含CpG-ODN基序重组抑制素质粒的构建及其对小鼠颗粒细胞相关凋亡基因表达的影响

旨在构建含免疫基序CpG-ODN片段的重组抑制素质粒pEGISI-CpG-ODN,并研究其对小鼠颗粒细胞中相关凋亡基因mRNA表达水平的影响,以探讨免疫佐剂CpG-ODN对小鼠卵巢颗粒细胞的作用。采集21~23日龄雌性ICR小鼠卵巢颗粒细胞,试验分为3组:空载体组(pEGFP)、抑制素重组质粒组(pEGISI)和含CpG-ODN基序的重组抑制素质粒组(pEGISI-CpG-ODN)。采用普通PCR扩增目的片段CpG-ODN,荧光定量RT-PCR(qRTPCR)检测转染后细胞中CpG及死亡受体通路相关基因(Fas、FasL、DR4/5、TRAIL、Caspase8和Caspase3)mRNA的表达水平。结果表明:重组抑制素质粒pEGISI-CpG-ODN构建成功;重组抑制素质粒(pEGISI-CpG-ODN)转染颗粒细胞后,CpG基因能在细胞中高表达;与pEGISI组相比,pEGISI-CpG-ODN组转染颗粒细胞后,能极显著降低细胞中促凋亡基因Fas、FasL、DR4/5、TRAIL、Caspase8和Caspase3mRNA的表达水平(P0.01)。综上表明,CpG-ODN可拮抗抑制素的作用,下调小鼠颗粒细胞中凋亡基因的表达,进而影响卵泡发育。     

基于CRISPR/Cas9敲除技术研究Gata4基因在雄性小鼠睾丸发育中的功能

旨在通过CRISPR/Cas9技术研究Gata4基因在雄性小鼠睾丸中的作用机制。试验以C57BL/6小鼠为模型,通过CRISPR/Cas9技术在雄性小鼠体内敲除Gata4基因,组织学观察睾丸形态学变化,ELISA法测定雄激素相关合成酶,实时定量PCR检测相关标记基因。利用CRISPR/Cas9技术成功在小鼠体内敲除Gata4基因,通过PCR扩增、酶切计算得到基因敲除率93%;在2月龄小鼠性成熟时,通过定量PCR、HE染色和ELISA检测发现,与对照组相比,敲除组小鼠睾丸发育迟缓,明显变小,精原细胞和精子生成减少,睾丸中雄性信号通路相关基因(Stra8,Vasa,Dazl,Tnp1,Spo11,Sox9,17HSDb3,Dmrt1)表达量降低,雄激素水平显著降低。研究表明,Gata4在雄性小鼠生殖器官发育与精子生成过程中具有重要功能。     

内质网应激标记基因Grp78参与鹅肥肝免疫/炎症状态的调控

旨在揭示内质网应激(ERS)标记基因Grp78是否参与鹅肥肝中炎症/免疫相关基因的表达调控。本试验选择健康的、体重相近的70日龄朗德鹅30只(未分公母),随机分为对照组(n=15)和填饲组(n=15)。利用荧光定量PCR测定不同填饲阶段(填饲7、14、19 d)不同组织中Grp78的相对表达量(n=4),以明晰Grp78与鹅肥肝形成的关联;在鹅原代肝细胞中过表达Grp78,并通过RNA-seq分析Grp78所影响的信号通路和基因(n=3);利用荧光定量PCR检测鹅肥肝中与炎症/免疫相关的基因表达量(n=4),以明晰这些基因与Grp78的关联。结果表明,肝和腹脂中Grp78的表达量受填饲影响(肝中下降,而腹脂中上升)。Grp78基因的过表达试验表明,ERS除了可影响已知的代谢病和细胞凋亡通路外,还影响信号转导、免疫等通路。在免疫/炎症方面,"Toll-like receptor signaling pathway"、"TNFαsignaling pathway"、"NF-kappa B signaling pathway"等通路最为突出。此外,免疫/炎症相关基因Tnfsf10、Map3k7cl在鹅原代细胞中的表达受Grp78过表达影响,在鹅肥肝中受填饲影响。总之,本研究揭示了Grp78/ERS新的生物学功能,即对细胞的免疫/炎症状态进行调控,并借此参与鹅肥肝的形成。     

