脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导血管内皮细胞凋亡及其凋亡相关因子的初步研究

脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）是由镰刀菌属病原真菌产生的真菌毒素之一,在自然界广泛存在,可引起人畜中毒。为了解DON对血管内皮细胞的危害及其可能机制,本试验采用不同浓度的DON（0.25-10μg/mL）作用于猪髋动脉内皮细胞（PIEC）和人脐静脉内皮细胞（HUVEC）2种细胞24 h,倒置显微镜下观察其形态变化,MTT法测定细胞增殖的变化,TUNEL法检测细胞凋亡率,免疫组织化学染色方法测定细胞凋亡过程中Caspase-9和Bax表达的变化。结果显示,高浓度DON可明显改变细胞的形态;不同浓度的DON均可抑制细胞的增殖;TUNEL凋亡检测结果显示,不同浓度的DON对这2种细胞均有诱导凋亡的作用;对于PIEC细胞,在DON浓度为0.5μg/mL时,凋亡率达到最高（71.74%）;HUVEC细胞则在DON浓度为5μg/mL时,凋亡率达到最高（26.61%）,此后随浓度的升高,凋亡率下降,可能与凋亡细胞崩解脱离细胞片有关。根据试验结果初步推断,DON诱导PIEC凋亡可能与Caspases途径有关,Bax在其中起到了一定的凋亡促进作用;而在诱导HUVEC细胞凋亡的过程中未检测到Caspase-9和Bax的变化,故认为DON诱导HUVEC细胞凋亡与Caspases途径和促凋亡因子Bax均无关。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇的代谢特征

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对以谷物为基础的食物和饲料的污染是一个全球性问题,严重危害了人和动物的健康。DON在人和动物体内的代谢特征是开展DON暴露评估、毒性作用机制和干预技术等研究的基础。近年来有关DON的吸收、分布、代谢和排泄等毒物动力学的研究引起了国内外广泛关注。本文将DON代谢特征的最新进展进行了全面的综述。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫胶体金试剂板的研制

建立了一种快速检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的免疫胶体金检测方法.利用柠檬酸三钠还原法制备直径40 nm的胶体金溶液,利用胶体金标记抗DON单克隆抗体制备胶体金免疫复合物,将DON-BSA和羊抗鼠IgG分别固定在NC膜的检测线和质控线上,依次将样品垫、胶体金结合垫、NC膜和吸水垫粘贴到PVC膜上,组装成试剂板.该试剂板灵敏度可达到500 μg/kg,15 min内即可完成检测;特异性好,与其他霉菌毒素无交叉反应;稳定性、准确性均较好.该胶体金免疫层析试剂板使用方便、快速,且不需要任何仪器设备辅助,可开发作为一种大批量检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇样本的筛选手段.     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇的毒性作用及其机理

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)是谷物中最为常见的一种真菌毒素,其降低畜禽的生产性能,并且对动物免疫系统、细胞信号传导和基因的表达均有不同程度的影响。本文从DON的物理特性、代谢,尤其是其对动物采食量、免疫系统、肠道功能、细胞凋亡、基因表达和丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路等方面的影响及机理以及降解的一般方法作一综述,以期为DON的进一步研究和谷物中DON的降解提供参考。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对蛋鸡肠道健康的影响

试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）对蛋鸡肠道形态结构、炎症因子、紧密连接蛋白表达的影响。选取26周龄产蛋率一致的海兰褐蛋鸡80只,随机分为4组,每组4个重复,每个重复5只,对照组每天灌服等量生理盐水,试验组每天分别灌服1、5和10 mg/kg·BW的DON,连续灌服6周。结果显示：与对照组相比,5和10 mg/kg DON组肠道形态结构均受到不同程度损伤,出现黏膜脱落、绒毛数量减少的现象,绒毛长度显著降低,隐窝深度增加,且呈剂量-效应关系（P<0.05或P<0.01）。DON剂量≥5 mg/kg时,白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)、紧密连接蛋白-1(ZO-1)和紧密连接跨膜蛋白（claudin-1）的基因表达水平降低（P<0.05或P<0.01）;DON剂量为10 mg/kg时,紧密连接蛋白-1(ZO-1)和紧密连接跨膜蛋白（claudin-1）的蛋白表达也显著降低（P<0.05）;DON剂量为1 mg/kg时,白细胞介素8(IL-8)表达水平显著增加（P<0.01）。表明DON高于5 mg/kg·BW时能显著破坏蛋鸡肠道...     

