利用ELISA双抗体夹心法检测血浆蛋白粉中IgG相对活性的研究

母乳中的免疫球蛋白具有帮助乳猪抵抗,腹泻等疾病的能力。血浆蛋白粉除为乳猪提供均衡的蛋白质营养外,还含有大量的免疫球蛋白以及其他活性成分以提高乳猪的免疫力、提高乳猪的生长能力。免疲球蛋白的活性依赖于其天然结构的保持,结构变性就丧失活性。本研究以3,000头猪新鲜血浆混合样为标准样,利用ELISA双抗体夹心法对血浆蛋白粉中的免疫球蛋白IgG的相对活性进行检测。研究结果表明,该方法可有效评估经喷雾干燥处理以后血浆蛋白粉中IgG的活性保持情况,从而推断出血浆蛋白粉的核心质量。方法稳定、测试结果可靠,可作为血浆蛋白粉的核心成分免疫球蛋白IgG活性检测的手段。     

应用高效液相色谱法分离纯化小鼠腹水单克隆IgG抗体

应用凝胶渗透高效液相色谱法(GP—HPLC)分离纯化了4个小鼠腹水单克隆抗体IgG。经聚丙烯酰胺凝胶电泳、双向免疫扩散试验及ELISA等方法证实,从各样品中分离出的具有相似保留值的第二峰(RT.9.53～10.04min)是纯度较高的IgG抗体,并且有单克隆抗体活性。本方法具有传统方法所不及的简便、省时及高分辨率等优点,可能成为IgG分离纯化的一个新的手段。     

UPLC-MS/MS法测定猪尿中β2-受体激动剂的基质效应研究

为探讨猪尿中β2-受体激动剂UPLC-MS/MS检测的基质效应及消除方法,将猪尿液样品经高氯酸酸解,乙酸乙酯和甲基叔丁基醚混合提取后,用MCX固相萃取柱净化,进行超高效液相色谱-串联质谱法检测.发现猪尿液中8种β2-受体激动剂UPLC-MS/MS检测的基质效应为71.0％～114.5％,并比较基质添加标准曲线以及内标法两种定量方法,对基质效应进行消除研究.结果表明,5.0 mL猪尿液在0.4、1.0、2.0 ng/mL添加浓度下,内标法的定量结果为64.7％～136.0％.基质添加校正曲线的定量结果为77.9 ％～117.9％.基质添加校正曲线定量更加稳定,可以取代内标法进行定量.     

HPLC法测定猪体内双氯芬酸的血药浓度

建立猪血浆中双氯芬酸含量的HPLC测定法。猪血浆中双氯芬酸采用正己烷-异丙醇混合溶液(90∶10,V/V)提取,HPLC紫外检测器检测。色谱柱为C18柱,流动相为甲醇-15g/L乙酸水溶液(80∶20,V/V),测定波长为276nm。外标法定量。结果表明,血浆中杂质不干扰双氯芬酸的测定,双氯芬酸血药浓度在0.025μg/mL~20.0μg/mL范围内线性关系良好(R2=1),最低定量限为0.05μg/mL,高、中、低空白血浆添加样品浓度的日内变异系数和日间变异系数分别小于4%和6%,回收率为85%~97%。结果表明,该方法适用于猪血浆中双氯芬酸含量的测定,可用于含双氯芬酸钠的制剂在猪体内的药物代谢动力学和生物利用度研究。     

猪血浆IgG提取物对小白鼠免疫功能的影响

研究灌胃猪血浆IgG提取物对小白鼠免疫功能的影响。采用腹腔注射环磷酰胺制造试验小白鼠的免疫功能抑制模型,选用齐墩果酸为阳性对照组,猪血浆IgG提取物为试验组,预饲5d后,然后将猪血浆IgG提取物按每千克体重45、90和180mg3种剂量给小白鼠连续灌胃10d后测定小白鼠免疫水平的变化。小白鼠灌胃猪血浆IgG提取物后,对抗由环磷酰胺引起的小白鼠免疫器官萎缩有一定的保护作用,并对环磷酰胺所致动物DTH反应低下有一定的对抗作用;能显著增加小白鼠血清中IgG的含量和免疫球蛋白的含量(P<0.05),能显著增加小白鼠血清中球蛋白的含量(P<0.05),灌胃猪血浆IgG提取物能显著提高小白鼠的免疫功能。     

