运用RT-PCR／酶切技术快速检测猎传染性胃肠炎病毒

猪传染性胃肠炎（TGE）是由猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）引起的猪的一种急性高度接触性传染病,临床特征为严重腹泻、呕吐和脱水,不同年龄和品种的猪都易感,1513龄以内的仔猪病死率很高,尤其是10龄以内的仔猪死亡率可达100％。本试验的目的在于建立快速检测TGEV的RT—PCR／酶切方法,为该病的诊断、检测和流行病学调查研究提供更为敏感和可靠的手段。     

RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒的研究

根据GenBank发表的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)纤突蛋白S基因的5′端核酸序列设计了1对引物。该对引物扩增的目的片段长度为690bp。在优化RT-PCR反应条件的基础上,建立了TGEV的RT-PCR检测方法。     

RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒方法的建立

猪传染性胃肠炎 ( TGE)是一种以严重腹泻、呕吐和脱水为临床特征的高度接触性传染病 ,属于国际兽疫局 ( OIE)法典中 B类疫病必检的猪传染病。TGEV是一种有囊膜的正链 RNA冠状病毒。目前检测 TGEV的方法主要有中和试验、免疫荧光抗体试验、酶联免疫吸附试验和电镜技术 ,这些方法对于检测 TGEV和防制 TGE起到了重要作用 ,但也存在特异性不强、灵敏性差、耗时长等缺点。c DNA探针、RT- PCR近年来已成为国际上用于检测病原微生物的主要方法。由于 c DNA探针与临床样品中非相关核酸有一定的非特异性结合 ,尤其是检测粪便、尿液等…     

猪传染性胃肠炎病毒RT-PCR检测方法的建立

根据GenBank上发表的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)基因序列,针对TGEV N基因全序列设计合成了一对引物,以TGEV疫苗株为模板,建立了检测TGEV的RT-PCR方法.应用该方法对TGEV疫苗株RNA进行扩增,获得与预期大小相符,长度为1 168 bp的特异性目的片段;测序结果与已报道的TGEV不同毒株序列的同源性为95%～97%;敏感性测定结果为可扩增到18 pg的TGEV N基因cDNA.结果表明,建立的RT-PCR方法对TGEV的检测敏感性高、特异性强,可用于TGEV感染的诊断和流行病学调查.     

应用RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒的研究

根据GenBank已发表的猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)N蛋白的基因序列,设计合成1对引物,扩增片段长度为730 bp,在优化RT-PCR反应条件的基础上,建立了检测TGEV的RT-PCR检测方法,并用该方法对疑似TGEV的猪群临床腹泻疾病进行了诊断检测和分析。本研究建立的TGEV检测方法,特异、灵敏、可靠,为该病的诊断和流行病学调查研究提供了技术保障。     

RT-PCR方法快速诊断猪传染性胃肠炎

根据猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）标准毒株（Purdue-115）的ORF6（N基因）的基因序列，设计俣成了一对引物Li01/Li02用反转录聚俣酶链反应（RT－PCR）技术对发病猪的粪便进行检测。结果得到与预期大小相一致的约1174bp(N基因）的PCR产物，与从参照毒株TGEV TH－98扩增出的片段大小相一致。进一步用限制性内切酶进行分析，发现从发病猪火花名扩增出的N基因与参照毒株TH－98株具有相同的限制性内切酶图谱，从而证实本病例致病病毒为TGEV。     

检测猪传染性胃肠炎病毒RT-PCR的建立及应用

根据GenBank上猪传染性胃肠炎病毒S基因的保守序列,设计1对引物,建立了检测猪群中的猪传染性胃肠炎病毒的RT-PCR方法.试验结果表明,该RT-PCR方法敏感、特异,适于临床样品检测,为猪传染性胃肠炎病毒的临床诊断和流行病学调查奠定了基础.     

多重RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒

为了检测、区分猪传染性胃肠炎(TGE)和猪流行性腹泻(PED)，建立了同时检测这2种疾病痛原体的多重PCR方法。参考GenBank登录的TGEV和PEDV纤突蛋白S基因序列，经DNAsis 2．0比较分析。分别筛选出TGEV、PEDVS基因相对保守区。以TGEV TH-98株(GenBank登陆号为AF494337)和PEDV CV777株(GenBank登陆号为NC003436)为参考模板，利用软件Primer3设计合成了2对寡核苷酸引物，以ST细胞培养的TGEV和PEDV毒株核酸为模板。利用所设计的2对引物进行多重RT-PCR扩增，结果同时得到与试验设计相符的499bp(TGEV)和199bp(PEDV)的扩增条带。而对其他3种猪病原的扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明。建立的多重RT-PCR方法可检测出10pgTGEV RNA和100pg PEDV RNA。     

猪传染性胃肠炎病毒RT-PCR检测方法的建立和应用

根据GenBank上发表的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)基因序列,针对TGEVN基因全序列设计合成了一对引物,以TGEV疫苗株为模板,建立了检测TGEV的RT-PCR方法。应用该方法对TGEV疫苗株RNA进行扩增,获得与预期大小相符,长度为1168bp的特异性目的片段;测序结果与已报道的TGEV不同毒株的序列同源性达到95%～97%;敏感性测定该RT-PCR可扩增到18pg的TGEV-N-cDNA;对猪传染性胃肠炎(TGE)的病料进行RT-PCR鉴定,可检测出TGEVN基因片段。结果表明建立的RT-PCR方法对TGEV的检测敏感性高、特异性强,可用于TGEV感染的诊断和流行病学调查。     

