天牛基因组DNA的提取方法

通过试验探索出3种可以快速、简便地从天牛干标本、液浸标本和新鲜标本中提取DNA模板的方法。对所获得的基因组扩增分析表明,经过PCR之后的DNA能呈现明显的多态性,同种天牛用同一引物扩增幼虫和成虫所获得的结果相同,可以认为,RAPD技术可以应用于天牛成虫干标本及幼虫浸渍标本的鉴定及系统发育研究中,也证明了这3种方法用于提取不同保存时间、不同种天牛基因组的DNA是切实可行的。     

茶树基因组DNA提取方法的研究

对传统的CTAB与SDS法进行改良与简化,从茶树嫩梢部位提取高质量的基因组DNA。结果表明,用该法提取的DNA的OD260／OD280在1．8～1．9之间,电泳与PCR都能得到清晰的图谱。     

一种直接用于PCR的土壤微生物DNA提取方法

以橡胶林土壤为材料,直接提取土壤微生物DNA。本实验介绍的方法不仅可以获得大片段,并且不需要纯化即可直接用于PCR扩增和DNA酶切等后续操作,每克土壤DNA提取量约为2.1～4.6μg。此方法操作简单、快捷、为土壤宏基因组文库的构建和土壤微生物群落结构的多样性分析提供基础。     

全血DNA提取方法的改进及PCR检测

采用TritonX-100和SDS破碎红细胞和白细胞,氯仿抽提,无需苯酚和蛋白酶K,在30 min内可提取一定量的基因组DNA.结果显示,DNA纯度约1.8;电泳检测条带清晰;使用PCR扩增评价提取核酸的质量,得到预期的目的条带.说明该方法具有安全、快速、经济的特点,是一种理想的提取血液基因组DNA的方法.     

不同肠球菌基因组DNA提取方法对PCR鉴定的影响

为研究肠球菌基因组DNA的不同提取方法对16SrRNA基因序列PCR、种属多重PCR、RAPDPCR等肠球菌鉴定结果的影响,分别采用6种基因组DNA提取方法(水煮法1、水煮法2、常规酚/氯仿抽提法、chelex-100法1、chelex-100法2和试剂盒法),对1株肠球菌标准菌株ATCC29212基因组DNA进行提取,以这些分别提取的DNA为模板在相同的扩增条件下进行PCR检测.结果表明,在16SrRNA基因序列PCR和种属多重PCR检测中以水煮法1进行肠球菌DNA的提取最适宜,而试剂盒法在RAPDPCR检测中效果最佳.     

用于PCR检测的扩展青霉基因组DNA提取方法比较

为寻找一种经济、简便、高效的基因组DNA提取方法,进一步开展扩展青霉的分子生物学研究,采用氯化苄法、玻璃珠法、玻璃珠+氯化苄法、试剂盒法4种方法提取扩展青霉的基因组DNA,并测定DNA质量浓度以及进行PCR和电泳分析,比较不同提取方法的效果。结果表明,4种方法均可提取到基因组DNA,其抽提质量优劣依次为试剂盒法、玻璃珠+氯化苄法、玻璃珠法、氯化苄法。其中玻璃珠+氯化苄法提取效率接近试剂盒法,效果良好,并且此法成本低廉、操作简单、结果稳定,可代替昂贵的试剂盒法用于扩展青霉基因组DNA的提取。     

节杆菌基因组DNA提取方法的改良

[目的]研究比较了节杆菌的不同DNA提取方法,以获得高质量的基因组DNA。[方法]采用反复冷冻研磨、甲苯处理对细胞进行预处理,随后进行CTAB抽提,并与细菌基因组提取试剂盒进行比较。[结果]改良的CTAB法提取的DNA,纯化之后经电泳检测表明,基因组DNA条带清晰,量度均一,DNA片断大小一致;以上述DNA为模板进行PCR扩增,条带单一、特异性强,其中利用经甲苯方法提取的DNA快速、简便、经济实用,可作为PCR扩增的模板进行后续的基因操作和分子生物学研究。[结论]改良的CTAB法能够有效地提取节杆菌基因组DNA,纯度达到要求。     