猪血浆蛋白粉中IgG含量的酶联免疫检测方法研究

猪血浆蛋白粉已经成为断奶仔猪理想和必需的蛋白饲料来源。评价血浆蛋白粉质量的重要指标就是其中IgG的含量。研究通过制备猪IgG单克隆抗体,调试优化后建立了相应的酶联免疫检测方法。该方法最低检测浓度为10μg/g,阴性血浆蛋白粉添加10(1%)、100(10%)、200mg/g(20%)猪IgG标准品后用本方法测定回收率为73.1%～104.6%,批内、批间变异系数小于15%,可基本满足血浆蛋白粉质量监控需要。     

高效液相色谱法测定猪血浆中阿莫西林含量

建立了高效液相色谱法测定猪血浆中阿莫西林含量的方法.采用Agillent1100HPLC系统,色谱柱为SB C18,流动相为0.05 mol/L磷酸二氢钾-0.1 mol/L三乙胺-乙腈(800:120:7,pH 2.5),流速1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长220 nm.猪血浆样品经高氯酸溶液变性处理,取上清液直接进样测定.阿莫西林的色谱峰面积对其浓度的线性关系范围在0.5～20.0μg/mL之间,相关系数为0.999 7.阿莫西林低、中、高(0.5,5.0,20.0μg/mL)三种添加浓度猪血浆样品的平均加样回收率分别为100.7%、105.1%、103.3%(n=3),变异系数分别为3.0%、0.1%、3.3%(n=3).该法可用于猪血浆中阿莫西林含量的测定和相关的药代动力学研究.     

实时荧光定量PCR法检测猪伪狂犬病毒灭活疫苗抗原含量的研究

本研究根据GenBank公布的猪伪狂犬病毒gB基因保守序列设计引物和TaqMan探针,采用实时荧光定量PCR方法检测猪伪狂犬病毒灭活疫苗的抗原含量,并对方法的特异性和敏感性进行验证。结果显示:该方法灵敏度可达10~2 TCID_(50)/mL,只对猪伪狂犬病毒有特异性扩增曲线,其他4种对照病毒均为阴性;检测猪伪狂犬病毒灭活疫苗样品,结果可以反映出疫苗样品中病毒抗原含量有差异。     

不同温度及浓度对猪血浆蛋白粉IgG含量的影响

猪血浆蛋白粉是经检疫的健康猪新鲜血液经分离、高温喷雾干燥而制成的高品质蛋白质饲料。产品具有适口性好、蛋白含量高、氨基酸平衡且利用率高等优点。尤其是保留了原血血浆中各种功能性免疫球蛋白和活性物质,能有效防止仔猪的肠道感染,降低免疫刺激,是防止仔猪断奶后生长停滞和下痢最有效的动物蛋白原料。文章重点研究血浆加热温度、加热时间及浓度对其中的免疫球蛋白IgG含量的影响。实验结果表明,血浆粉不同浓度、加热温度、加热时间对fgG含量具有显著地影响。     

乳及乳制品中牛乳铁蛋白含量测定方法比较研究

目的 探讨两种不同检测方法测定乳与乳制品中牛乳铁蛋白的含量及应用研究。方法 对比高效液相色谱（HPLC）法和超高效液相色谱串联质谱（UPLC- MS/MS）法测定生鲜乳、调制乳、超高温瞬时灭菌乳、含乳饮料和奶粉样品等乳及乳制品中牛乳铁蛋白的含量,并对测定结果进一步比较和分析原因。结果 两种测定方法均具有较高回收率和较优的重现性,但两者方法对实际样品的测定结果具有一定差异性。结论 HPLC法测定牛乳铁蛋白是通过肝素亲和柱纯化富集乳铁蛋白,测定的是非热变性牛乳铁蛋白的含量;而UPLC-MS/MS法测定的是热变性和非热变性牛乳铁蛋白的含量,不受热处理加工工艺的影响。实验室可针对不同检测目的选择不同方法进行定量研究。     