钼对小鼠骨骼肌上皮细胞氧化损伤及细胞骨架的影响

本试验旨在探究钼(Mo)对小鼠骨骼肌上皮细胞氧化损伤及细胞骨架的影响。试验以小鼠原代骨骼肌上皮细胞为材料,利用Mo浓度分别为0(Ⅰ组)、0.1(Ⅱ组)、0.2(Ⅲ组)、0.4(Ⅳ组)、0.8 mmol/L(Ⅴ组)的培养基对其进行细胞培养24 h。倒置显微镜观察细胞形态变化,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞活力,比色法检测细胞抗氧化能力及氧化损伤,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质免疫印迹(Western-blot)测定细胞骨架蛋白波形蛋白(Vimentin)、α-肌动蛋白(α-actin)、β-肌动蛋白(β-actin)的mRNA和蛋白表达。结果显示:1)Ⅰ和Ⅱ组细胞形态正常,Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组细胞间隙增大,细胞肿大,且Ⅴ组细胞出现明显畸形。2)与Ⅰ组相比,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组的小鼠骨骼肌上皮细胞活力极显著下降(P0.01)。3)与Ⅰ组相比,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组小鼠骨骼肌上皮细胞的超氧化物歧化酶活性和总抗氧化能力均极显著下降(P0.01),丙二醛含量极显著升高(P0.01)。4)与Ⅰ组相比,Ⅱ和Ⅲ组小鼠骨骼肌上皮细胞中Vimentin、α-actin和β-actin的mRNA相对表达量显著升高(P0.05),Ⅴ组显著降低(P0.05);Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组小鼠骨骼肌上皮细胞中Vimentin、α-actin和β-actin的蛋白相对表达量均显著降低(P0.05)。综上所述,小鼠骨骼肌上皮细胞在经过高浓度的Mo作用后,形态发生异常,出现畸形,细胞活力下降,细胞抗氧化能力会受到抑制从而导致了氧化损伤的加剧,同时还抑制了Vimentin、α-actin和β-actin的mRNA和蛋白的表达。     

香菇多糖对脂多糖刺激的仔猪空肠细胞死亡信号通路相关基因表达的影响

本试验旨在探讨香菇多糖对脂多糖(LPS)刺激的仔猪空肠细胞死亡信号通路相关基因表达的影响。选取24头健康的28日龄“杜×长×大”断奶仔猪,平均体重为(8.12±0.19)kg,随机分为4组,每组6个重复,每个重复1头猪。试验采用2×2因子设计,主因子分别为饲粮处理(基础饲粮或基础饲粮中添加0.02%的香菇多糖)和免疫应激处理(注射生理盐水或LPS)。试验第28天,免疫应激组仔猪腹膜注射100μg/kg体重(BW)的LPS或生理盐水。注射LPS或生理盐水4 h后,仔猪麻醉屠宰,取空肠样品待测。试验期为28 d。结果表明:1)LPS刺激导致仔猪空肠绒毛萎缩,肠上皮脱落,肠道形态受损;饲粮添加香菇多糖缓解了LPS刺激所导致的肠道形态结构损伤。2)LPS刺激显著提高了空肠程序性坏死信号通路关键基因受体互作蛋白激酶3(RIP3)mRNA的相对表达量(P<0.05),显著降低了动力相关蛋白1(Drp1)和混合系列蛋白激酶结构域样蛋白(MLKL)mRNA的相对表达量(P<0.05)。饲粮添加香菇多糖显著降低了空肠程序性坏死信号通路关键基因受体互作蛋白激酶1(RIP1)、Fas死亡结构域相关蛋白(FADD)mRNA的相对表达量(P<0.05)。3)LPS刺激显著降低了空肠焦亡信号通路关键基因凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱天冬酶(Caspase)⁃1、白细胞介素-18(IL⁃18)以及凋亡信号通路关键基因Caspase⁃9、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)mRNA的相对表达量(P<0.05),显著提高了空肠焦亡信号通路关键基因核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、消皮素D(GSDMD)及凋亡信号通路关键基因Caspase⁃8 mRNA的相对表达量(P<0.05)。饲粮添加香菇多糖显著降低了空肠焦亡信号通路关键基因NLRP3 mRNA的相对表达量(P<0.05)及凋亡信号通路关键基因Caspase⁃9和原癌基因蛋白xl(Bcl⁃xl)mRNA的相对表达量(P<0.05)。4)LPS刺激显著降低了空肠自噬信号通路关键基因自噬相关基因12(Atg12)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和Unc⁃51样激酶1(ULK1)mRNA的相对表达量(P<0.05)。饲粮添加香菇多糖显著降低了空肠自噬信号通路关键基因Atg12、LC3和ULK1 mRNA的相对表达量(P<0.05)。由此可见,饲粮添加香菇多糖是通过调控程序性坏死、焦亡和自噬信号通路关键基因,从而维持肠道完整性。     

