小白菜黄化苗培养方法初探

细胞质雄性不育（CMS）广泛存在于高等植物中，它不仅在植物杂种优势利用方面具有重要价值，而且在研究核质互作方面具有重要的理论意义。植物细胞质雄性不育的母性遗传现象，与线粒体和叶绿体两种细胞器有关。现有的研究结果表明，大多数植物的CMS主要与线粒体有关，因此，提取高质量的线粒体DNA是进行线粒体基因组研究的前提。从健壮的黄化苗中提取线粒体DNA可以减少细胞质中叶绿体基因组的污染，从而更加严谨地分析线粒体基因。本文介绍高质量小白菜黄化苗的培养方法。     

适合于基因组测序的红麻高纯度线粒体DNA提取

采用红麻黄化苗为试材,结合密度梯度离心和差速离心的方法提取线粒体DNA(mtDNA)以满足测序要求.结果表明,蔗糖密度梯度离心法比Percoll密度梯度离心法更适合于红麻线粒体的分离.分离后的线粒体经DNaseI消化核DNA,并采用Jannus绿检测线粒体的完整性,SDS和蛋白酶K裂解线粒体,并用酚/氯仿抽提除去蛋白,...     

基于棉花BAC文库的线粒体DNA的提取方法

以棉花的黄化苗为材料，根据棉花自身的特点，利用差速离心的方法分离线粒体后再经低熔点琼脂糖包埋裂解提取了完整的mtDNA。其质量完全可以满足BAC文库构建中限制性酶切、PCR检测、分子杂交筛选等实验的要求。     

高质量蝗虫线粒体DNA的快速提取技术研究

线粒体DNA是研究动物系统发育、种群遗传变异与分化和进行近缘种、种下分类单元鉴定的理想工具之一。用改进的碱变性提取法对蝗虫线粒体DNA进行快速提取,结果表明:新鲜材料和-80℃冷藏的标本是提取mtDNA的理想材料,直接取运动肌(胸部和后足胫节肌肉)时每克组织所得到的mtDNA较多、较纯。     

棉花线粒体基因组细菌人工染色体文库的构建

以P30A细胞质雄性不育系黄化苗为材料,采用蔗糖密度差速离心和不连续蔗糖密度梯度超速离心提取棉花线粒体,低熔点琼脂糖包埋和原位消化裂解的方法制备高分子量的线粒体DNA(mtDNA),经BamHⅠ,HindⅢ酶切和PCR扩增进行纯度鉴定,并对其进行部分酶切,酶切片段与载体连接,电击转入大肠杆菌DH10B中,成功的构建了棉花线粒体基因组BAC文库。该文库共挑取3 840个单克隆,平均插入片段大小为15.5 kb,覆盖率超过70倍,研究结果表明该基因文库具有较高的质量。     

不结球白菜线粒体DNA的提取及分析

采用SDS-蛋白酶K法提取了不结球白菜黄化苗的线粒体DNA,经琼脂糖电泳及紫外分光光度分析表明,所提取的DNA纯度高,足以进行后续的研究工作.以所提取的线粒体DNA为PCR进行RAPD扩增,获得了清晰的扩增图谱.     

三种玉米DNA提取方法探究

采用改良CTAB法、改良SDS法、快速提取法分别以玉米种子、黄化苗叶片、正常生长期绿色叶片为材料提取细胞总DNA。结果表明用3种不同方法提取的DNA纯度符合分子生物学实验要求。不同部位的材料、不同的提取方法，DNA得率不同。玉米干种子优适用于在快速提取法中提取DNA；改良CTAB法、SDS法宜从玉米黄化苗叶片和正常绿色叶片中提取DNA。     

