山东省血清4型禽腺病毒的分离鉴定

近期从山东省许多地区爆发的以心包积液为主要病变特征的发病鸡中分离到10株病毒,经PCR检测和血清型鉴定,确定为血清4型禽腺病毒。SPF鸡回归试验证实,分离到的病毒能完全复制出与临床自然发病鸡相同的症状与病变。用该病毒制备的灭活疫苗具有良好的免疫保护作用,制作的抗体也具有良好的治疗效果。     

鸭源血清4型禽腺病毒的分离鉴定

山东省某鸭场发生以心包积液-肝炎为特征的传染性疾病,并造成死亡。为探究其发病原因,对病料进行临床剖检、细菌学检查、病毒分离以及动物回归等试验,结果显示:剖检均可见心包大量淡黄色或透明积液,肝脏有不同程度的坏死出血;细菌分离呈阴性;PCR检测显示血清4型禽腺病毒为阳性;动物回归试验与临床病例一致。确定引起山东省鸭心包积液-肝炎综合征的病原为血清4型禽腺病毒。     

四株Ⅰ群禽腺病毒的分离与鉴定

将从临床采集的发病鸡组织处理后经绒毛尿囊膜接种7日胚龄SPF鸡胚,通过PCR方法对鸡胚培养物进行鉴定,确定分离到4株Ⅰ群禽腺病毒。结合免疫学试验、病理学试验以及动物回归试验对病毒进行特性研究,结果表明分离的病毒均能致鸡死亡并表现出临床症状。使用针对Ⅰ群禽腺病毒Hexon基因的特异性引物对病毒进行基因测序分析发现,分离株均属于基因C型血清4型禽腺病毒。     

鸡源血清4型禽腺病毒的分离鉴定

山东、河北等华北地区12个肉鸡养殖场出现了以心包积液、出血性肝炎为特征的疾病,从采集的病料中进行病毒分离鉴定。本研究对分离的毒株进行PCR扩增、血凝试验、ELD_(50)测定、Hexon基因序列测定与分析以及人工感染试验进行组织病理学观察、抗体水平检测等一系列试验。结果显示,分离的毒株不能凝集鸡和鸭的红细胞,但能够凝集大鼠的红细胞,ELD_(50)为10-3.17/0.2mL。组织学变化显示肝细胞纤维化和脂肪变性,肾小管上皮细胞肿胀、变性,心肌纤维水肿、颗粒变性。对临床采集的血清检测结果显示发病鸡群抗体水平为阳性,发病鸡群中的健康鸡阳性率为40%(40/100),表明鸡群中存在隐性感染。将分离株的Hexon基因组与已发表的血清4型禽腺病毒基因进行同源性比较,发现该分离株与印度株在同一个分支上,同源性在99.6%以上,而与韩国、欧洲、美洲株同源性较远。用分离的毒株感染15日龄的雏鸡能引起心包积液、肝脏出血、肾脏肿大等病变。上述结果表明该分离株为血清4型禽腺病毒。     

禽腺病毒4型BP分离株的分离与鉴定

采集北京市平谷某鸡场病鸡肝组织,经研磨后接种SPF鸡胚,分离到一株禽腺病毒。经PCR扩增,扩增产物测序后进化树分析和病毒中和试验确定该毒株为禽腺病毒4型。动物回归试验复制出相同的临床症状,在电镜下观察到病鸡肝细胞中有典型的腺病毒粒子。综合上述结果确诊病鸡感染了禽腺病毒4型。     

1株禽4型腺病毒JS株的分离鉴定

自2015年以来,心包积液-肝炎综合征在我国部分地区暴发并造成大量肉鸡死亡,从而给养殖户带来巨大的经济损失。2017年从江苏省某发病鸡场的患鸡肝组织中分离获得了1株禽腺病毒4型(fowl adenovirus 4, FAdV-4),将其命名为JS株。Hexon基因同源进化分析显示,该病毒株为我国近期流行株。为了验证该病毒株对鸡的致病性,将10~(6.0)TCID_(50)的病毒用肌肉注射或口服的方式感染3周龄SPF鸡,连续观察14 d。结果发现:肌注组鸡在攻毒后24 h有精神沉郁的症状,在攻毒后第2～3天大批量死亡,死亡率达90%;而口服组鸡一直没有观察到明显的精神症状且死亡率为0。病死鸡剖检可见心包积液、肝脏肿大发黄、肾脏肿大出血、脾肿大等明显病变;荧光定量PCR检测结果显示,病毒在鸡体内多个组织器官均有分布。结果表明本研究分离获得了1株对鸡有较强致病性的FAdV-4毒株,为有效防控心包积液-肝炎综合征奠定基础。     

