天蚕、柞蚕线粒体DNA（mtDNA）的限制性酶切电泳图谱

采用差速离心和碱变性法，以９种限制性内切核酸酶对天蚕和柞蚕ｍｔＤＮＡ进行了单酶切分析，发现这两种蚕的ｍｔＤＮＡ在分子长度和酶切类型上存在明显差异。还对天蚕、柞蚕、蓖麻蚕和家蚕的ｍｔＤ－ＮＡ限制性酶切电泳图谱进行了比较研究。     

天蚕、柞蚕线粒体DNA（mtDNA）的限制性酶切电泳图谱

采用差速离心和碱变性法，以９种限制性内切核酸酶对天蚕和柞蚕ｍｔＤＮＡ进行了单酶切分析，发现这两种蚕的ｍｔＤＮＡ在分子长度和酶切类型上存在明显差异。还对天蚕、柞蚕、蓖麻蚕和家蚕的ｍｔＤ－ＮＡ限制性酶切电泳图谱进行了比较研究。     

几种鸟类mtDNA限制性酶切图谱的比较研究

本文用５种限制内切酶（ＨｉｎｄⅢ，ＢｇＬＩ，ＰｓｔＩ和ＢａｍＨＩ）初步建立了头鹅、白鹅、火鸡和鹌鹑的肝脏线粒体ＤＮＡ的内切酶图谱。结果表明白鹅和狮头鹅的ｍｔＤＮＡ的酶切图谱极为相似。山鸡、火鸡和鹌鹑的ｍｔＤＮＡ限制性性内切酶图谱之间的差异是很大的，以上事实说明驯化中的鹅类的不同品种间ｍｔＤＮＡ差异不在。而鸡形目中的不同物种间的ｍｔＤＮＡ是有很大的差异的。     

四川白鹅郎德鹅及杂交后代线粒体DNA多态研究

采用ＲＦＬＰ技术 ,对四川白鹅和郎德鹅及其杂交后代进行了线粒体ＤＮＡ多态分析。在所使用的１９种限制性内切酶中 ,有４个酶检测出多态 ,共获得两种ｍｔＤＮＡ单倍型 ,四川白鹅和以四川白鹅为母本杂交后代的ｍｔＤＮＡ为Ⅰ型 ,郎德鹅的ｍｔＤＮＡ为Ⅱ型。以上结果为中国鹅和欧洲鹅存在两种不同起源学说提供了分子遗传学的证据。ＥｃｏＲＶ、ＨａｅⅡ、ＨｉｕｃⅡ和ＫｐｎⅠ四种限制性内切酶的两种限制性态型可以作为鉴别两种不同起源家鹅的母系分子遗传标记。线粒体ＤＮＡ在家鹅中也遵循严格的母系遗传。（摘自《畜牧兽医学报》１９９８，…     

福建黄兔线粒体DNA的限制性内切酶分析

本文用差速离心法分离福建黄兔线粒体，氯化铯超速离心法纯化线粒体ＤＮＡ。对纯化的ｍｔＤＮＡ用ＢａｇＩＩ，ＢａｍＨＩ，ＣｌａＩ，ＥｃｏＲＩ，ＥｃｏＲＶ，ＭｌｕＩ，ＰｓｔＩ，ＰｖｕＩ，ＳａｃＩ等９种限制性内切酶进行酶切分析。共识别了１７个酶切位点。经测算福建黄兔ｍｔＤＮＡ的分子量约为１８．４５Ｋｂ。     

藏绵羊线粒体DNA遗传多样性研究

本文用ＡｐａＩ,ＡｖａⅡ,ＢａｍＨＩ,ＢｃｌⅡ,ＣｌａＩ,ＥｃｏＲⅤ,ＨｉｎｄⅢ,ＨｐａＩ,ＫｐｎＩ,ＰｓｔＩ,ＰｖｕⅡ,ＸｂａＩ,ＸｈｏＩ等１４种内切酶,分析了１２头藏绵羊ｍｔＤＮＡ的限制性片断长度多态性,共检测了３５个酶切位点,发现ＡｖａⅡ,ＣｌａＩ,ＰｖｕⅡ三种酶切类型具有多态性,根据不同个体的ｍｔＤＮＡ的酶切类型,发现藏绵羊存在三种ｍｔＤＮＡ单倍型,计算ｍｔＤＮＡ多态度π值为０．００１２,     

