结核分枝杆菌感染中凋亡相关microRNA的研究进展

结核病是由结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex,MTBC)引起的慢性消耗性人兽共患传染病.机体为抵御结核分枝杆菌感染,通过产生一系列免疫应答将其清除.细胞凋亡是其中重要的一个环节,通过主动程序性死亡,破坏结核分枝杆菌在细胞内的存活.microRNA(miRNA)是一类...     

IL-10在结核分枝杆菌感染和免疫中作用的研究进展

白细胞介素10（interleukin 10,IL-10）是一种多功能、多细胞源性的细胞因子,因其具有强抗炎和免疫抑制活性而成为研究热点。在结核病的发生发展中,IL-10的免疫抑制作用受到了研究者的关注,其既能抑制天然免疫,也能影响获得性免疫。研究者普遍认为IL-10与结核分枝杆菌的免疫逃避及潜伏性感染有关。鉴于其在结核分枝杆菌感染中独特的作用,作者对近几年IL-10在结核分枝杆菌免疫逃避、潜伏感染、临床辅助治疗及自身表达调控等方面的研究进展进行了综述。     

microRNAs作为结核分枝杆菌感染标志物的研究进展

微小RNA(microRN.As)是一类长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子,它参与基因转录后的表达调控,在免疫系统的调控和运行中具有重要作用。结核分枝杆菌是典型的胞内寄生菌,其感染能够引起人畜共患结核病。从microRNAs与结核免疫机制的相关性以及在结核分枝杆菌感染过程中巨噬细胞、外周血单核细胞及血清中microRNAs表达谱变化等方面,进行综述microRNAs作为结核分枝杆菌感染标志物的研究现状,以期为动物结核病检测提供理论参考。     

结核分枝杆菌的分子生物学特点

结核分枝杆菌是分枝杆菌属中最重要的一种细菌,是肺结核的病原。肺结核是世界上常见的传染病之一,每年约导致二百多万人死亡和八百多万人致病,给人民生活和国家的经济建设带来了巨大损失。搞清该病原的分子生物学特点对于该病的控制及治疗都有十分重要的意义。本文对结核分枝杆菌的分类、表型特征、基因组及质粒、毒力因子、致病机制、主要保护性抗原、免疫防制等生物学特点进行论述,以对该致病因子有一个较为全面的认识,从而达到更好预防和治疗结核病的目标。     

结核分枝杆菌感染与巨噬细胞凋亡的免疫机制研究进展

结核分枝杆菌感染后,巨噬细胞凋亡被认为是抵抗其进一步入侵的重要机制之一,巨噬细胞发生凋亡后可以杀死胞内的结核分枝杆菌,进一步地加工、递呈抗原,激活邻近尚未感染的巨噬细胞,增强机体的免疫应答能力。结核分枝杆菌也会通过一系列机制来抑制巨噬细胞的凋亡,以逃避巨噬细胞的杀伤。结核分枝杆菌对宿主巨噬细胞凋亡的调控呈现出复杂性和多面性,进一步研究其具体调控机制有助于人们更好地预防和控制结核病。     

结核分枝杆菌fadD家族蛋白的研究进展

结核分枝杆菌复合群感染导致的结核病依然威胁着全球人类及动物的健康。结核分枝杆菌含有复杂的细胞壁结构,其脂质成分与细菌的毒力、致病性、耐药性密切相关,结核分枝杆菌有250个基因参与脂类物质的合成与代谢,其数量是大肠杆菌的4倍之多,fadD家族也是众多脂质代谢基因中的一类,在细菌的生命周期或者在其致病中扮演着重要的角色。本文对结核分枝杆菌fadD家族蛋白结构、作用机制、调控和应用前景进行了综述,希望能为结核疫苗、诊断方法等的研发提供理论基础。     

海狮非结核分枝杆菌病病例

非结核分枝杆菌（NTM）是指除结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌，如堪萨斯分枝杆菌（M．kansasii）、海分枝杆菌（M．marinum）等。非结核分枝杆菌感染海狮后常导致肺部感染，引起结核样病变（结核结节、干酪样坏死及空洞形成），严重者可累及全身各个脏器。进食被非结核分枝杆菌污染的冷冻海水鱼可能是主要的感染途径。笔者在临床工作中遇到2例海狮非结核分枝杆菌感染的病例，总结经验教训，报告如下。     