生精细胞特异性敲除ARHGEF15基因对小鼠精子发生的影响

本实验旨在探究鸟苷酸交换因子15(ARHGEF15)基因在小鼠睾丸中的表达模式及其对精子发生的影响，本研究通过免疫组化和免疫荧光双染色实验检测ARHGEF15蛋白在5日龄和成年（8～9周龄）小鼠睾丸中的表达模式，并利用Cre-LoxP系统特异性敲除小鼠生精细胞内的ARHGEF15基因。结果显示：在5日龄小鼠睾丸中，ARHGEF15蛋白主要表达于精原细胞的细胞质和/或细胞膜，在成年小鼠睾丸中ARHGEF15蛋白主要定位于支持细胞的细胞核；条件性敲除（cKO）组小鼠睾丸的形态大小、组织学结构、精子的运动性能及形态与对照组相比无显著差异，且cKO组小鼠的繁育力也不受影响。因此，ARHGEF15基因主要在发育早期小鼠睾丸的生精细胞中表达，敲除生精细胞内的ARHGEF15基因不影响小鼠的繁殖能力和精子发生。     

玉屏风多糖对草鱼肠黏膜形态结构及主要免疫与吸收相关基因表达的影响

本试验旨在探讨不同比例玉屏风多糖对草鱼肠黏膜形态结构及主要免疫与吸收相关基因表达的影响。试验选择750尾平均体重为(74.50±2.50)g的健康草鱼,随机分为5组,每组6个重复,每个重复25尾。对照组(Ⅰ组)投喂基础饲料,试验组(Ⅱ~Ⅴ组)投喂在基础饲料基础上分别添加0.8、1.2、1.6、2.0 g/kg玉屏风多糖的试验饲料。预试期7 d,正试期28 d。结果表明:1)与对照组相比,在试验第14天时,Ⅴ组的隐窝深度显著降低(P0.05),而绒腺比则显著提高(P0.05)。2)对照组相比,在试验第7天时,Ⅲ和Ⅳ组头肾中白介素-2(IL-2)mRNA相对表达量显著或极显著提高(P0.05或P0.01),Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组头肾中干扰素γ(IFN-γ)mRNA相对表达量均极显著提高(P0.01),Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组肠道中钠葡萄糖转运蛋白1(SG LT-1)和葡萄糖转运蛋白2(GLUT-2)mRNA相对表达量显著或极显著提高(P0.05或P0.01))。3)与对照组相比,在试验第14天时,Ⅳ和Ⅴ组头肾中IL-2 mRNA相对表达量极显著提高(P0.01),Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组头肾中IFN-γmRNA相对表达量显著或极显著提高(P0.05或P0.01),Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组肠道中SG LT-1和G LUT-2 mRNA相对表达量极显著提高(P0.01)。4)与对照组相比,在试验第21天时,Ⅳ组头肾中IL-2 mRNA相对表达量显著提高(P0.05),Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组头肾中IFN-γmRNA相对表达量极显著提高(P0.01),Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组肠道中SG LT-1和G LUT-2 mRNA相对表达量显著或极显著提高(P0.05或P0.01)。5)与对照组相比,在试验第28天时,Ⅳ和Ⅴ组头肾中IL-2 mRNA相对表达量极显著提高(P0.01),Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组头肾中IFN-γmRNA相对表达量显著或极显著提高(P0.05或P0.01),Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组肠道中SGLT-1 mRNA相对表达量显著或极显著提高(P0.05或P0.01)。综上所述,在草鱼饲料中添加一定量的玉屏风多糖能够改善肠黏膜形态结构,促进肠道中SGLT-1和GLUT-2基因的表达,调控头肾中IL-2和IFN-γ基因的表达,从而提高肠道吸收功能、增强机体免疫力。从节约饲养成本出发,草鱼饲料中玉屏风多糖最适添加量为1.6 g/kg。     