利用生物酶对脱氧雪腐镰刀菌烯醇进行生物脱毒

安全有效地去除霉菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON),是确保食品安全的一件迫在眉睫的事。从具有DON脱毒活性的微生物中分离出的酶,为缓解这一问题提供了有应用前景的替代品。然而,在实用性应用这些酶之前,必须解决一些关键挑战。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇的免疫毒性研究进展

脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol,DON）是一种单端孢霉烯族毒素,主要由禾谷镰刀菌、尖孢镰刀菌、串珠镰刀菌、拟枝孢镰刀菌、粉红镰刀菌、雪腐镰刀菌等镰刀菌产生,由于它可以引起猪的呕吐,故又名呕吐毒素（vomitoxin,VT）。DON纯品1970年首先从日本香川县感染赤霉病的大麦中分离到并命名。这种毒素广泛存在于霉变的小麦、大麦、燕麦、玉米等谷类作物、发霉的饲料以及被污染的肉、奶等动物性食品中,人畜摄入了被DON污染的食物后,会导致厌食、呕吐、腹泻、发烧、站立不稳和反应迟钝等中毒症状,严重时损害造血系统造成死亡（Plattneretal,2003;敖志刚和陈代文,2008）。     

免疫组织化学法定位肝脏中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的初步研究

本研究旨在探索定位肝脏中脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynival,DON）的方法,为以后定位全身组织中的DON提供方法依据。选用刚断奶的二元白猪,保定后,耳缘静脉滴注葡萄糖盐水,外科手术法暴露其肝脏,采用微量进样器缓缓注入DON,采用免疫组织化学染色结合显微镜观察,对肝脏中的DON进行定位研究,可以在注射针眼附近定位到DON。免疫组织化学法可以作为一种定位组织中DON的方法。     

配合饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的允许量

本刊讯2007年2月16日,国家质量监督检验检疫总局、国家标准化管理委员会发布的国家强制性标准GB20833-2007配合饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的允许量,于2007年3月1日起实施。     

柔嫩艾美耳球虫裂殖子对侵入细胞凋亡抑制通路的研究

为了研究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenlla)裂殖子入侵宿主细胞后对凋亡诱导的抑制通路,将纯化的裂殖子与牛肾传代细胞(MDBK细胞)共培养1.5 h。用含6%乙醇的完全培养基诱导细胞凋亡2.5 h,通过流式细胞术检测细胞凋亡率。采用标准试剂盒测定Cyto C,Caspase8,Caspase9,Caspase3的活性。流式细胞术结果显示,入侵裂殖子的细胞在诱导凋亡后其凋亡率为4.57%,而未感染的细胞其凋亡率达到23.69%,二者差异显著(P0.05),诱导凋亡的MDBK细胞早期凋亡率为19.50%,晚期凋亡率为4.19%,而感染裂殖子后诱导凋亡的MDBK细胞其早期凋亡率为3.53%,晚期凋亡率为1.04%,差异显著(P0.05)。结果表明,裂殖子的入侵不但可以抑制细胞凋亡,还可以延缓细胞进入早期凋亡的时间。试剂盒结果表明,裂殖子使Cyto C,Caspase8,Caspase9的活性下降,而Caspase3没有变化。根据上述结果初步判断,E tenlla裂殖子抑制MDBK细胞的凋亡是通过线粒体通路。     

Gossypol acetic acid induces apoptosis in RAW264.7 cells via a caspase-dependent mitochondrial signaling pathway