用于PCR分析的水稻DNA简易提取法——CS法

以PCR技术为基础的DNA分子标记是迄今在作物转基因检测、标记辅助选择、农作物品种纯度鉴定等方面最具应用前景的分子标记技术，而快速、简易、低成本的DNA提取方法是其中的关键因素之一。本实验以水稻黄化苗为材料，用NaOH溶液抽提DNA，对其用于PCR技术的DNA标记的效果进行了分析。结果发现，用O．5M．NaOH对黄化苗进行直接处理，并用等量1M Tris—HCI进行稀释、中和，离心所得的上清液即可直接用于各种：PCR扩增和随后的DNA标记鉴别，包括转基因PCR片段检测、微卫星标记多态性分析(琼脂糖电泳法或毛细管电泳法)，这样提取的DNA可以在短期内保存，在PCR分析中其效果与用常规CTAB法提取的DNA相当。     

马铃薯亚细胞结构线粒体DNA的分离与提取

以马铃薯块茎为材料,通过差速离心分离出线粒体,过垫梯度离心进一步纯化。显微镜下观察所得的线粒体的纯度、形态;并用数码相机进行照相。线粒体样用SDS、蛋白酶K、核酸酶处理后用饱和酚、苯酚/氯仿及氯仿/异戊醇提取处理,乙醇沉淀,提取得线粒体DNA(mtDNA)。紫外分光光度计检测提取浓度、纯度,1%琼脂糖电泳获得清晰、整齐的条带。     

苹果绵蚜线粒体DNA的提取方法研究简报

 获得高质量的线粒体DNA（mtDNA）是进行mtDNA研究的前提。本研究用碱裂解法和加热法均得到了满足RFLP分析要求的苹果绵蚜mtDNA。但只有碱裂解法提取的mtDNA满足克隆的需要。经分析认为,在实验过程中尽可能的避免核DNA的断裂,是获取高质量mtDNA的关键。     

Method for Isolating Mitochondrial DNA from Etiolated Tissue of Cabbage

Isolation of high-quality mitochondrial DNA（mtDNA） is an important premise for researching molecular mechanisms in cytoplasmic male sterility of cabbage（Brassica oleracea L.var.capitata）. An efficient protocol for separation and purification of mitochondria and extraction of mitochondrial DNA（mtDNA） from etiolated tissues of cabbage was developed. We took a method combined mannitol density gradient with differential centrifugation, selected appropriate rotational speed, extended DNase I treating time and changed mitochondria cracking condition. The results showed that the extracted mitochondria in this protocol had complete structure, appeared to ellipsoid and had not been contaminated with other impurities under the Jannus Green B staining. The isolated mitochondrial DNA had high purity and yield through detecting the optical density, nuclear specific primer PCR and agarose gel electrophoresis. The results indicated that mitochondrial DNA extracted by this protocol had high quality and enabled to be used in futher genetic studies.     

植物组织中有机酸的提取方法比较

以番茄果实和不结球白菜叶片为试验材料,用蒸馏水（水提）、80％乙醇-旋转蒸发浓缩（醇提）、蒸馏水-冷冻干燥浓缩（水提冻干）分别提取有机酸,采用高效液相色谱法测定。结果表明：3种提取方法下番茄果实中富马酸、丁二酸含量无显著性差异,草酸、酒石酸、苹果酸、草酰乙酸含量均以水提最高,而丙酮酸和柠檬酸以醇提含量最高;不同提取方法对不结球白菜叶片中草酸、酒石酸、富马酸含量无影响,其他几种有机酸（除草酰乙酸外）均以水提和水提冻干含量高于醇提,其中,水提法和水提冻干法提取丙酮酸、苹果酸、丁二酸的含量无显著差异,而柠檬酸含量以水提冻干法最高。综合考虑试验步骤和结果等各方面因素发现,蒸馏水直接提取法既能有效保证有机酸的提取量,又能大大简化试验步骤。     