优化金黄色葡萄球菌基因组DNA的提取方法

为提取金黄色葡萄球菌DNA,比较了酶解法、丙酮-酶解法、玻璃珠机械法等破壁方法,确定玻璃珠破壁法为最优提取方法。该方法无需对样品进行增菌,可直接从乳品中提取金黄色葡萄球菌DNA。     

不同方法提取天麻DNA的研究

[目的]探索适合于天麻DNA的提取方法。[方法]采用3种方法提取天麻DNA,测定提取的天麻DNA纯度与产量,并对其扩增产物进行电泳分析。[结果]改进的CTAB法提取的天麻DNA产量和纯度均较高,扩增产物的电泳条带也较明显。[结论]改进的CTAB法较适合用于天麻DNA的提取。     

鸡基因组DNA不同提取方法的比较研究

实验用优化煮沸法提取鸡血液基因组DNA,经核酸蛋白定量仪检测,DNA的OD260/OD280达1.77±0.06,证明所提DNA质量较好,用于PCR扩增,可以得到满意的扩增效果。与酚-氯仿法相比,优化煮沸法避免了用氯仿、酚等剧毒试剂,且节约了时间和成本,是一种较好的提取基因组DNA的方法。     

PCR仪法从林麝毛发中提取基因组DNA

采用PCR仪法从林麝(Moschus berezovskii)毛发中提取基因组DNA,并与酚/氯仿法进行比较.结果表明,采用PCR仪法提取所得的DNA浓度高、纯度好.以提取所得的DNA为模板扩增林麝雄性激素受体基因外显子1,获得的PCR产物务带清晰、位置正确.PCR仅法与酚/氯仿法相比操作简单,提取所得的DNA质量较高,值得推广.     

鱼糜制品中基因组DNA提取方法的比较

将分别采用普通酚-氯仿抽提法和试剂盒(柱吸附法)提取DNA的两种方法加以比较,以确定最适提取鱼糜制品DNA的方法.将鱼肉和鱼糜制品作为原料,用两种方法提取基因组DNA,利用分光光度计测定其A260与A280的吸光值,计算比率估计核酸的纯度,并利用琼脂糖凝胶电泳观察DNA片段在凝胶中的位置;并用线粒体16S rRNA基因PCR扩增产物鉴定所提取的基因组DNA.     

荧光定量PCR检测猪肝中猪链球菌2型的基因组DNA提取方法的比较

[目的]在人工布菌猪肝中评估溶菌酶-苯酚法和柱式纯化试剂盒法提取猪链球菌2型基因组DNA在荧光定量检测中的应用效果,为猪链球菌2型的荧光定量检测选择合理的基因组DNA提取方法提供试验依据。[方法]采用溶菌酶-苯酚法和柱式纯化试剂盒法分别提取人工布菌猪肝样本中猪链球菌2型基因组DNA,通过荧光定量PCR技术检测猪链球菌2型的相对含量。[结果]利用荧光定量方法能够检测到猪链球菌2型。该方法可以最低检测到12 CFU/g的猪链球菌,特异性良好,标准曲线方程为y=-3.185 9x+39.901 0。在人工布菌猪肝样本中,溶菌酶-苯酚法在q PCR实验中检测猪链球菌2型较灵敏。[结论]溶菌酶-苯酚法在猪肝样品中提取基因组DNA效果较好;试剂盒法在细菌纯培养物中提取基因组DNA具有安全、高效等优点。     

油茶种质资源RAPD分析I.DNA提取和PCR扩增条件建立

通过比较SDS和CTAB 2种方法 ,CTAB法更适于油茶DNA的提取 ,并在CTAB法提取过程中将一些有效的去多糖、多酚的步骤进行组合 ,建立适合油茶DNA的提取方法 ,同时构建了油茶DNA的PCR扩增程序 ,并从预变性温度、Mg2 +浓度、dNTPs、TaqDNA聚合酶、模板DNA等方面确定了PCR扩增条件     