To investigate the effects of gossypol acetic acid (GA) on proliferation and apoptosis of the macrophage cell line RAW264.7 and further understand the possible underlying mechanism responsible for GA-induced cell apoptosis, RAW264.7 cells were treated with GA (25~35 µmol/L) for 24 h and the cytotoxicity was determined by MTT assay, while apoptotic cells were identified by TUNEL assay, acridine orange/ethidium bromide staining and flow cytometry. Moreover, mitochondrial membrane potential (ΔΨ_m) with Rhodamine 123 and reactive oxygen species (ROS) with DCFH-DA were analyzed by fluorescence spectrofluorometry. In addition, the expression of caspase-3 and caspase-9 was assessed by Western Blot assay. Finally, the GA-induced cell apoptosis was evaluated by flow cytometry in the present of caspase inhibitors Z-VAD-FMK and Ac-LEHD-FMK, respectively. GA significantly inhibited the proliferation of RAW264.7 cells in a dose-dependent manner, and caused obvious cell apoptosis and a loss of ΔΨ_m in RAW264.7 cells. Moreover, the ROS production in cells was elevated, and the levels of activated caspase-3 and caspase-9 were up-regulated in a dose-dependent manner. Notably, GA-induced cell apoptosis was markedly inhibited by caspase inhibitors. These results suggest that GA-induced RAW264.7 cell apoptosis may be mediated via a caspase-dependent mitochondrial signaling pathway.     

mTOR信号通路在镉诱导PC12细胞凋亡和Bcl-2、Bax蛋白表达中的作用

为研究雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路在镉诱导神经细胞凋亡和相关蛋白Bcl-2、Bax表达中的作用,用醋酸镉和/或雷帕霉素(rapamycin,Rap)染毒PC12细胞24h,流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡形态学变化,Western blot法检测Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果显示:与对照组相比,染毒组细胞凋亡和Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低,Bcl-2/Bax极显著降低(P<0.01);与镉染毒组相比,镉与Rap联合作用组细胞凋亡和Bax蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高,Bcl-2/Bax显著升高(P<0.05)。结果表明:镉可能通过激活mTOR信号通路调节Bcl-2和Bax的表达,从而诱导神经细胞凋亡。     

Effects of ZEA,DON and Their Combined Effects on the Secretion of Cytokines in CTLL-2 Cells

To analyze the effects of ZEA or/and DON on the immunologic function,CTLL-2 cell was used as experimental materials. After exposing the CTLL-2 cell to different concentrations of ZEA (0,5,10,20 μg/mL),DON (0,0.5,1,2 μg/mL) and ZEA+DON (blank group,5 μg/mL ZEA,0.5 μg/mL DON,5 μg/mL ZEA+0.5 μg/mL DON) for 48 h,the concentration of GZMB,PFP,IFN-γ and TNF-α in CTLL-2 cell and supernatant fluid were detected by ELISA method. The result showed that DON and ZEA could reduce the concentration of PFP,GZMB and IFN-γ in the CTLL-2 cells and the culture supernatant fluids,and increase the concentration of TNF-α. The intoxicated group had significant or extremely significant difference compared to control group (P <0.05;P <0.01),which showed the dose effect. The group exposed to the combined of ZEA and DON showed an additive effect. The result indicated that ZEA,DON and the two combined could reduce the killing activity of immunological cell by affecting the secretion of immunological cytokines, and indirectly affect the negative feedback regulation of humoral immunity and cellular immunity,which led to the decline of immune function in animals.     

ZEA、DON及其联合染毒对CTLL-2细胞因子分泌的影响

为研究镰刀菌毒素玉米赤霉烯酮（ZEA）、脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）及其联合作用对动物免疫功能的影响,试验以CTLL-2细胞（细胞毒性T淋巴细胞株）为材料,用不同浓度的ZEA （0、5、10、20 μg/mL）、DON （0、0.5、1、2 μg/mL）及联合（空白组、5 μg/mL ZEA、0.5 μg/mL DON、5 μg/mL ZEA＋0.5 μg/mL DON）处理CTLL-2细胞48 h,采用ELISA法检测了细胞内及培养上清液中颗粒酶B （GZMB）、穿孔素（PFP）、干扰素γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）等细胞因子的含量。结果显示,ZEA、DON能够降低CTLL-2细胞胞内及培养上清液中PFP、GZMB、IFN-γ的浓度,增加TNF-α浓度,染毒组与对照组相比均有显著或极显著差异（P＜0.05;P＜0.01）,且均呈剂量效应关系;ZEA、DON联合染毒表现为加性效应。结果表明,ZEA、DON及其联合作用可通过影响免疫细胞因子的分泌,降低免疫细胞杀伤活力,间接影响机体体液免疫和细胞免疫的负调节,从而导致动物机体免疫机能下降。     

