应用Dot-PPA-ELISA检测猪布氏杆菌病抗体的研究

本试验以布氏杆菌SAT为对照试验,建立了Dot-PPA-ELISA检测猪布氏杆菌病抗体的方法,该法检测的猪IgG含量可达6.992×10     

奶牛乳清和血清中布氏杆菌抗体的检测

为探索动物布氏杆菌病自然感染与人工免疫的鉴别诊断方法,从免疫奶牛群采集血清和鲜乳,以半胱氨酸或2-巯基乙醇处理血清样本,以20%的胃蛋白酶消化分离乳清样本,用试管凝集试验检测布氏杆菌抗体,结果表明:血清和乳清样本的布氏杆菌抗体水平存在明显差异,血清抗体阳性率高迭61.7%(37/60),而乳清抗体阳性率仅为10.0%(6/60);乳清中布氏杆菌抗体效价比血清的低1～3个滴度.     

应用Dot PPA ELISA检测猪布氏杆菌病抗体的研究

本试验以布氏杆菌ＳＡＴ 为对照试验,建立了Ｄｏｔ ＰＰＡ ＥＬＩＳＡ 检测猪布氏杆菌病抗体的方法,该法检测的猪ＩｇＧ 含量可达６９９２×１０－ ９ｇ,灵敏性高,不同猪抗ＰＲＶ、ＰＰＶ、ＨＣＶ、ＪＥＶ、ＣＨＬ 等阳性血清发生交叉反应,特异性强;此外该法还具有操作简便、快捷不需特殊试验条件、结果客观、肉眼易于判断、反应膜片可长期保存等优点。适宜在广大基层单位应用,对布病的快速诊检有着十分重要的意义。     

布氏杆菌抗独特型抗体苗豚鼠免疫试验

用新研制的抗牛布氏杆菌独特型抗体苗(简称二抗苗)免疫豚鼠并于免疫后4个月进行强毒菌株攻击保护试验表明,3个不同免疫剂量组豚鼠平均保护率为79.1％,血清凝集试验结果表明,免疫豚鼠产生了一定滴度的凝集抗体,这证明该抗独特型抗体苗具有良好的免疫原性。     

酶联免疫吸附试验(ELISA)检测鹿布氏杆菌抗体的研究

通过对布氏杆菌脂多糖抗原、超声波破碎抗原和离心抗原进行筛选和优化，确定超声波破碎抗原为最佳抗原，首次建立了检测鹿布氏杆菌抗体的间接ELISA。对其特异性、敏感性和重复性进行试验，并与其他常规方法进行比较试验。结果表明：该方法的特异性强、敏感性高和重复性好，明显优于其他常规方法。     

布氏杆菌抗独特型抗体苗小白鼠免疫试验

用布氏杆菌抗独特型抗体苗(简称二抗苗)进行试验表明,免疫小白鼠酸性α-醋酸萘酯酶阳性T淋巴细胞(TANAE~+)数明显高于对照组(P<0.01),且比19号苗免疫组还高,证实此二抗苗确有增强细胞免疫功能的作用。     

布氏杆菌病的诊断与防控措施

布鲁氏菌病(俗称布病)是由布鲁氏杆菌引起的一种人畜共患传染病,家畜感染布鲁氏杆菌后可以降低生产性能,引起母畜流产,导致种畜出现繁殖障碍,畜产品质量安全受到影响,给养殖业带来很大的经济损失。据统计,世界上已经有170多个国家和地区发生过该病,流行范围很广,而且每年因为布病造成的损失高达数十亿美元。到目前为止,还没有有效的措施来控制和消灭布病,因此做好布病的早期诊断和预防措施非常重要。笔者根据多年的工作经验,详细分析了该病的诊断方法,并提出了有效的防控措施,以供养殖户参考。     

牛布氏杆菌病检疫及防治措施

本文主要是对牛布氏杆菌病的病原流行特点、临床特征、检疫方法和综合防治的措施进行分析,有利于减少该病对养牛业和人类健康的不利影响,进一步促进畜牧养殖业的可持续发展。     

布鲁氏菌S19疫苗免疫奶牛血清凝集抗体的动态变化与水解素皮肤变态反应相关分析

观察奶牛在布鲁氏菌S19疫苗免疫状态下血清凝集抗体的动态变化规律和免疫后奶牛对布鲁氏菌水解素的皮肤迟发性变态反应差异,并探索两者的相关性,寻找选择布鲁氏菌病抗性牛的方法。选择布病阴性的性成熟青年黑白花奶牛50头,注射S19疫苗1×109CFU/头,定期采集血液测抗体水平,第60天用布鲁氏菌水解素皮内注射,检测变态反应。结果显示,所有免疫牛均能在15天时检测到凝集抗体,30天达到峰值。迟发性变态反应表明,免疫牛对布鲁氏菌水解素具有良好的敏感性,变态反应强度与抗体峰值水平存在相关性,但差异不显著,相关系数为0.235。     

利用羊抗鸡抗体检测鹅血浆中的抗体水平

利用商品供应的山羊抗鸡抗体ELISA检测鹅血液中抗体水平的可行性.在相同条件下,以羊抗鸡抗体作为第2抗体,在ELISA分析中检测利用同一抗原免疫后鸡和鹅血浆样品中抗体水平.经过相同倍数梯度稀释的鸡和鹅血浆样品中,所测到的鹅血样的D450 nm值曲线在处理组和对照组均与鸡的D450 nm值曲线变化趋势相同,只是随血样的稀释倍数上升,鹅血样D450 nm值的下降速度较慢.结果表明只要反应条件适当,抗鸡抗体可以作为第2抗体用于ELISA检测鹅血液中的抗体.通过抗原/血浆浓度梯度交叉试验,ELISA中抗原的最适包被质量浓度为100 μg/mL(150 μL/孔),血样最佳稀释比为1:12 800.ELISA测定所得鹅免疫试验中的抗体变化与理论预计结果一致,与在鸡上的变化也类似.     