天牛基因组DNA提取方法和标本保存方式的比较研究

[目的]为天牛的分子系统学研究奠定基础。[方法]采用不同提取方法(饱和NaCl法、CTAB法、SDS-蛋白酶K消化法)从不同保存条件下天牛标本中提取基因组DNA,进行RAPD扩增,比较不同保存条件和不同DNA提取方法对DNA提取质量的影响,探索天牛标本的最佳保存方式和最佳DNA提取方法。[结果]不同方法提取的DNA质量有明显差异。CTAB法和SDS-蛋白酶K消化法提取的DNA质量较好,条带清晰完整,无降解和RNA污染。但饱和NaCl法的提取效果较差。天牛标本的最佳保存条件为在-80℃条件下无水乙醇浸泡。CTAB法提取的天牛基因组DNA能扩增出稳定清晰的多态性片段。[结论]CTAB法提取的天牛DNA质量最好,可直接用于PCR扩增。     

玉米叶面微生物DNA提取方法及PCR引物的筛选

传统的微生物培养方法在反映叶面微生态信息上具有局限性,因此逐渐被分子生态学所代替,而获得高质量、大片段、无偏好的总DNA是研究叶面环境微生物的基础。本文采用改进的Sambrook法、CTAB法、改良的化学法以及试剂盒法对玉米生长初期、中期、末期的叶面微生物总DNA进行提取,并对4种方法提取的DNA片段的大小和产量进行综合评价。将得到的DNA用引物357/518以及984/1387对细菌16S rDNA进行扩增;用5种常见引物NS1/fung、ITS1-F/ITS2、NS1/AM1、EF4/fung5、SSU-0817/SSU-1196对真菌18SrDNA进行扩增。结果表明:4种方法提取的DNA片段均适用于PCR,但DNA的得率和纯度有一定差别,其中以试剂盒提取效果最好。PCR结果显示,除化学法外,其他3种方法提取的DNA均能够获得目的条带;并通过比较得出引物984/1387对16S rDNA以及ITS1-F/ITS2对18S rDNA扩增效果较好且扩增量最大。     

新郑灰枣基因组DNA提取方法比较

以新郑灰枣苗叶片为材料,采用CTAB方法提取叶片DNA,并对该方法进行改良。比较4种DNA提取方式,对提取结果进行紫外分光光度、电泳、酶切等方法的鉴定,结果表明,提取的灰枣叶片DNA得率约为0.370~0.530μg/mg,A260/A280约为1.90~2.00,A260/A230在2.00以上,分子量在23 kb以上,能够被EcoRⅠ,HindⅢ酶切。其中,第2种处理方法提取效果较好。     

稻田土壤DNA的提取及nifA基因的PCR扩增

为弄清茅贡米土壤微生物群落结构和生物固氮等代谢活动机制,采用试剂盒、SDS高盐和土壤预处理+SDS高盐3种土壤DNA提取方法,以从贵州茅贡米基地采集的土样提取的宏基因组DNA为模板,进行nifA基因的PCR扩增,比较了3种土壤DNA提取方法的效果.结果表明,试剂盒提取的DNA扩增到约200 bp和900 bp的nifA...     

高山被孢霉DNA提取方法的比较与改进

利用CTAB法、SDS裂解法、氯化苄法和溶菌酶消化法提取高山被孢霉菌团的DNA.结果表明,CTAB法提取的DNA收率与纯度均较高,收率在700μg·g-1菌团以上,蛋白质污染少;SDS裂解法提取的DNA收率和纯度均较低,蛋白质污染严重;氯化苄法提取的DNA纯度较高,且无需苯酚纯化,但其易降解成DNA片段,质量稳定性较差;溶菌酶消化法无需采用液氮研磨,提取的DNA能达到分子生物学分析的要求,但收率较低,且步骤烦琐,成本较高.用改进的CTAB法可得到高纯度、高收率的被孢霉DNA,并可用于酶切或PCR扩增.