淫羊藿多糖对小鼠卵泡发育的影响

对健康雌性小鼠灌服不同剂量淫羊藿多糖,研究淫羊藿多糖对卵泡发育及卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:连续灌服7 d淫羊藿多糖后,高剂量组(6 mg/0.2 mL),中剂量组(4 mg/0.2 mL)与对照组子宫卵巢系数分别为0.403%,0.245%和0.146%,差异显著(P<0.05)。灌服淫羊藿多糖后小鼠卵巢卵泡个数和直径均有所提高。卵巢组织学分析表明,随着给药剂量的增加,有腔卵泡的数量也有增加,中、高剂量组卵巢上出现黄体。卵母细胞体外成熟培养表明,中、高剂量组所获GVBD卵母细胞百分率(61.4%和73.0%)与对照组相比(50.0%)均有显著提高(P<0.05)。本研究表明,小鼠每天灌服淫羊藿多糖4⁶ mg,连续1周后可明显促进卵泡发育,并提高卵母细胞体外成熟率。     

淫羊藿苷对小鼠骨髓树突状细胞分化及成熟的影响

研究淫羊藿苷(ICA)对小鼠髓源树突状细胞(DC)分化及成熟的影响。小鼠骨髓细胞用GM-NSF和IL-4培养5 d,然后用免疫磁珠法纯化DC细胞,试验组分别加入淫羊藿苷2、5、10和20 mg/m L,空白对照组加等量RPMI-1640,阳性对照组加脂多糖(LPS),6组分别同时作用48 h。流式细胞仪检测CDllc、主要组织相容性复合物(MHC)-Ⅱ类分子及协同刺激分子CD80、CD86表达水平和细胞摄取抗原的能力,ELISA检测产生的细胞因子(IL-2、IL-10、IL-12),混合淋巴细胞反应检测细胞提呈抗原的能力。结果表明:4个添加淫羊藿苷组的CD80、CD86、CDllc、MHC-Ⅱ类分子表达水平均明显高于空白对照组,分泌IL-2、IL-10、IL-12能力比空白对照组增加,吞噬FITC-dextran的能力下降,并可促进同种异基因T细胞的增殖。说明淫羊藿苷可以促进体外培养的小鼠髓源DC的成熟,促进DC诱导的免疫应答启动。     

淫羊藿苷对辐射损伤小鼠保护作用研究

目的：探讨淫羊藿苷（ICA）对辐射损伤小鼠的保护作用。方法：将50只昆明小鼠按体重随机分为5组,3个剂量组分别按20、80、160 mg/kg体质量给小鼠灌服淫羊藿苷水溶液,正常对照组和照射对照组给予同体积生理盐水,1次/d,连续灌胃16 d。第6天照射对照组和3个剂量组小鼠用5.0 Gy60Co-γ射线进行单次全身照射。照射后第10天检测小鼠的血液学指标、脏器系数及MDA含量、SOD和GSH-Px活性。结果：与照射对照组比较,高剂量组的白细胞和GSH-Px活性显著增加（P〈0.05）,3个剂量组的血小板显著升高（P〈0.05）,SOD含量显著降低（P〈0.05）。结论：淫羊藿苷对小鼠辐射造成的损伤具有保护作用。     

黄芩苷对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

氧化应激是阻碍胚胎体外发育的重要因素之一,减少氧化应激可能是提高胚胎体外培养效果的途径。本文探讨了不同浓度黄芩苷对小鼠卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育的影响,为体外抗氧化性研究及抗氧化物选择提供参考。试验选择4～6周龄雌性昆明小鼠获取GV期卵母细胞,在体外成熟培养液中分别添加不同浓度(0、20、40、60μmol/L)的黄芩苷,经37℃、5%CO₂、饱和湿度培养条件体外成熟12 h,统计卵母细胞第一极体排出率,检测卵母细胞胞质内活性氧(ROS)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量以及培养液中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化能力(T-AOC),并采集8～10周龄雄性昆明小鼠精液,进行体外受精(IVF),分别于受精后6、24、96 h统计受精率、卵裂率和囊胚率。结果表明：体外成熟液中添加40、60μmol/L黄芩苷后,卵母细胞第一极体排出率较对照组显著提高(P<0.05),且浓度为40μmol/L极体排出率显著高于60μmol/L,但对成熟后的卵母细胞体外受精率、卵裂率、囊胚率无显著性影响(P>0.05),卵母细胞胞质RO...     

淫羊藿苷在猪卵泡体外培养过程中对颗粒细胞凋亡的抑制作用

本试验旨在研究淫羊藿苷(ICA)对猪卵泡体外培养过程中颗粒细胞凋亡的影响。设置不同浓度ICA(0、01、1、10μg/mL)添加组,体外培养猪3~5 mm健康有腔卵泡12 h和24 h后,分别收集各组卵泡颗粒细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR检测凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2和Bax mRNA相对表达水平。结果表明,猪卵泡体外培养12 h和24 h,添加1μg/mL ICA组颗粒细胞凋亡率较对照组显著降低(P005),1μg/mL组的Caspase-3、Bax mRNA表达量最低,Bcl-2 mRNA表达量最高,且显著高于对照组(P005)。研究结果提示,ICA在卵泡闭锁过程中可明显抑制颗粒细胞凋亡,这一作用可能主要是通过抑制线粒体凋亡途径而实现的。     

淫羊藿苷对生殖系统影响研究进展

淫羊藿为小檗科多年生草本植物淫羊藿和箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿、心叶淫羊藿及朝鲜淫羊藿的干燥地上部分,又名仙灵脾,始载于《神农本草经》,其性味辛、甘、温,具有补肾阳、强筋骨、祛风湿之功效,常用于肾阳虚之阳痿滑精、尿淋漓、筋骨痿软、风寒湿痹、肢体麻木等,是中药中常见的助阳药,具有很强的促进生殖效果。     