四川白鹅朗德鹅及杂交后代线粒体DNA多态研究

采用ＲＦＬＰ技术，对四川白鹅和朗德鹅及其杂交后代进行了线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）多态分析，在所使用的１９种限制性内切酶中，有４个酶（ＥｃｏＲＶ，ＨａｅⅡ，ＨｉｎｃⅡ和ＫｐｎＩ）检测出多态，共获得两种ｍｔＤＮＡ单倍型，四川白鹅和以四川白鹅为母本杂交后代ｍｔＤＮＡ为Ｉ型，朗德鹅的ｍｔＤＮＡ为Ⅱ型，以上结果为中国鹅和欧洲鹅存在两种不同起源学说提供了分子遗传学的证据，ＥｃｏＲＶ，ＨａｅⅡ，ＨｉｎｃⅡ和Ｋｐ     

实验兔线粒体DNA多态性研究

用ＥＣＯＲＩ，ＥＣＯＲＶ，ＢａｍＨＩ，ＨｉｎｄⅢ，ＰｔｕＩ，ＳｍａＩ，Ｘｂｏｌ，ＣｌａＩ，ＳａｃＩ，ＢｇｌⅡ等１１种酶，用ｍｔＤＮＡ限制性内切酶片段长度多态性（ＲＦＬＰ）技术，分析了国内几个省区的实验用兔ｍｋＤＮＡ多态性。结果表明，在研究的６４个个体中，共检出１５种限制性态型，归结为４种不同的限制性类型，限制性类型的差异主要来源于少数几个限制 位点的偶然突变，提示这些免疫ｍｔＤＮＡ变异度很低，遗传     

大肠杆菌耐热性肠毒素ST1—LacZ融合基因的构建

利用含大肠杆菌耐热性肠毒素ＳＴ１基因的质粒ｐＢＳＴ２－６和含ＬａｃＺ基因（编码β－半乳糖苷酶）的载体ＰＵＣ１８，构建成ＳＴ１－ＬＡＣＺ融合基因。将质粒ｐＢＳＴ２－６用限制性内切酶ＢａｍＨＩ和ＢｇＩＩＩ消化、碱性磷酸酶处理，最后将处理好的ＰＵＣ１８ ＤＮＡ与１４７ ｂｐＳＴ１ ＤＮＡ通过Ｔ４ＤＮＡ连接酶进行粘性末端连接，转化不受体菌ＤＨ５Ａ中。通过菌落原位杂交筛选，共筛选出５３个为ＳＴ１基因探针杂交     

鸡贫血病毒DNA的PCR扩增及其分子克隆

用ＰＣＲ方法扩增了国内分离的鸡贫血病毒（ＣＡＶ）ＳＪ１株的含ＶＰ２、ＶＰ３以及部分ＶＰ１的１５００ｂｐＤＮＡ片段。经限制性内切酶酶切分析，该片段与Ｃｕｘ－１株的酶谱相似。同时，以ｐＵＣ１１９质粒载体克隆了这一ＤＮＡ片段。     

伊氏锥虫和布氏锥虫动基体DNA酶切电泳比较

限制性内切酶ＭｂｏＩ，ＤｄｅＩ，Ｈｉｎｆｉ和ＴａｑＩ对布氏锥虫ＫＤＮＡ进行酶切后，电泳中均显示出多条ＤＮＡ区带，其总Ｋｂ数约等于２０ｋｂ，而各限制酶对伊氏锥虫ＫＮＤＡ消化后均显示出１至２条区带，总和约１ｋｂ明显区别于布氏锥虫。     