细胞凋亡的信号通路和检测方法

细胞凋亡是一种主动的、高度有序的、受基因精细调控及一系列酶参与的细胞生理性死亡过程。细胞凋亡在多细胞生物的组织分化、器官发育、机体稳态的维持中有着重要意义,与疾病的发生发展密切相关。本文综述了细胞凋亡的生物学意义、机制及其检测方法。     

T-2毒素对大鼠离体培养卵巢颗粒细胞凋亡的影响

将未成熟的Wistar大鼠卵巢颗粒细胞进行原代培养,用不同浓度的T-2毒素染毒细胞24 h.染毒结束后,采用MTT法检测细胞相对活力,荧光染料Hoechst 33258检测卵巢颗粒细胞的凋亡变化,RT-PCR检测凋亡调控基因Bcl-2、Bax和P53 mRNA的表达.结果显示,随着T-2毒素染毒剂量的增加,颗粒细胞的细胞活力逐渐下降;而细胞凋亡率、Bcb2、Bax、P53 mRNA表达水平、Bax mRNA/Bcl-2 mRNA比值则逐渐上升;除1 nmol/L剂量组外,其余各剂量组与对照组比较差异显著(P＜0.05).结果表明,T-2毒素可显著抑制大鼠卵巢颗粒细胞活力,诱导颗粒细胞凋亡,并呈浓度依赖关系.     

黄芪3种成分对H_2O_2诱导Chang liver细胞凋亡的抑制作用

以H2O2建立Chang liver细胞损伤模型,设空白对照组、损伤模型组、黄芪甲苷保护组、毛蕊异黄酮葡糖苷保护组、芒柄花素保护组和阳性对照组。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、微板法、流式细胞术、DNA Ladder检测等方法测定细胞存活率、细胞外液转氨酶活性、周期分布及凋亡情况。结果显示H2O2的诱导使Chang liver细胞存活率降低、活性升高、发生G0/G1期阻滞及细胞外液转氨酶、细胞凋亡率的升高,3种成分对细胞的预处理均可显著或极显著的升高细胞存活率、缓解G0/G1期的阻滞现象、并降低细胞外液转氨酶活性及细胞凋亡率(P0.05或P0.01)。表明黄芪主要成分(黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡糖苷和芒柄花素)对H2O2诱导的Chang liver细胞凋亡均有一定的抑制作用。     

动物病毒与宿主细胞的细胞凋亡

细胞凋亡(apoptosis)，又称programmed cell death(PCD)，是细胞在内外物理、化学、生物因素作用下启动系列自身调节基因而发生的一种自主死亡过程。细胞凋亡中发生了系列不同于细胞坏死(necrosis)的形态学和生化事件，其在许多生理和病理过程中具有重要生物学意义。在病毒与宿主细胞     

Canine coronavirus induces apoptosis in cultured cells

Canine coronavirus (CCoV) is widespread in dogs in several countries and causes mild enteric illness evolving to severe enteritis in young pups. In in vitro cultures canine coronaviruses generally induce extensive cell death, however nature of the events leading to cell death remains largely unknown. We analysed the induction of cytopathic effect by CCoV in a canine fibrosarcoma cell line (A-72) in order to characterize the apoptotic effect in homologous cell system. Following CCoV infection A-72 cell line, which is permissive to CCoV, showed reduced growth rate, as detected by MTT assay, a standard colorimetric assay for measuring cellular proliferation, and underwent to apoptotic death. Starting from 24h after CCoV infection, cells morphology appeared dramatically changed, with cells rounding and detachment from culture surface. Morphologic and biochemical features of apoptosis, such as blebbing of the plasma membrane, translocation of phosphatidilserine to cell surface and annexin V positive staining, nuclear fragmentation, apoptotic bodies formation and DNA laddering, were detected in CCoV-infected cells. Propidium iodide staining of infected culture indicated the appearance of hypodiploid DNA peak corresponding to apoptotic cell population. Commonly to other animal coronavirus infection caspase-3 is likely to contribute to the execution phase of apoptosis induced by CCoV in A-72 cells since we found activation of enzymatic activity as well as procaspase-3 activating cleavage. Apoptotic death of infected cells is detrimental as it causes cell and tissue destruction as well as inflammatory responses. Therefore in the case of CCoV associated gastroenteritis, apoptosis of epithelial mucosa cells may be responsible for pathology induced by CCoV infection.