD含量显著增高。与对照组相比,急性缺氧组和急性一氧化碳染毒组小鼠肺组织中LDH活性显著降低,而在脑组织无显著性变化。MDA和LD含量在缺氧早期,脑和肺组织是易变化性指标,其改变可能与该组织损伤程度有关。LDH变化说明肺组织比脑组织对缺氧产生的自由基损伤更敏感。[结论]该模型为畜牧生产和水产养殖中出现的机体缺氧提供理论依据和实践指导。     

抑制钙信号转导对柔嫩艾美耳球虫入侵细胞的影响

 【目的】探讨柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）入侵细胞与钙信号转导之间的关系,揭示鸡柔嫩艾美耳球虫病的发生机制。【方法】采用体外狗肾细胞（madin-darby canine kidney cell,MDCK细胞）培养技术,检测了细胞外缺钙、Ca2+内流阻断剂（硝苯地平）和钙调蛋白抑制剂（三氟拉嗪）对E. tenella子孢子入侵率的影响,并测定了培养细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）和细胞活性。【结果】E. tenella子孢子入侵细胞的抑制率随着细胞外Ca2+浓度的降低而升高。钙离子浓度降低到600 μmol•L-1时,入侵率（23.33%）均极显著低于对照组（P＜0.01）;细胞外无钙时,入侵抑制率高达53.18%;硝苯地平和三氟拉嗪均能极显著抑制子孢子的入侵（P＜0.01）,其中10 μmol•L-1的硝苯地平和50 μmol•L-1三氟拉嗪分别对子孢子的入侵抑制率达71.41%和97.13%,二者合用入侵抑制率可达98.59%。在E. tenella子孢子入侵细胞的过程中,MDCK细胞的活性均在90%以上,与对照组差异不显著（P＞0.05）,接种E. tenella子孢子的MDCK细胞培养液中LDH的活性与未接种的活性差异不显著（P＞0.05）。【结论】细胞外钙缺乏、钙通道阻断剂硝苯地平和钙调蛋白抑制剂三氟拉嗪对E.tenella子孢子入侵MDCK细胞均有抑制作用,但子孢子入侵对MDCK细胞的活性无明显影响。     

盐酸克伦特罗对小鼠大脑皮层ATP、SDH、ADA和LDH活性的影响

通过对大脑皮层ATP酶、琥珀酸脱氢酶(SDH)、腺苷脱氨酶(ADA)和乳酸脱氢酶(LDH)活性的测定,研究盐酸克伦特罗(CLH)对小鼠大脑损伤的影响.选健康小鼠160只,随机分为4组,分别灌胃12.5、25.0、50.0mg/kg的CLH,连续用药30d,对照组灌胃等量生理盐水,在灌胃处理5、10、20、30d时用比色法检测小鼠大脑皮层ATP酶、SDH、ADA和LDH活性的变化.结果表明:与对照组相比,灌胃CLH小鼠大脑皮层ATP酶和LDH活性降低,SDH和ADA活性升高.CLH对小鼠大脑酶活性的影响具有时间-剂量效应.双因素方差分析表明,剂量因素对结果的影响大于时间因素.说明CLH可影响小鼠大脑相关酶活性,对小鼠大脑的损害可能与大脑内ATP酶和LDH活性降低、SDH和ADA活性升高有一定的相关性.     

牦牛乳酸脱氢酶-1两种遗传变异体的纯化及酶学特性比较

 【目的】从乳酸脱氢酶（LDH）水平上探索牦牛(Bos grunniens)低氧适应性分子机制。【方法】利用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析牦牛组织中LDH同工酶谱;用比色法测定牦牛、黄牛和水牛心脏、肝脏和肌肉组织中LDH总活力;采用染料亲和层析和DEAE-Sephadex离子交换层析从牦牛心肌组织中纯化LDH1（由4个H亚基组成）的2种遗传变异体,进行酶学性质的比较。【结果】电泳方法检测发现牦牛LDH1存在2种遗传变异体,根据电泳迁移率分别命名为快型和慢型（LDH1-F和LDH1-S）。获得纯化的牦牛LDH1-F和LDH1-S,比活力分别为21.4 U?mg-1蛋白和17.8 U?mg-1蛋白,在SDS-PAGE和PAGE上均显示1条区带。2种变异体以NADH为底物的米氏常数（Km）值差异不大,均显著高于普通牛的LDH1;以丙酮酸钠为底物的Km值LDH1-F小于LDH1-S。试验进一步比较了携带不同LDH1变异体的牦牛心脏、肝脏和肌肉组织中LDH总活力和各种同工酶谱,未见显著差异,而牦牛心脏、肝脏和肌肉组织中LDH总活力显著或极显著低于黄牛和水牛。【结论】牦牛LDH1 2种遗传变异体的Km值存在差异,且Km(NADH)高于普通牛;牦牛心脏、肝脏和肌肉组织中LDH总活力低于普通牛。     

饲料铅对建鲤生产性能及组织酶活性的影响

探讨饲料中不同水平铅对建鲤(Cyprinus carpio var.Jian)生产性能、血清和肝胰脏酶活性的影响。试验选取483尾建鲤(初始平均体质量为22.95±0.15 g),随机分为7组,各组Pb2+理论添加量分别为0(对照组),2,5,10,20,50和100 mg.kg-1,每组3个重复,试验期60 d。试验结束后,测定建鲤生产性能、血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性和肝胰脏中丙二醛(MDA)的含量,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性。结果表明,与对照组相比,铅暴露组建鲤的增重率和饵料系数无显著差异(P>0.05),但各铅暴露组的增重率呈下降趋势,饵料系数呈上升趋势;随着饲料中铅水平的增加,各铅暴露组血清AST,ALT和LDH的活性呈上升趋势;肝胰脏中MDA的含量呈上升趋势,SOD,GSH-PX的活性被铅诱导升高。结果表明,铅暴露会引起建鲤组织生化指标的改变,对鱼体有多种毒性效应,并且毒性效应指标的变化与铅污染水平有剂量—效应关系,使得鱼体受损,并且可以协同使用这些指标指示铅污染情况的发生。     