三种方法检测口蹄疫146S抗原含量及抗原稳定性的比较研究

为比较三种口蹄疫146S抗原含量检测方法,分别用蔗糖密度梯度离心结合安捷伦Cary 100紫外分光光度计定量法、蔗糖密度梯度离心结合安捷伦1260液相色谱仪定量法及高效液相体积排阻色谱法三种检测方法,对口蹄疫灭活抗原中的146S含量进行检测,对三种检测方法的数据进行统计分析。将口蹄疫A型抗原和O型抗原各一株分别4℃放置12个月以及反复多次冷冻处理;口蹄疫抗原用全能核酸酶处理,然后用蔗糖密度梯度离心结合安捷伦1260液相色谱仪定量法检测处理前后的146S抗原含量变化。结果显示,三种检测方法的检测数值相关性极显著,呈正相关性;4℃放置12个月后的抗原含量没有变化,而反复多次冷冻处理后的抗原含量降解非常多;全能核酸酶处理后的抗原杂蛋白含量少。研究表明,基于临床需求,蔗糖密度梯度离心结合安捷伦1260液相色谱仪定量法更适合口蹄疫抗原检测;口蹄疫抗原适合于4℃保存;全能核酸酶能有效去除杂蛋白干扰,提高色谱纯化效率。     

猪圆环病毒2型灭活疫苗中病毒抗原含量实时荧光定量PCR检测方法的建立

依据GenBank公布的猪圆环病毒2型Cap基因序列,在保守区域设计特异性引物和TaqMan探针,优化反应体系,建立评价猪圆环病毒2型灭活疫苗中病毒含量的实时荧光定量PCR检测方法,对方法的特异性、敏感性和重复性进行试验,并验证灭活剂用量和灭活时间对检测结果的影响。结果显示：该方法只对猪圆环病毒2型基因有特异性扩增,其他3种对照病毒基因的扩增结果均为阴性;检测灵敏度达到10^2.0 TCID₅₀/mL,比普通PCR方法高100倍;方法的重复性好,对同一样品进行10次检测,变异系数为2.28%;不同灭活剂用量和灭活时间对结果的影响较小,不会因各厂家使用的灭活剂用量和灭活时间不同,影响疫苗对比实验的公平性。该研究成功建立了一种评价猪圆环病毒2型灭活疫苗中病毒含量的实时荧光定量PCR检测方法,用于猪圆环病毒2型灭活疫苗样品中病毒抗原含量的定量,其结果可以反映不同猪圆环病毒2型灭活疫苗样品中抗原含量差异,为研究猪圆环病毒2型灭活疫苗病毒抗原含量评估方法提供了新的思路。     

猪RYR1基因三种PCR-RFLPs检测方法的比较

猪应激综合症是猪在应激因子 (如运输、转栏、高温、预防注射和配种等 )的作用下诱发的一种综合症 ,其发生主要是由于RYR1基因的点突变造成的。本研究对RYR1基因的三种PCR -RFLPs检测方法进行了比较 ,分别利用三种方法对 60头猪的检测结果证明 :三者具有相同的准确性。但是三引物法和四引物法较二引物法所需的时间更少 ,检测成本更低     

乳胶凝集试验快速检测副猪嗜血杆菌

利用原核表达并经过纯化的副猪嗜血杆菌TbpB N端蛋白及人工合成的特异性多肽制备单克隆抗体,经碳化二亚胺(EDC)将纯化后的单克隆抗体IgG与羧化乳胶共价偶联,并对偶联乳胶的IgG含量及偶联时间等条件进行合理选择,建立了快速检测副猪嗜血杆菌的乳胶凝集试验方法.利用LAT方法检测148株副猪嗜血杆菌疑似菌株,参考16 S rRNA-PCR方法的结果,符合率为83.1%,且致敏乳胶不与临床常见菌株发生凝集反应.结果表明,此检测方法具有操作简便、快速、特异性高的特点,便于在基层推广使用,为副猪嗜血杆菌的诊断和有效防治提供了参考和依据.     