硒对铅致小鼠睾丸间质细胞凋亡的影响

【目的】探究硒对铅致小鼠睾丸间质细胞凋亡的影响。【方法】以小鼠睾丸间质细胞为研究对象,分为对照组、硒组、铅组和硒+铅组：硒组在细胞培养液中添加2μmol/L亚硒酸钠;铅组在细胞培养液中添加40μmol/L醋酸铅;硒+铅组在细胞培养液中联合添加2μmol/L亚硒酸钠+40μmol/L醋酸铅,体外培养24 h。采用MTT法检测细胞增殖情况;检测细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;使用化学荧光法测定活性氧(ROS)水平;运用实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测凋亡相关基因天冬氨酸半胱氨酸酶-3(Caspase3)、Caspase8、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA和蛋白表达水平。【结果】与对照组相比,铅组细胞增殖显著受到抑制(P<0.05),MDA含量和ROS水平显著上升(P<0.05),SOD和GSH-Px活性显著下降(P<0.05),同时,铅显著上调了Caspase3、Caspase8、Bax的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),显著下调了...     

Wnt信号通路对小鼠结肠炎症及肠道功能细胞的影响

本试验旨在研究Wnt信号通路对小鼠结肠形态结构、细胞炎性因子和肠道功能细胞的影响。选取18只8周龄雄性C57BL/6小鼠，随机分为对照组和Wnt抑制剂组。Wnt抑制剂组给与小鼠腹腔注射5 mg/kg体重的LGK974，每天1次，持续7 d；对照组注射等量体积的二甲基亚砜（DMSO）。饲养至第9天处死，取小鼠结肠组织待测。结果表明：(1)与对照组相比，LGK974组小鼠体重从第5天开始显著下降，第6至8天极显著下降，且疾病活动指数极显著上升；(2) LGK974组的小鼠结肠长度不受影响，但隐窝深度显著降低，且隐窝的完整性遭到明显破坏；(3) LGK974组的结肠炎性细胞因子IL-6和IL-1β的mRNA表达均显著上调，且TNF-α表达有上调的趋势；(4) LGK974处理能降低结肠Wnt信号通路关键基因Wnt3a和Axin2的mRNA相对表达量；(5) LGK974组的结肠PCNA、Ascl2、Lgr5、Muc2、ChgA和Villin基因mRNA表达显著下降，且Alpi基因的mRNA表达有降低的趋势。以上结果表明抑制Wnt信号通路能破坏结肠的隐窝结构，诱发炎症反应，并导致结肠各种功能细...     

锌、铜对实验性钼中毒绵羊肝脏、肾脏中钼含量的影响

小尾寒羊20只,随机分为5组,分别口服钼、铜和锌(mg/kg),Ⅰ组30mg/kg钼、Ⅱ组30mg/kg钼+15mg/kg铜、Ⅲ组30mg/kg钼+15mg/kg锌、Ⅳ组30mg/kg钼+15mg/kg铜+15mg/kg锌,Ⅴ组去离子水。试验90d期满,采取肝脏和肾脏,硫酸-高氯酸消化,原子吸收法测定钼、锌、铜含量,结果显示,Ⅰ组肝脏钼含量与第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组差异极显著(P<0.01),Ⅱ、Ⅲ组与Ⅳ、Ⅴ组差异极显著(P<0.01);Ⅳ组肝脏铜含量与Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ组差异极显著(P<0.01),与Ⅱ组差异显著(P<0.05),Ⅱ组肝铜含量与Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ组差异极显著(P<0.01);组间肝脏锌含量均差异极显著(P<0.01)。Ⅰ、Ⅲ组肾钼含量显著高于Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ组(P<0.01);Ⅱ与Ⅳ、Ⅴ组差异极显著(P<0.01);肾铜含量Ⅲ组与Ⅰ组差异极显著(P<0.01);Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组与Ⅰ、Ⅴ组差异极显著(P<0.01);各组肾脏锌含量差异均极显著(P<0.01)。结果表明,30mg的钼可使肝脏钼含量显著增加(P<0.01),锌、铜含量降低。锌对肝脏钼有很好的颉抗作用,铜、锌有效地降低了钼在组织中的蓄积。     