转基因柔嫩艾美耳球虫对生态环境的影响

【目的】从表达M2e-EYFP融合蛋白转基因柔嫩艾美耳球虫的稳定性,及其在环境中的传播能力、竞争能力和存活能力方面,分析转基因球虫对生态环境的潜在风险。【方法】稳定性试验包括:转基因球虫感染非靶动物,观察临床症状和卵囊产出情况;转基因球虫继代繁殖,检测荧光率;转基因球虫与毒害艾美耳球虫混合感染,PCR检测卵囊中的外源基因。传播能力试验主要是分析感染鸡和不感染同居鸡的卵囊产量和荧光率。竞争性试验则是用不同混合比例的2种球虫感染鸡,检测卵囊产量和荧光率;存活能力试验是用不同处理方式的卵囊感染鸡,检测卵囊是否产出以分析卵囊存活能力。【结果】转基因球虫不感染小鼠和家鸽,与野生型柔嫩艾美耳球虫宿主特异性相同;连续繁殖传17代后外源基因稳定表达。与毒害艾美耳球虫混合寄生时在异种球虫体内未检测出外源基因。传播能力试验中,46d攻毒时转基因球虫感染与不感染同居组的卵囊产量差异不显著,但与不感染对照组相比均显著减少,且1∶1感染和不感染同居组卵囊荧光率检测结果维持在51.6%67.9%。竟争性试验中,攻毒时各比例感染组卵囊产量均极显著少于不感染攻毒对照组,荧光率检测结果各比例组变化幅动不大,且1∶1组哨兵鸡卵囊荧光率检测结果为41.2%61%。存活能力试验,转基因球虫与野生型球虫在夏季室温条件下均不能存活90d,且与其他不同方式处理的卵囊外界存活时间接近。【结论】说明转基因球虫具有良好的稳定性,在环境中的传播能力、竞争能力和存活能力未呈现显著优于野生球虫的趋势。     

中国林蛙六种组织乳酸脱氢酶同工酶的研究

本文应用聚丙烯酰胺凝胶电泳结合光密度扫描的方法,对中国林蛙6种组织器官的乳酸脱氢酶(LDH)同工酶进行分析研究,结果表明:存在3种基因(Ldh-A、-B、-C)编码的LDH 同工酶;在不同组织中 LDH 同工酶差异显著,其中心肌以 LDH_2、LDH_1活性最高,骨骼肌、肝脏以及脑组织以 LDH_5活性最高,LDHc 仅出现在肝脏及骨骼肌中。     

Lactate dehydrogenase isozymes: kinetic properties at high enzyme concentrations

The kinetic properties of lactate dehydrogenase (LDH) isozymes have been determined at high enzyme concentrations. Spectrophotofluorometric assays revealed that the extent of substrate inhibition of LDH-1 and LDH-5 depends on enzyme concentration. At high enzyme concentrations, in the range of those that exist in most mammalian cells, no inhibition by pyruvate occurred. Pyruvate concentrations up to and including 20.0 millimoles per liter were used for each isozyme at 25 degrees and 40 degrees C at pH 7.0 and 7.4. These results suggest that substrate inhibition of LDH may not occur in vivo but only in vitro after appreciable dilution from physiologic enzyme concentrations. These experiments provide further evidence against the theory that substrate inhibition of LDH-1 in vivo accounts for the distribution of LDH isozymes within various tissues. They raise the possibility that, for other enzymes, kinetic properties determined at highly dilute concentrations in vitro may also be quite different from kinetic properties at the much higher concentrations that exist in vivo.     

对柔嫩艾美耳球虫敏感株与抗药株ATP酶活性的检测

采用ATP酶试剂盒对柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)11种敏感株与抗药株的4种ATP酶活性进行了检测。结果表明,鸡球虫不仅具有活跃的ATP酶系统,而且其活性因球虫对药物敏感性的不同而表现强弱不同。敏感株的ATP酶活性最强,而各抗药株的ATP酶活性均有不同程度的降低,尤其是氯化锂(Na -K -ATP酶抑制剂)和利多卡因(Na 通道阻断剂)参与诱导产生的马杜霉素诱导抗药株和盐霉素诱导抗药株的Na -K -ATP酶,Mg2 -ATP酶,Ca2 -ATP酶和Ca2 -Mg2 -ATP酶的活性极显著低于相同来源的抗药株和敏感株的活性。本文研究表明,虫株对药物的敏感性可能与ATP酶活性有关,检测ATP酶活性可作为判别柔嫩艾美耳球虫对离子载体类抗球虫药物敏感性或抗药性的指标之一。     

吕梁黑山羊血浆酶活性与体型性状关系

以山西吕梁黑山羊为研究对象,用比色法分别测定血液GOT、GPT、Amy、CK、LDH酶活性和CP含量,用SAS软件分析其与6个体型性状指标的相关性,以期寻找一个有效的遗传标记,用于间接选择,为山西吕梁黑山羊育种研究提供新的理论基础。结果表明:吕梁黑山羊乳酸脱氢酶(LDH)活力与管围呈显著正相关(r=0.533,P<0.05);血清铜蓝蛋白(CP)含量与体高和背高呈极显著负相关(r=-0.848、r=-0.646,P<0.01),与管围呈显著负相关(r=-0.490,P<0.05)。改变他们的活力,可以改变生长性状。所以LDH和Cp可作为早期辅助选种指标。