牛初乳粉对凝固型酸奶质量的影响

本文主要研究了嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌在发酵过程中对牛初乳IgG活性的影响,结果表明添加冻干牛初乳粉的酸奶在42～43℃发酵过程中,通过琼脂单向免疫扩散法(SRID)测得IgG活性约损失了20%,而在冷藏14天后,IgG活性约损失了28%;添加牛初乳粉可促进乳酸菌产酸。通过感官评定得出开发含有牛初乳的凝固型酸奶是可行。     

两种方法纯化免抗绵羊肺炎支原体IgG的比较

目的:比较两种方法纯化兔抗绵羊肺炎支原体IgG的效果。方法:采用饱和硫酸铵和辛酸-硫酸铵两种方法分离纯化兔抗绵羊肺炎支原体抗体,并用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、分光光度计和琼脂扩散(AGP)试验对纯化产物进行相对分子质量、蛋白质含量及免疫活性进行鉴定。结果:纯化后抗体的蛋白含量基本相同;产物纯度和效价以辛酸-硫酸铵法较高。结论:辛酸硫酸铵法是一种简便、快速、高效的抗体纯化方法。     

HPLC法测定猪血浆中帕托珠利的方法学建立

建立了HPLC法测定猪血浆中帕托珠利含量的方法。色谱柱为安捷伦ZORBAX Eclipse XDB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相0.2%乙酸水溶液-乙腈(47∶53),柱温35℃,流速为1 m L/min,检测波长为250 nm。在本方法条件下,帕托珠利在0.1～10μg/m L浓度范围内线性关系良好(r0.999),检测限(LOD)为0.04μg/m L,定量限(LOQ)为0.1μg/m L,批内和批间回收率均大于90%,批内和批间精密度RSD均小于9%。本方法简单、准确、快速,可用于测定猪血浆中帕托珠利的含量。     

基于主成分分析法对不同血浆蛋白粉IgG及氨基酸的检测分析

本研究采用高效液相色谱法(HPLC)测定了10种市售血浆蛋白粉的Ig G及氨基酸含量,并通过主成分分析法对血浆蛋白粉中粗蛋白质、IgG及氨基酸进行分析,为血浆蛋白粉的评价与筛选提供了一种新方法。经主成分分析,建立了血浆蛋白粉的综合评价模型F=0.45F_1+0.36F_2+0.11F_3+0.08F_4,得到了血浆蛋白粉的综合得分,由高到低依次为SUX9、SUX8、SUX7、SUX6、SUX4、SUX5、SUX3、SUX2、SUX10、SUX1。对前三个主成分进行可视化处理,10种血浆蛋白粉被分为5类,结合模型得分筛选出SUX8、SUX9为优质血浆蛋白粉。     

口蹄疫灭活疫苗中蛋白质含量测定方法的比较

口蹄疫灭活疫苗中蛋白质含量的测定,可以反映出疫苗生产工艺的优劣以及疫苗质量。采用凯氏定氮法、改良Lowry法和考马斯亮蓝法三种较常见的蛋白质含量测定方法,对全国六个不同口蹄疫灭活疫苗生厂家共计15批疫苗的总蛋白质含量进行测定,并对测定结果进行比较,同时采用SDS—PAGE对样品中蛋白质含量进行定性,验证以上三种方法测定结果。结果表明,这些疫苗的总蛋白质含量差异比较大,1mL水相样中蛋白质含量在50—2000μg范围内。三种检测方法比较表明,改良Lowry法能较真实的反映口蹄疫灭活疫苗中蛋白质含量;与凯氏定氮法相比,此方法操作简单,工作效率高,而且低耗。     

高效液相色谱法测定猪血浆中氟苯尼考的含量

建立了猪血浆中氟苯尼考含量测定的高效液相色谱法(HPLC)。采用C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈-水(24:76)为流动相,流速1.0mL/min,检测波长223nm,进样量20μL,柱温为25℃。氟苯尼考浓度在0.1～16μg/mL时,标准曲线线性关系良好(r0.9998),无杂质干扰,回收率高于94%,批内变异系数和批间变异系数均低于5%。本方法操作简便,分析快速,结果准确,适用于猪血浆中氟苯尼考含量的测定及相关药代动力学研究。