猪传染性胃肠炎病毒分子生物学检测技术研究进展

猪传染性胃肠炎病毒（porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV）是兽医临床常见的病原体。近年来,其检测技术取得了迅速发展,作者对TGEV分子生物学检测技术进行了综述,并对其检测新策略进行了展望。     

仔猪传染性胃肠炎的PCR检测及组织病理学观察

对江苏某养殖场送检的3只病死腹泻仔猪进行临床观察、病理组织学观察,并结合病原学检测结果对患猪腹泻原因进行了分析。结果显示,剖检病死仔猪病变主要在胃和小肠,胃内有凝乳块,胃底部黏膜充血,小肠臌气,肠壁变薄。组织病理学变化主要为12指肠卡他性炎症,空肠肠绒毛显著萎缩,肠绒毛上皮变为扁平上皮且发生空泡变性,肠黏膜层局部坏死脱落,黏膜下层白细胞浸润;胃黏膜上皮变性、坏死脱落,固有层及黏膜下层充血及大量淋巴细胞浸润,局部胃黏膜层完全坏死,甚至形成溃疡;用针对K88、K99、987P、F41的单抗对分离到的大肠杆菌通过玻板凝集试验进行检测,结果显示为阴性。PCR检测结果为猪传染性胃肠炎病毒阳性。     

猪传染性胃肠炎与流行性腹泻病毒二重RT-PCR 检测方法的建立及应用

为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)与流行性腹泻病毒(PEDV)的快速鉴别诊断方法,本研究根据GenBank已登录的TGEV核蛋白(N)基因和PEDV膜蛋白(M)基因保守区域序列分别设计了1对特异性引物,以TGEV和PEDV混合总RNA为反转录模板,建立了TGEV和PEDV的二重RT-PCR检测方法,并进行了特异性、敏感性和重复性试验;利用所建立的检测方法对临床疑似样品进行了应用检测,并对检测到的阳性样品进行克隆测序。结果表明,成功建立了TGEV和PEDV二重RT-PCR检测方法,该方法的检测灵敏度最低极限为10 TCID₅₀/mL病毒含量,重复性好,特异性强,可特异性地扩增TGEV和PEDV细胞培养物,但对ST细胞和其他7种病原对照扩增不出任何条带;对22份临床疑似TGEV和PEDV感染样品检测结果与测序结果完全一致。本研究成功建立了TGEV与PEDV二重RT-PCR检测方法,可适用于猪传染性胃肠炎和流行性腹泻病的快速鉴别诊断。     

猪传染性胃肠炎疫苗研究进展

猪传染性胃肠炎是由猪传染性胃肠炎病毒引起的一种急性、高度接触性肠道传染病,不同年龄和品种的猪均可感染,严重危害着全世界养猪业的健康发展.疫苗接种是防控本病的关键措施之一.常规疫苗在防控猪传染性胃肠炎中发挥了巨大的作用,但在某种程度上存在不可避免的缺陷,对根除和消灭传染病带来了严重困难.随着分子生物学技术的不断发展,基因...     

猪传染性胃肠炎病毒与猪呼吸道冠状病毒荧光RT-PCR鉴别检测方法建立与应用

本研究根据Genbank登录的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因和S基因保守区序列设计合成了两对引物和探针,通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR快速检测TGEV的方法。该方法能有效地鉴别序列密切相关的猪传染性胃肠炎病毒与呼吸道冠状病毒。与常规RT-PCR试验比较表明,所建立的荧光RT-PCR检测技术快速、敏感,检测时限3个小时以内,具有很好的特异性和重复性。通过对39份临床样品进行检测,结果表明所建立的检测方法直接检测样品中猪传染性胃肠炎病毒。     

猪传染性胃肠炎病毒的分离与鉴定

将经胶体金试纸条和RT-PCR鉴定为猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)阳性的内蒙古某猪场的粪便样品,经ST细胞分离培养后,得到一株能产生明显细胞病变的毒株。纯净性检测结果显示,该毒株无细菌生长,无支原体及无外源病毒污染。特异性检测结果表明:该分离株能被TGEV特异性阳性血清中和,且能被TGEV FA荧光抗体识别。采用TGEV N基因特异性引物,经RT-PCR可扩增出1215 bp特异性片段,将该片段测序后与GenBank中已发表的13株TGEV N基因的序列进行同源性比较,同源性为98.1%~100%,其中与我国分离的H16、JS2012以及Miller M6毒株同源性关系最近,均为100%。结果表明,分离到的毒株为TGEV,命名为TGEV NMG株。     

春季猪传染性胃肠炎的防治

猪传染性胃肠炎是由猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）引起的猪一种急性、高度接触性胃肠道传染病,其主要临床症状为呕吐、严重腹泻和脱水。不同年龄和品种的猪对本病均易感,其中2周龄以内的仔猪最易感,死亡率可达100％。该病在冬春季节多发,对养猪业的危害较大,所以在冬春季要加强猪传染性胃肠炎的防治。     

猪传染性胃肠炎诊断技术研究进展

猪传染性胃肠炎是一种由冠状病毒引起的以仔猪呕吐、腹泻和脱水为特征的传染病,对养猪业造成了巨大的损失。为此,众多学者对该病的诊断与检测方法进行了大量的研究,建立了,临床诊断、病原分离等传统诊断方法,以及大量的免疫学、分子生物学诊断方法等。研究猪传染性胃肠炎的诊断与检测方法对防控该病的暴发和传播有重要意义。