不同硒浓度日粮对小鼠肝脏和睾丸组织中部分硒蛋白mRNA水平的影响

选取80只7周龄雄性BALB/c小鼠,随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组,每组20只,使Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组基础日粮中硒含量达到0.045、0.1、0.4和0.8 mg/kg。结果表明:①Ⅰ组能显著降低小鼠肝脏中硒的沉积量(P<0.05);②Ⅰ组谷胱甘肽过氧化物酶1(glutathione peroxidase 1,GPx1)的mRNA相对表达量明显低于Ⅱ、Ⅲ组(P<0.05),且Ⅱ、Ⅲ组在肝脏中差异显著(P<0.05),在睾丸中差异不显著(P>0.05);③Ⅰ、Ⅲ组肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPx4)的mRNA相对表达量差异不显著(P>0.05),但均显著低于Ⅱ组(P<0.05),而各试验组间在睾丸中差异均不显著(P>0.05);④随着日粮中硒添加量的增加,肝脏和睾丸中硫氧还蛋白还原酶2(thioredoxin reductase 2,TrxR2)的mRNA相对表达量显著提高(P<0.05)。因此,在肝脏和睾丸组织中,饲喂低硒饲料能显著降低硒的沉积量和GPx1、GPx4、TrxR2的mRNA相对表达量(P<0.05);而饲喂高硒饲料能显著降低GPx1的mRNA相对表达量(P<0.05),同时显著增加TrxR2的mRNA相对表达量(P<0.05)。提示,硒对GPx1、GPx4和TrxR2 mRNA相对表达量的调节存在组织差异性。     

蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2基因mRNA在小鼠睾丸发育过程中的表达

为探讨蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2 mRNA在小鼠出生后睾丸发育过程中的表达规律,本试验以16组出生后不同发育阶段的昆明种健康小鼠的睾丸组织为材料,经Real-time PCR检测小鼠出生后睾丸中Shp2基因mRNA的表达变化。结果显示,Shp2基因mRNA在小鼠出生后睾丸发育过程中连续表达,且第20~31天出现明显波动,20 d时Shp2表达量极显著增加(P<0.01),然后下降(P<0.01),在31 d再次极显著增加(P<0.01),31 d后,Shp2的表达量又逐渐恢复平稳(P>0.05)。上述结果表明,Shp2基因的连续性表达及在特定发育阶段表达量的明显波动,预示着Shp2参与小鼠出生后睾丸发育的全过程,但具体作用如何还有待进一步研究。     

牦牛和犏牛睾丸CPT1a和ETHE1基因mRNA水平比较研究

试验旨在探索牦牛杂交雄性不育后代(犏牛)睾丸脂肪酸氧化特点及其与雄性不育的关联性,阐明犏牛雄性不育的分子机制。以GAPDH和18SrRNA基因为双内参,建立了牦牛和犏牛肝脏型棕榈酰肉碱转移酶1a(CPT1a)和硫双加氧酶1(ETHE1)基因mRNA水平的实时荧光定量PCR检测方法,结果发现,该实时荧光定量PCR方法扩增特异性好,扩增效率为98.5%~107.8%,标准曲线线性关系好。采集成年牦牛(n=9)和雄性不育犏牛(n=7)睾丸和附睾,通过常规组织切片和HE染色检测,证实犏牛睾丸和附睾中无精子,而牦牛睾丸和附睾中有精子。试验进一步从牦牛和犏牛睾丸中提取总RNA,测定睾丸中CPT1a和ETHE1基因的mRNA水平,结果显示,犏牛睾丸中CPT1a和ETHE1基因mRNA水平分别显著和极显著高于牦牛(P0.05;P0.01)。CPT1a基因mRNA水平的提高表明犏牛睾丸中脂肪酸β-氧化能力的加强;而ETHE1基因mRNA水平的增加可促进线粒体呼吸链的电子传递和脂肪酸氧化,或影响其他能量代谢通路,这两种基因mRNA水平的提高均有助于睾丸脂肪酸的β-氧化供能。本研究结果表明,与牦牛睾丸相比,雄性不育犏牛睾丸的脂肪酸氧化供能水平加强,可能对脂肪酸燃料分子有更多的依赖性。     

褪黑素核受体RORα对小鼠睾丸间质细胞凋亡的作用

为研究核受体RORα对小鼠睾丸间质细胞凋亡的作用,实验使用褪黑素(MT)、核受体RORα拮抗剂SR1001、MT+SR1001、无血清培养液处理小鼠睾丸间质细胞36 h,检测细胞活力、细胞凋亡率以及凋亡相关基因Bcl2、Bax mRNA表达量。结果表明:与对照组相比,褪黑素可极显著降低细胞凋亡率、提高细胞活力及抗凋亡基因Bcl2 mRNA表达量(P<0.01),抑制促凋亡基因Bax mRNA表达量(P<0.05);与MT组相比,MT+SR1001处理后细胞活力(P<0.05)及Bcl2表达量(P<0.01)降低,细胞凋亡率极显著上升(P<0.01),Bax表达量显著上升(P<0.05)。结果提示,褪黑素可通过RORα途径抑制小鼠睾丸间质细胞凋亡。     