布鲁氏杆菌LPS抗原制备及其免疫原性测定

采用热酚水法提取布鲁氏杆菌脂多糖,分离、纯化并SDS-PAGE银染鉴定。纯化的细菌内毒素免疫小鼠,通过斑点ELISA测定血清抗体效价,检测细菌内毒素免疫原性。采用热酚法能获得较高纯度的细菌内毒素,其免疫原性较高,斑点ELISA测血清效价达到1∶1 000 000,与全菌免疫原性接近。本研究为制备布鲁氏杆菌单克隆抗体和建立布鲁氏杆菌病快速诊断方法奠定研究基础。     

猪型布鲁氏菌rBLS重组蛋白的纯化与抗体制备

以猪型布鲁氏菌的BLS分子作为研究对象,通过重组蛋白质的纯化以及多克隆抗体的制备,研究了重组rBLS分子的免疫原性。结果表明：布鲁氏菌BLS分子具有较好的抗原性质,可以刺激家兔产生相应的抗体。     

牛布鲁氏菌毒力基因Virb8间接ELISA检测方法的建立与应用

【目的】布鲁氏菌virb8蛋白是布鲁氏菌的重要毒力因子,本研究拟构建含布鲁氏菌Virb8基因的原核表达载体,利用纯化蛋白作为包被抗原,建立检测牛布鲁氏菌血清抗体的间接ELISA方法（iELISA）。【方法】根据GenBank中的牛型布鲁氏杆菌Virb8序列,设计一对引物,以布鲁氏菌疫苗株S2全基因组DNA为模板扩增Virb8的基因,将目的基因克隆入PEASY-T3,经测序正确后,与载体pET-32a(+)连接,构建重组表达质粒pET-32a-Virb8,转化E.coli BL21(DE3),诱导表达融合蛋白pET-32a-Virb8,经SDS-PAGE及Western-blot分析鉴定后,采用Ni-NTA Spin Kit纯化目的蛋白,利用所建立的iELISA方法对235个临床奶牛血清样本进行检测,并与虎红平板凝集实验进行比较。【结果】成功构建了含Virb8的表达载体,经多次对表达条件的优化,大量表达了目的蛋白,建立的iELISA方法具有稳定、灵敏的特点,与虎红平板凝集试验的符合率可达97.02%。【结论】所建立的iELISA方法是一种有效的牛布鲁氏菌病血清学诊断的方法,为进一步研究其免疫原性和抗感染保护作用奠定了基础。     

鳗弧菌单克隆抗体-胶体金检测方法的建立

以灭活鳗弧菌(SMW5)全菌为抗原,应用杂交瘤技术,制备了鳗弧菌单克隆抗体3株,分别命名为1H9、1C12、6F8,细胞亚类分别为IgG2a、IgM、IgG2b,其中1H9腹水效价为1∶6.4×105。制备鳗弧菌(SMW5)兔多克隆抗体,效价为1∶3.2×105。应用纳米胶体金颗粒标记单克隆抗体1H9并制备金标垫,抗鳗弧菌(SMW5)兔多克隆抗体与羊抗鼠抗体作为捕获抗体包被硝酸纤维素膜,分别作为检测线T和质控线C,建立鳗弧菌的胶体金免疫层析快速检测方法。经过对试纸条的特异性和灵敏度测定,结果表明:试纸条与嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、豚鼠气单胞菌、创伤弧菌、副溶血弧菌、副溶藻弧菌、迟缓爱德华氏菌,7种水产常见病原菌没有交叉反应,与鳗弧菌特异性反应,检测灵敏度为6.3×104cfu·mL~(-1),检测所需时间低于10min。所制备的鳗弧菌胶体金免疫层析检测试纸条具有快速、简便、特异性高和适应基层生产推广应用等优点。     

利用单克隆抗体检测呋喃妥因代谢物海特因方法的研究

[目的]建立敏感、快速、特异的呋喃妥因代谢物海特因的检测方法.[方法]通过将间羧基苯甲醛和海特因的衍生物接种到牛血清白蛋白上免疫Balb/C小鼠,应用杂交瘤技术制备单克隆抗体,采用ELISA检测海特因的邻硝基苯甲醛衍生物.[结果]采用ELISA检测海特因的邻硝基苯甲醛衍生物,灵敏度达到0.1 ng/ml.制备的单克隆抗体具有特异性高、灵敏的优点.[结论]该研究可为酶联免疫试剂盒的研制奠定基础.     

抗犬瘟热病毒荧光标记单抗的制备和初步鉴定

1材料与方法 1．1材料 1．1．1病毒与细胞。犬瘟热病毒（CDV）、狂犬病毒（RV）、犬细小病毒（CPV）、犬副流感病毒（CPIV）、犬腺病毒（CAV）,非洲绿猴肾细胞（Vero）、犬肾细胞（MDCK）、猫肾细胞（F81）,犬瘟热病毒单克隆抗体CE3由军事医学科学院军事兽医研究所犬病研究中心提供。