潍坊地区鸡场禽腺病毒分离鉴定

正2016年4月份,从山东潍坊一个肉鸡场送检一批病死鸡,笔者对该病死鸡进行临床剖检和分子生物学诊断。临床诊断发现该病鸡出现心包积液,肝脏肿大,有坏死点。初步诊断为腺病毒。取病死鸡肝脏研磨并接种鸡胚后,提取尿囊液DNA,使用腺病毒特异性引物扩增出片段,并在NCBI上比对与I群腺病毒IV型相似度最高。因此诊断为腺病毒感染引起。本报道确诊了腺病毒在该地区养殖场中流行情况,给该病毒的预防和治疗提供理论依据。     

禽腺病毒AH株的分离与鉴定

为获得禽腺病毒毒株,将临床疑似Ⅰ群禽腺病毒感染病例的肝组织,通过接种SPF鸡胚进行病毒分离,用PCR方法对分离产物进行扩增,将PCR产物进行序列测定,对测定的序列在NCBI网上进行分析,结果显示,从病料可分离出病毒,用PCR方法特异性地扩增出了与设计片段大小相一致的片段,序列分析表明,分离株序列与禽腺病毒SD1-15分离株序列同源性99%,说明分离株为Ⅰ群禽腺病毒血清4型。     

一株蛋鸡血清8b型禽腺病毒的分离鉴定

从山东潍坊地区以包涵体肝炎为病变特征的发病蛋鸡中采集病料,通过接种7日龄SPF鸡胚分离到1株病毒,经PCR检测、测序分析、进化树分析和血清中和试验鉴定,确定为血清8b型禽腺病毒。将该病毒通过肌肉注射接种14日龄SPF鸡,结果仅部分试验鸡出现肝脏轻微坏死变性,这与临床中发病鸡肝脏明显坏死甚至破裂并不相符,分析可能与饲养条件、管理水平、鸡的品种和日龄、药物使用等方面有关。     

血清4型禽腺病毒研究进展

血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)是引起心包积液-肝炎综合征(Hydropericardium syndrome-inclusion body hepatitis,HPS-IBH)的主要病原。HPS-IBH在多个国家均有报道;2015年6月在我国暴发,主要危害鸡,尤其是3~7周龄肉鸡,已成为危害我国养禽业的主要疫病之一。随着HPS-IBH疫病严重程度的增加,国内外对该病的重视程度也不断增加。近年来,在该病的诊断技术、疫苗和防控技术等领域的研究都取得了一定的进展,为更加全面地了解该病最新研究成果,文章对FAdV-4近年来取得的研究结果进行综述,以期为该病防控提供技术资料。     

5株Ⅰ群4型禽腺病毒的分离与鉴定

对5份不同来源的临床上疑似禽腺病毒感染鸡组织处理后接种6～7日胚龄SPF鸡胚,经过LMH细胞传代,通过血凝性检测和PCR方法对细胞培养物进行鉴定。血凝性检测表明分离物不能凝集鸡红细胞,对Hexon和52K基因的序列分析显示,分离到5株病毒为Ⅰ群4型禽腺病毒(FAdV-4)。动物回归试验结果表明,5个病毒株均能致40日龄SPF鸡死亡,死亡率达80%以上,并表现与FAdV-4感染临床发病相似的症状。研究结果为探究国内FAdV-4分子流行与毒力演变以及病毒感染的预防提供了基础材料。     

血清4型禽腺病毒研究进展

近年来,血清4型禽腺病毒（FAdV-4）在我国爆发,造成家禽行业严重的经济损失。病毒感染引起死亡率高,临床剖检可见明显的心包积液综合征的症状。病毒极具传染性,可垂直及水平传播,通过受感染肝脏组织匀浆可以分离和检测病毒。目前实验室诊断主要通过琼脂扩散试验、酶联免疫吸附试验、限制酶分析、聚合酶链式反应、实时荧光定量PCR、高分辨率的融化曲线分析等进行检测。疾病预防主要通过灭活疫苗的接种,而减毒活疫苗和亚单位疫苗也相继被开发。对FAdV-4的流行病学、发病特征、病毒诊断方法以及预防策略等方面进行了综述,以期为FAdV-4的深入研究奠定基础。     

禽腺病毒4型的研究现状

禽腺病毒4型(FAdV-4)是引起心包积液-肝炎综合征(HPS-IBH)的主要病原,主要危害鸡、鸭、鹅等家禽并造成家禽行业严重的经济损失.随着HPS-IBH疫病严重程度的增加,家禽间的传染性也急剧升高,国内外加强对该病的研究及防治.论文阐述了FAdV-4病毒粒子主要结构蛋白六邻体(Hexon)、五邻体(Penton)和...     