牛结核分枝杆菌基因文库的构建

以国际标准牛型结核分枝杆菌（Ｍ．ｂｏｖｉｓ）ＴＭＣ４１０为材料,制备其总ＤＮＡ,经过限制性内切酶Ｓａｕ３Ａ部分消化后,纯化回收９～２５Ｋｂ片段,并将其用Ｔ４ＤＮＡ连接酶与经ＢａｍＨＩ酶切为粘性末端的ＬａｍｂｄａＥＭＢＬ３左右臂连接。用噬菌体包装蛋白包装,再进行连续稀释,然后将不同稀释度的噬菌体转移到宿主菌ＬＥ３９２。所获重组子为６×１０４,因为牛结核杆菌基因组大小约为４×１０６Ｋｂ则以９９％概率筛到任一基因,要求的重组子数为１．０８×１０３,故该基因文库已达到要求     

结核分枝杆菌与牛分枝杆菌全基因组比较分析

本研究旨在揭示结核分枝杆菌与牛分枝杆菌全基因组的遗传差异,为结核分枝杆菌与牛分枝杆菌的鉴别诊断提供新的分子标志。利用结核分枝杆菌H37Rv和牛分枝杆菌AF2122/97的全基因组测序结果,通过在线比对,完成了两者的全基因组比对分析。结果显示AF2122/97相对H37Rv存在14处大片段缺失,大小范围为0.8～12.7kb,其中RD18、RD19及RD20等3处缺失为首次报道。此外,AF2122/97还存在6处基因内部小片段的缺失,大小范围为12～714bp,其中Mb1319及Mb3293c基因内部缺失为首次报道。H37Rv相对AF2122/97存在6处大片段缺失,大小范围为1.3～5.4kb。此外,H37Rv还存在5处基因内部小片段的缺失,大小范围为10～48bp,这些基因的内部缺失都为首次报道。通过结核分枝杆菌H37Rv和牛分枝杆菌AF2122/97的全基因组序列比对,揭示了这2种菌株间的遗传差异,阐述影响表型特征、寄主偏好性及毒力差异的关键性遗传基础。这些新的认识将有助于开发新的药物、诊断试剂和疫苗。     

结核分枝杆菌蛋白酶体结构与功能研究进展

结核病是由结核分枝杆菌(MTB)引起的一种慢性传染病,其发病机制比较复杂。本文介绍了MTB蛋白酶体结构及其激活因子的研究进展,阐述了MTB蛋白酶体生理功能,揭示了蛋白酶体在结核分枝杆菌的致病性、持留性、转录调控中发挥的重要作用。对结核分枝杆菌蛋白酶体结构和生理功能的深入研究,有助于进一步探索结核分枝杆菌持留致病新机制,也可为疫苗和抗结核新药的研发提供理论依据。     

结核分枝杆菌耐药机制与检测技术研究进展

近年来耐药结核分枝杆菌的不断出现给结核病的治疗带来前所未有的压力。研究发现,不但牛型分枝杆菌可感染人,人型结核分枝杆菌也可感染牛,这也给养牛业的发展带来了威胁与挑战。如何建立快速、简便、敏感性强、特异性好、价格低廉的耐药性检测方法是控制该病蔓延的关键。作者阐述了常用药物异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇、吡嗪酰胺等的作用机制及传统分枝杆菌耐药性检测方法（荧光素酶系统、显微镜观察药敏检测技术（MODS）、比例法、Bactec MGIT 960系统）和以分子生物学为基础的分枝杆菌耐药性检测方法（单链探针反向杂交试验（LiPA）、Gene Xpert全自动检测系统、PCR-单链构象多态性分析（PCR-SSCP）、PCR-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）、DNA测序、基因芯片技术）的研究进展,以期为进一步的研究与应用提供参考。     

结核分枝杆菌PhoP-PhoR双组分系统研究进展

双组分信号转导系统广泛存在于各种原核生物中,其基本结构为1个组氨酸激酶（HK）和1个反应调节剂（RR）,该系统能够感知外界刺激并作出反应,使细菌能适应各种不利环境且能增强细菌在宿主体内的生存能力,对细菌的毒力和生长至关重要。文章概述了结核分枝杆菌DosS/DosT-DosR、MprA-MprB、PrrA-PrrB、PhoP-PhoR等12个双组分系统,重点介绍了PhoP-PhoR双组分系统的结构与功能。PhoP-PhoR是结核分枝杆菌最基本、最重要的双组分系统之一,由感受器PhoR和效应器PhoP组成,其中PhoR可以接受Mg^2＋、Cl^－或H^＋等外界刺激,进而驱动PhoP对靶基因的转录表达进行调控。PhoP作为一种效应蛋白,经过晶体结构解析发现,其可通过与DNA结合来实现对靶基因的调控,具体包括对细胞壁组成的控制、对脂类代谢和pH的调节、对结核分枝杆菌毒力网络的调控。此外,文章还介绍了PhoP突变株作为疫苗候选株所具有的优势,包括PhoP突变株在小鼠模型中毒力减弱,并且免疫恒河猴及豚鼠后均有一定的免疫保护性等,表明PhoP突变株具有较好的疫苗开发潜力。作者通过对PhoP-PhoR双组分系统的结构与功能,以及PhoP突变株作为疫苗候选株的研究进行综述,旨在为结核分枝杆菌的毒力机制和人类结核病疫苗的研究提供理论依据。     