适于家蚕AFLP标记的酶切反应系统

ＡＦＬＰ作为一种新的分子标记技术，其成功的关键依赖于ＤＮＡ的酶解效果，本文使用ＰｓｔＩ、ＴａｑＩ两种限制性内切酶，选用不同的酶切方式与不同的反应离子的组合对家蚕ＢＣ１代基因组ＤＮＡ进行酶切、通过人工接头连接、二次扩增及ＰＡＧＥ电泳、银染检测，结果显示是两酶在２５ｍＭＴｒｉｓ－Ａｃｅｔａｔｅ（ＰＨ７．８）、１００ｍＭＫＡｃ、１０ｍＭＭＧＡｃ２、１ｍＭＤＴＴ反应系统中能得到多态性丰富、重复性好的ＤＮＡ指纹图谱。同时，表明寻求适宜的限制酶缓冲组分是十分重要的。     

大肠杆菌耐热性肠毒素Ⅰ融合基因构建及其免疫原性研究

用限制性核酸内切酶ＢａｍＨＩ和Ｂｇ１Ⅱ双酶切质粒ＰＢＳＴ２－６，获得地大肠杆菌耐热性肠素素Ⅰ基因，再将含ＬａｃＺ基因的载体ＰＵＣ１８用ＢａｍＨＩ酶切，碱性磷酸酶处理，然后后ＳＴ１基因通过Ｔ４ＤＮＡ连接 酶连接，转化至受体菌ＤＨ５α中。     

五个畜种和一个鱼种的多位点DNA指纹,RAPD-标记的研究和线粒体DNA(mtDNA)的限制性分析

五个畜种和一个鱼种的多位点ＤＮＡ指纹，ＲＡＰＤ－标记的研究和线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）的限制性分析（博士论文摘要）陈宏导师：Ｐｒｏｆ．Ｄｒ．Ｆ．Ｌｅｉｂｅｎｇｕｔｈ利用３种分子方法，（１）多位点ＤＮＡ指纹通过地高新（ｄｉｇｏｘｉｇｉｎａｔｅ）标...     

蜜蜂线粒体DNA碱变性提取法

一、前言线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）已被广泛应用于动植物群体遗传学和进化生物学的研究中，并为分子系统学提供了有价值的比较生物学的数据，取得了许多非常有意义的结果。有效的ｍｔＤＮＡ提取方法，无疑是开展这方面研究的前提。而ｍｔＤＮＡ提取实验成功的标志是把染色体ＤＮＡ（即核ＤＮＡ）、蛋白质与ＲＮＡ尽量去除干净，从而获得一定得率和纯度的ｍｔＤＮＡ，以满足ｍｔＤＮＡ用于限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析中的酶切及聚合酶链式反应（ＰＣＲ）中酶切、拷贝和连接的需要。本试验用碱变性提取法，ＣｓＣｌ超速离心法和蛋…     

几种分子生物学技术在兽医领域中的应用

第二讲限制性内切酶分析及其应用１限制性内切酶限制性内切酶（ｒｅｓｔｒｉｔｉｏｎｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅｓ，ＲＥ，即限制性核酸内切酶）是一类能将双股ＤＮＡ分子从内切断的水解酶，故得此名。每种内切酶能识别ＤＮＡ分子中由４～６个核苷酸组成的特定序列。ＲＥ主...     