禽腺病毒Ⅰ群分离、鉴定方法

禽腺病毒Ⅰ群(FAV-Ⅰ)是一种双链DNA病毒,病毒对外界环境耐受较强,并有水平传播及垂直传播两种传播方式,近年来在国内呈暴发式流行,各地养殖场均有报道检测到FAV-Ⅰ,FAV-Ⅰ对养殖业造成严重损失。分离、鉴定FAV-Ⅰ的毒株类型是防控此病的基础。除传统的检测方法外,近年新兴了多种检测技术,对这些分离、鉴定方法进行了概述。     

陕西省鸡源血清C-4型禽腺病毒分离与鉴定

2018年5月,西安市某蛋鸡养殖场43 d蛋鸡群出现发热、精神沉郁、拉黄绿色稀便、冠髯苍白等症状,剖检表现为:心包积液,肝脏极度肿大,质脆易碎,色淡呈现土黄色,脾脏、肾脏充血肿大,腺胃乳头有弥散性出血点。根据临床症状、核酸、血清抗体和病理学检测结果确诊为:血清C-4型禽腺病毒感染。     

禽腺病毒4型云南株分离鉴定及Hexon基因序列分析

【目的】分析云南省家禽及野鸟禽腺病毒4型(Fowl adenovirus-4,FAdV-4)流行情况、Hexon基因差异性及致病性,为研究FAdV-4流行及Hexon基因对病毒毒力的影响提供参考。【方法】2020年1月―2021年6月在云南省昆明市、曲靖市、楚雄州、大理州、红河州、玉溪市等家禽养殖密集区采集疑似感染FAdV-4家禽肝脏组织样品158份,候鸟迁徙地采集野鸟新鲜粪便310份,采用PCR技术检测FAdV-4核酸,对获得的代表性阳性样品进行病原分离鉴定,并对分离毒株进行致病性及Hexon基因序列分析。【结果】家禽肝脏组织样品中检出FAdV-4核酸阳性样品19份,阳性率为12.03%(19/158);黑颈鹤粪便样品中检出核酸阳性样品1份,阳性率为0.3%(1/310)。从FAdV-4核酸阳性样品中分离到7株FAdV-4,致病性研究结果显示,FAdV-4云南分离株均能致鸡胚发育不良,引起4周龄肉鸡发生心包积液-肝炎综合征,鸡胚半数致死量(ELD₅₀)为10^―6.17~10^―4.32/mL。7株分离株均聚类于FAdV-C亚群,Hexon蛋白与国内FAdV-4高致病性毒株具有相同的¹⁸⁸R、¹⁹³R、¹⁹⁵Q特征。分离株感染SPF鸡后,临床症状明显,具有高致病性且高致死率,肝细胞病变明显。【结论】研究初步掌握了云南FAdV-4的流行情况,首次在黑颈鹤粪便中检测到FAdV-4病原核酸,分离获得7株FAdV-4,部分毒株Hexon蛋白存在氨基酸突变。     

一株高致病性血清4型禽腺病毒的分离与鉴定

研究对临床上疑似禽腺病毒感染鸡病例进行了病毒分离与鉴定。通过对病鸡肝组织研磨液接种鸡胚、电镜观察、PCR及序列鉴定,分离出一株血清4型禽腺病毒,命名为JH。动物回归试验证明,肌肉接种1 000 EID_(50)病毒量对3周龄SPF鸡的致死率高达90%;病死鸡剖解可见典型的心包积液与包涵体肝炎,肝组织切片HE染色可见典型的嗜碱性核内包涵体。这一高致病性血清4型禽腺病毒的分离报道,为探究国内禽腺病毒分子流行与毒力演变提供基础材料。     

禽腺病毒血清4型吉林株的分离鉴定与遗传变异分析

对吉林地区送检的疑似禽腺病毒感染样品进行了分子流行病学调查,并对检测为阳性的样品进行病毒分离鉴定,共得到61个I型禽腺病毒流行毒株。对hexon基因进行的PCR扩增,获得长度为1 414,1 786,1 670bp的基因片段。通过测序分析发现,吉林地区禽腺病毒流行毒株基因型由B型变化为C型,血清型4型。根据同源性分析结果显示,本次获得的3个分离株与禽腺病毒4型标准毒株ON1株的核苷酸序列相似性较高,达到了99.1%。     

血清4型禽腺病毒广西分离株单克隆抗体的制备及鉴定

为制备血清4型禽腺病毒(FAdV-4)广西分离株(FAdV-4-GX2018-005)的特异性单克隆抗体,将FAdV-4-GX2018-005作为免疫原免疫BALB/c小鼠后,取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,利用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株。利用阳性杂交瘤细胞株制备腹水并纯化得到单克隆抗体,利用ELISA和IFA鉴定单克隆抗体的特异性。结果表明,成功获得3株单克隆细胞株3A3、13A11和4D5。3株杂交瘤细胞株分泌的抗体,能与FAdV-4产生特异性反应,与其他血清型禽腺病毒(FAdV-1、FAdV-2、FAdV-3、FAdV-5、FAdV-6、FAdV-7、FAdV-8a、FAdV-8b、FAdV-9、FAdV-10和FAdV-11)不发生反应。本研究成功制备FAdV-4广西分离株单克隆抗体,为FAdV-4检测方法的建立奠定了良好基础。