梅花鹿结核分枝杆菌的分离与鉴定

目的探讨梅花鹿结核病的诊断方法,以及进行结核病的病原学的调查研究。方法利用病理学诊断方法、微生物分离方法以及分子生物学技术对患病梅花鹿进行疾病诊断。结果确定所分离的分枝杆菌是结核分枝杆菌,PCR法扩增出结核分枝杆菌特异的225bp片段,证实梅花鹿感染了结核分枝杆菌。结论结核病的诊断可以通过微生物分离诊断方法进行,分子生物学技术在结核病的诊断中的应用逐渐成为必不可少的诊断方法,它将有利于病原分离困难的小块病变组织的诊断。     

牛非结核分枝杆菌分离与鉴定

本试验对从吉林省不同区域的7个城市采集的503份牛颌下淋巴结样品和497份牛肠系膜淋巴结样品进行非结核分枝杆菌的流行情况的调查,样品均采自结核(副结核)变态反应阴性牛只,调查中得到阳性样品25份,阳性率2.5%,其中颌下淋巴结阳性率1.59%,肠系膜淋巴结阳性率3.42%,成功分离扩增培养出14株非结核分枝杆菌,并进行了分类鉴别,得到母牛分枝杆菌1株,龟分枝杆菌脓肿亚种2株,苏加分枝杆菌2株,偶发分枝杆菌1株,蟾蜍分枝杆菌6株,胞内分枝杆菌2株.调查结果表明:非结核分枝杆菌单独感染的情况不容乐观,应加强对非结核分枝杆菌的检验检疫工作.     

结核分枝杆菌复合群、副结核分枝杆菌和禽分枝杆菌禽亚种多重TaqMan荧光定量PCR方法的建立及初步应用

结核分枝杆菌复合群(MTBC)、包括结核分枝杆菌(MTB)、牛分枝杆菌(MB)、非洲分枝杆菌、田鼠分枝杆菌等;非结核分枝杆菌(NTM)中禽分枝杆菌(MA)是自然界常见的动物致病菌,包含4个亚种,分别为禽分枝杆菌禽亚种(MAA)、禽分枝杆菌人/猪亚种(MAH)、禽分枝杆菌副结核亚种/副结核分枝杆菌(MAP)和禽分枝杆菌森林土壤亚种(MAS)。为建立MTBC、MAP和MAA的多重荧光定量PCR检测方法,本研究基于MTBC、MAP和MAA的特异性基因devR、F57和IS901分别设计引物及探针,通过优化各反应条件,建立了一种可同时检测3种分枝杆菌的多重Taq Man荧光定量PCR方法。特异性试验结果显示,该方法对MTB、MB、MAP、MAA和MAS检测为阳性,对其他畜禽病原菌,包括MAH、13种NTM和7种非分枝杆菌检测结果均为阴性,特异性较强。敏感性试验结果显示,该方法对MB、MAP和MAA重组质粒标准品的检测限均为1.0拷贝/μL,敏感性较高;重复性试验结果显示,批内与批间重复性试验变异系数均小于2.5%,重复性较好。利用该方法检测体外模拟污染(MB、MAP和MAA菌液浓度分别为1.0...     

结核分枝杆菌ACR蛋白的原核表达及纯化

为获得区别结核感染状态的血清学鉴别诊断试剂的抗原,根据GenBank中登录的结核杆菌H37Rv的ACR基因序列设计1对引物,以热灭活的结核杆菌H37Rv菌悬液为模板,PCR扩增得到ACR基因DNA片段.将扩增片段克隆于pGM-T载体中,得到载体pGM-T-ACR.分别将pET32a质粒和pGM-T-ACR质粒用限制性内切酶BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切,并将纯化的ACR基因亚克隆至pET32a中,获得重组表达质粒pET32a-ACR.将其转化E.coli BL21 IPTG诱导后,经SDS-PAGE、western blot分析鉴定,可见约34 ku的外源蛋白带.表明ACR基因在大肠杆菌中得到了表达.用Ni-NTA Agarose试剂盒进行蛋白纯化,获得纯化的ACR融合蛋白.