人肿瘤坏死因子α逆转录病毒表达载体的构建

应用ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔｌｌｋｓ质粒构建了含人肿瘤坏死因子－α　ｃＤＮＡ的过渡性载体ｐＢＴ１和ｐＢＴ２。用限制性内切酶ＢａｍＨＩ与ＥｃｏＲＶ消化ｐＢＴ１ＤＮＡ，分离出了ＴＮＦ－α　ｃＤＮＡ基因片段，并在其平末端加入了ＢａｍＨＩ接头。进而将带有ＢａｍＨＩ粘性末端的ＴＮＦ－αｃＤＮＡ克隆到了逆转录病毒载体ｐＺＩＰＮｅｏＳＶ（Ｘ）１５′－端长末端重复序列（ＬＴＲ）下游的ＢａｍＨＩ切点上，构建了重组质粒ｐＺＩＰＴＮＦ。该重组质粒经琼脂糖凝胶电泳，限制性内切酶消化和核酸杂交鉴定分析，证明ｐＺＩＰＮｅｏＳＶ（Ｘ）１中插入了ＴＮＦ－α　ｃＤＮＡ，并且方向正确。本研究为应用重组逆转录病毒介导ＴＮＦ－α基因转移与治疗奠定了基础。     

天蚕和柞蚕核多角体病毒DNA限制性内切酶酶解图谱的比较试验

天蚕和柞蚕核多角体病毒ＤＮＡ限制性内切酶酶解图谱的比较试验张秀珍，张显博，孙芳义，邹碧珍，齐云翔，李鹤（黑龙江省蚕业研究所）（黑龙江省应用微生物研究所）用酚法提取天蚕和柞蚕ＮＰＶ－ＤＮＡ，并用限性内切酶ＥｃｏＲⅠ水解两种蚕的ＮＰＶ－ＤＮＡ，其酶切图谱...     

大肠杆菌耐热性肠毒素Ⅰ融合基因的构建及其免疫原性研究

用限制性核酸内切酶ＢａｍＨＩ和Ｂｇ１Ⅱ双酶切质粒ｐＢＳＴ２－６，获得了大肠杆菌耐热性肠毒素Ⅰ（ＳＴ１）基因，再将含ＬａｃＺ基因（编码β－半乳糖苷酶）的载体ｐＵＣ１８用ＢａｍＨＩ酶切、碱性磷酸酶处理，然后与ＳＴ１基因通过Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接，转化至受体菌ＤＨ５α中。通过菌落原位杂交筛选，共筛选出５３个ＳＴ１基因探针杂交阳性的重组子，对其中一个重组子ＤＨ５α（ｐＸＳＴ１）进行限制性核酸内切酶酶切分析和核苷酸序列分析，证明重组质粒ｐＸＳＴ１含有２个正向串连在一起的ＳＴ１基因，而且融合在ＬａｃＺ基因的上游，具有正确的阅读框架。又ＤＨ５α（ｐＸＳＴ１）菌株能在含Ｘ－Ｇａｌ的ＬＢ平板上长成蓝色菌落，而且ＥＬＩＳＡ也检测到ＳＴ１融合蛋白，这表明该菌株能表达具有β－半乳糖苷酶活性的大肠杆菌ＳＴ１—β－半乳糖苷酶融合蛋白。免疫实验结果表明，重组菌株ＤＨ５α（ｐＸＳＴ１）安全无毒，表达的ＳＴ１融合蛋白能够诱发ＢＡＬＢ／ｃ鼠产生抗体，该抗体具有中和天然ＳＴ１肠毒素的毒性作用，这表明ＤＨ５α（ｐＸＴ１）可以作为预防幼畜腹泻的菌苗候选株。     

云南地方猪种线粒体DNA多态性研究

本文用ＡｐａⅠ、ＡｖａⅠ，ＢａｍＨⅠ，ＢｅｌⅠ，ＢｃｌⅠ，ＣｌａⅠ，ＤｒａⅠ，ＥⅠ，ＥｃｏＲⅤ，ＫｐｎⅠ，ＰｓｔⅠ，ＰｕｖⅡ，ＳａｌⅠ，ＳｍａⅠ，ＳｔｕⅠ，ＸｈｏⅠ等１８种限制性内切酶分析云南猪种的ｍｔＤＮＡ多态性。在全部１８头个体中只检出一种限制性类型，结果表明，云南猪种的ｍｔＤＮＡ变异度很低，遗传多样性贫乏，提示云南猪种起源于一个共同的祖先，在品种形成的早期可能受到创立者效应的制约。