菜心叶绿素测定方法比较研究

[目的]探讨研磨法和浸提法测定菜心叶片叶绿素含量的优劣及快速测定的步骤。[方法]以菜心为试材,浸提法设5个处理:95%乙醇、80%丙酮、丙酮∶乙醇=1∶1、丙酮∶乙醇=1∶2和丙酮∶乙醇=2∶1,Arnon研磨法作为对照,研究不同提取液对菜心叶片叶绿素提取效果和叶绿素稳定性的影响。[结果]浸提法要优于Arnon研磨法;浸提法中,混合液浸提法的提取率和提取液的稳定性都优于单一溶剂浸提法,其中菜心叶绿素提取效果最好的是丙酮与乙醇体积比为2∶1,单一的丙酮或乙醇浸提法效果较差。[结论]丙酮与乙醇体积比为2∶1的混合液浸提法直接浸提菜心叶片叶绿素的优点是步骤简单,操作方便,节省时间,稳定性好,可以快速测定大批量样品的叶绿素含量。     

不结球白菜雌蕊蛋白质双向电泳技术体系的建立

以不结球白菜品种‘矮脚黄’的雌蕊为材料,从蛋白质提取、IEF程序、IPG胶条pH范围和染色方法等方面进行比较,利用Tris-HCl提取方法,使用pH 4～7 IPG胶条和改进的等电聚焦程序,改良银染方法,建立了适用于不结球白菜雌蕊蛋白质的双向电泳技术体系,并使用该体系对开花前2 d的花蕾雌蕊和开花2 d后的雌蕊蛋白质进行比较分析,获得187个差异蛋白点。     

大白菜基因组DNA的提取及AFLP反应体系的建立

1材料与方法1．1材料供试大白菜种质材料32份,分别由北京市农林科学院蔬菜研究中心品种资源库及蔬菜研究中心大白菜育种课题组和中国农业科学院蔬菜花卉研究所国家种质资源中期库提供。材料编号、品种名称、来源地见表1。     

辽宁省大白菜育种的研究现状及展望

本文通过对辽宁省不同时期采用不同育种方法选育成的大白菜品种现状,从品种数量和品种质量方面,总结了不同时期的育种水平及存在问题。在此问题的基础上,提出了今后大白菜的育种方向及育种途径,同时提出了采用细胞工程技术和生物技术,从根本上改变大白菜的遗传组成,转育不同生态型核基因雄性不育系,解决制种中存在的问题,提高大白菜育种水平。     

与大白菜细胞质不育相关RAPD特征片段的克隆和序列分析

为了研究和获得大白菜细胞质不育系和保持系线粒体DNA的多态性,选用153个RAPD随机引物,对3套材料,每套中包含不同来源、同核异质的大白菜细胞质不育系(Pol-CMS、Ogu-CMS和CMS96)和保持系线粒体DNA进行RAPD分析。结果表明,有4个RAPD随机引物可以在全部Ogu-CMS和CMS96不育系中扩增出特异带,有1个随机引物仅在所有Ogu-CMS不育系中扩增出特异带;同时将OPAH16随机引物扩增的与不育相关的特异带进行了克隆和测序。结果表明,所获得的特异片段均与拟南芥和甘蓝型油菜的线粒体基因组序列部分同源,但与已发表的不育基因序列没有同源性。由这5个序列推导出的蛋白质与拟南芥中的一种未知功能蛋白AtMg00760(ORF109b)具有部分同源性。这5个序列的可能功能正在验证中。     

8种水稻基因组DNA提取方法的比较

[目的]寻找操作简便、耗时短、成本低的水稻基因组DNA提取方法。[方法]分别以水稻幼嫩黄化叶片和老叶片为材料,用8种方法提取其中的DNA,测定所提DNA的浓度和纯度,并对其进行PCR扩增和电泳检测,比较各方法的提取效果。[结果]8种方法提取的DNA浓度分别为35.15、30.80、67.30、26.15、23.55、8.95、48.05、54.26μg／ml,方法③提取的DNA浓度最大,但PCR扩增效果较差;改进的SDS法（方法⑦、⑧）提取的DNA纯度较高,PCR扩增产物电泳条带较亮,但这2种方法操作程序复杂,成本较高,提取每份样品的成本分别为14、31元,远高于其他提取方法。[结论]除方法③外,其余5种简化方法均能得到较高质量的水稻基因组DNA,且提取成本远低于传统SDS法。