BCG感染巨噬细胞后内质网应激对细胞焦亡的调控作用

旨在探讨牛分枝杆菌疫苗株卡介苗（Bacillus Calmette-Guérin,BCG）感染人单核巨噬细胞THP-1细胞后内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）对细胞焦亡的调控作用及分子机制。在BCG单独感染THP-1细胞或与ERS抑制剂TUDCA共处理细胞后,采用qRT-PCR检测ERS标志性分子GRP78,细胞焦亡标志性分子GSDMD、Caspase1、NLRP3、IL-1β和IL-18在mRNA水平的表达,采用Western blot检测GRP78、Caspase12、GSDMD、Caspase1和NLRP3在蛋白水平的表达,采用ELISA检测IL-1β和IL-18的释放量,采用CCK-8检测细胞存活率。结果表明：在BCG单独感染THP-1细胞不同时间后,GRP78在mRNA水平和蛋白水平的表达均随感染时间延长而升高（P<0.01）,GSDMD蛋白表达在24 h达到最高,IL-1β和IL-18在mRNA水平的表达呈时间依赖性（P<0.01）。在BCG单独感染或与TUDCA共同作用细胞24 h后,与未感染对照组相比,BCG感染组GRP78、GSDMD、Caspase1、NLRP3、IL-1β和IL-18 mRNA水平表达上调（P<0.05）,GRP78、Caspase12、GSDMD、Caspase1和NLRP3蛋白水平表达上调（P<0.001）,IL-1β和IL-18的浓度增加（P<0.01）,细胞存活率下降（P<0.001）,而经TUDCA预处理的BCG感染组与BCG单独感染组相比,以上分子的表达下降,细胞存活率上升（P<0.01）。综上表明,在BCG感染THP-1细胞后,引起的ERS对细胞焦亡具有调控作用。     

蒙药红花清肝13味丸治疗CCl4诱导小鼠肠道损伤的转录组测序分析研究

[目的]筛选参与四氯化碳(CCl₄)诱导的小鼠肠道损伤以及蒙药红花清肝13味丸治疗过程的重要信号通路及基因。[方法]将18只6～8周龄、体重为20～22 g的雄性C57BL/6小鼠随机分为3组,即空白对照组(n=6)、模型组(n=6)和治疗组(n=6)。空白对照组与模型组每天灌胃1次生理盐水,剂量为10 m L/(kg·BW),连续7 d;治疗组每天灌胃1次红花清肝13味丸,剂量为616.5 mg/(kg·BW),连续14 d;最后一次灌胃4 h后,空白对照组腹腔注射橄榄油,模型组和治疗组腹腔注射CCl₄橄榄油混合物(CCl₄∶橄榄油=1∶4,V/V),剂量均为10 m L/(kg·BW)。肠道损伤处理后第2天,分别采集3组小鼠十二指肠组织,进行高通量转录组测序。利用获得的测序数据,对差异表达基因进行预测和功能分析以及KEGG信号通路富集,筛选红花清肝13味丸治疗后显著下调信号通路富集的基因群,并与红花清肝13味丸药物靶点基因进行互交分析。[结果](1)转录组测序分析表明,与空白对照组相比,模型组与治疗组分别获得了1 4...     

睾丸肾上腺素能受体和胆碱能受体的分布及神经递质对睾丸间质细胞增殖的影响

试验旨在研究不同发育时期小鼠睾丸肾上腺素能受体(β1AR、β2AR、β3AR、α1A、α1B和α1D)和胆碱能受体(M1、M2、M3、M4和M5)mRNA的表达,以及神经递质去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)和乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)对发育期小鼠睾丸间质细胞增殖的影响。RT-PCR结果表明,β1AR和β2AR mRNA在睾丸发育的3个时期都表达,β3AR、α1A和α1B mRNA在小鼠发育早期的睾丸表达,在成年期睾丸不表达,α1D mRNA在睾丸发育的早期不表达,成年期表达;胆碱能受体M1R、M2R、M3R和M5R mRNA在睾丸发育的3个时期都表达,而M4R mRNA主要在成年期表达。另外通过NE和Ach处理体外培养的发育期睾丸间质细胞,发现Ach处理组BrdU阳性细胞的数量明显增加(P＜0.01)。结果表明,肾上腺素能受体和胆碱能受体在小鼠睾丸的整个发育时期都表达,Ach可促进发育期小鼠睾丸间质细胞的增殖。     

公山羊Protamine 1 mRNA表达特性及与精液品质相关性的研究

旨在研究雄性山羊主要繁殖器官中PRM1mRNA表达特性,分析精子PRM1mRNA表达与精液品质参数的相关性。本研究通过荧光定量PCR技术分析PRM1mRNA表达规律,利用免疫组化技术对睾丸中PRM1蛋白进行定位,并应用GraphPad Prism 5软件分析精子PRM1mRNA表达量与精液品质指标的相关性。结果显示,PRM1mRNA在睾丸中高度表达,其次是附睾,睾丸中PRM1mRNA表达量是附睾头的247倍,附睾头显著高于附睾体和尾(P0.05),在剩余其他组织中微量表达。在周岁之前,睾丸中PRM1mRNA表达量随着月龄增加而增加,12月龄的表达量显著高于9月龄的表达量(P0.05),9月龄表达量显著高于其他低月龄的表达量(P0.05)。精子PRM1mRNA的表达量与精子活力(R2=0.586 0,P=0.000 5)、精子密度(R2=0.442 2,P=0.004 9)呈显著正相关。山羊PRM1在长形精子细胞和精子细胞中表达,睾丸其他生精细胞及间质细胞中无表达。山羊PRM1mRNA表达具有时空表达特性,PRM1mRNA表达量可以作为评价公羊繁殖力的指标。     

小鼠Wip1基因的表达及其对受精能力的影响

本研究旨在探讨Wip1基因的表达及其对精子受精能力的影响,为阐明Wip1基因对雄性繁殖的影响提供新的着眼点。选取相同饲养环境、同一遗传背景的8周龄左右的野生型雄鼠,利用实时荧光定量PCR技术检测Wip1基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑组织及雄性生殖器官中的表达情况,利用免疫荧光技术检测Wip1蛋白在睾丸组织及精子细胞中的分布情况。以Wip1敲除型雄鼠为试验组,野生型雄鼠为对照组,利用ELISA试剂盒检测两组小鼠血清中睾酮水平;通过体外受精试验比较两组的2-细胞率及囊胚率。结果显示,Wip1基因mRNA在野生型雄鼠各组织中广泛表达,且在雄性生殖器官中表达量较高,其中睾丸中表达量最高,附睾体、附睾头、附睾尾次之;Wip1蛋白主要定位于睾丸组织中的长形精子细胞及附睾成熟精子细胞的头部。ELISA检测结果发现,与野生型雄鼠相比,Wip1敲除型雄鼠血清内睾酮含量极显著下降(P0.01)。体外受精结果表明,Wip1敲除后2-细胞率及囊胚率均极显著下降(P0.01)。结果表明,Wip1基因敲除能够引起雄性小鼠受精能力降低,这可能与Wip1基因在精子发生过程中发挥作用相关。     

褪黑素对小鼠睾丸间质细胞凋亡的影响

褪黑素是机体可自身合成并分泌的一种内源性物质,对维持哺乳动物的繁殖性能具有重要作用,但其对小鼠睾丸间质细胞凋亡的影响尚不明确。本实验旨在研究褪黑素对小鼠睾丸间质细胞凋亡的影响,以小鼠睾丸间质细胞系(TM3)为研究对象,对照组中直接加入培养液,不同浓度处理组中分别在培养液中加入1、10、100、1 000 ng/mL褪黑素处理细胞36 h后,检测细胞活力、细胞凋亡率以及凋亡相关基因BAX、BCL-2mRNA和蛋白表达。结果表明:与对照组相比,10ng/mL褪黑素提高了小鼠睾丸间质细胞活力(P<0.01),降低细胞凋亡水平(P<0.05),极显著提高了抑凋亡基因BCL-2表达,降低了促凋亡基因BAX表达(P<0.01)。结果提示,褪黑素可抑制小鼠睾丸间质细胞凋亡。