高效液相色谱法测定不同粒径淫羊藿中淫羊藿苷的溶出量

本研究旨在建立高效液相色谱法测定不同粒径淫羊藿中淫羊藿苷的溶出量。采用Shimadzu VP-ODS(150 mm×4.6 mm,5 μm)为色谱柱,以乙腈:水(25:75,V/V)为流动相,流速为1 mL/min,在270 nm波长下进样10 μL进行检测,结果显示淫羊藿苷在0.08～0.40 mg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),相对标准偏差(RSD)为1.62%,平均回收率为97.11%～101.08%,该含量测定方法简单、快速,所测定的淫羊藿苷溶出量随着淫羊藿粒径的变小而增加,但粉碎到100目以上时,淫羊藿苷的溶出量不再随粒径的减小而增加。     

β-谷甾醇、淫羊藿苷对猪精子体外获能效果的影响

探讨中药单体成分β-谷甾醇(β-sitosterol)、淫羊藿苷(Icariin,Ica)对猪精子体外获能的影响,以期提高体外受精效果.以mTBM+肝素获能液为对照组,分别添加β-谷甾醇、淫羊藿苷的低、中、高3个剂量为试验组,利用金霉素荧光染色(chlortetracycline,CTC)法结合体外受精检验体外获能效果.在mTBM+肝素中添加β-谷甾醇2(中剂量0.08 mg/L)、淫羊藿苷2(中剂量17 mg/L)的B型精子率(获能精子)显著高于对照组和其他剂量组(P＜0.05),F型精子率(未获能精子)显著低于对照组和其他剂量组(P＜0.05),AR型精子率(发生顶体反应精子)与对照组和其他剂量组差异不显著(P0.05),卵裂率和囊胚率均极显著高于对照组和其他剂量组(P＜0.01);表明中药单体成分β-谷甾醇、淫羊藿苷能够显著促进猪精子体外获能效果.     

罗格列酮对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

旨在研究体外培养中添加罗格列酮(Rosiglitazone, RSG)对小鼠卵母细胞体外成熟(IVM)的影响。收集4～6周龄雌性小鼠卵母细胞,随机分为对照组和20μmol/L RSG组。在饱和湿度,38.5℃、5%CO₂培养12 h,统计卵母细胞第一极体排出率。使用DCFH-DA检测卵母细胞内活性氧(ROS);采用CMF2HC检测卵母细胞内谷胱甘肽(GSH)水平;采用JC-1检测卵母细胞内线粒体膜电位;采用实时荧光定量PCR测定抗氧化相关基因的表达水平。结果显示,RSG组卵母细胞第一极体排出率相较于对照组显著提高(P<0.05);与对照组相比,RSG组ROS水平明显降低,GSH和线粒体膜电位水平显著升高(P<0.05)。本研究还发现,RSG组卵母细胞中抗氧化相关基因GPX-3、CAT和SOD-2的mRNA转录水平均显著提高(P<0.05)。结果表明,在体外成熟过程中添加RSG可以提高小鼠卵母细胞成熟率,降低细胞内ROS堆积,提高细胞内GSH水平、卵母细胞线粒体功能和抗氧化基因表达水平,缓解氧化应激造成的损伤,提高卵母细胞体外成熟质量。     

小鼠动情周期中卵母细胞的采集与体外成熟效果观察

本实验通过对３０只昆明白小鼠动情周期中的９９９枚卵母细胞的采集,结果表明：ＣＯＣ采集量与动情天数相关（Ｐ〈０．０１）。各天中ＣＯＣ值０ｄ最低。１ｄ这最高值,２ｄ、３ｄ下降,４ｄ上升;ＤＯ值民ＣＯＣ值相反;且ＤＯ的采集量极显著高于ＣＯＣ量（Ｐ〈０．０１）。对３３８枚卵母细胞的体外成熟结果表明。ＣＯＣ成熟率在１ｄ时达最高值。ＤＯ成熟率不受情期天数的影响。     

淫羊藿苷对性成熟雌性大鼠卵巢、子宫发育的影响

为了研究淫羊藿苷（Icariin,ICA）的促动物生殖作用,给性成熟的雌性大鼠不同剂量的ICA,观察其对大鼠卵巢和子宫重量的影响,并通过组织切片观察其对卵泡发育和子宫发育的影响。结果表明,ICA能提高大鼠卵巢和子宫重量。ICA低剂量组、高剂量组大鼠卵巢指数均显著高于对照组（P〈0.05）;ICA药物组子宫指数和阴性对照组虽然没有显著差异（P〉0.05）,但是有升高的趋势。组织切片显示,ICA能明显促进大鼠卵泡发育。药物组有腔卵泡数量明显多于对照组;ICA对子宫有一定的影响,但效果不显著。提示ICA可以促进大鼠卵巢和子宫的发育。     

虎杖苷对牛卵母细胞体外成熟的影响

为研究虎杖苷(PD)对牛卵母细胞体外成熟的影响,本实验在体外成熟液中添加不同浓度(0、0.5、1.0、2.0μmol/L)PD,对牛卵母细胞体外培养22～24 h,统计第一极体排出率,然后对各组卵母细胞进行体外受精并统计胚胎的发育情况;最后分析PD对牛卵母细胞体外成熟作用机制。结果表明:与对照组(0μmol/L)相比,PD各处理组的第一极体排出率显著提高,体外受精后的胚胎分裂率无差异,而1.0μmol/L PD处理组囊胚率较对照组显著提高,1.0、2.0μmol/L PD处理组囊胚期细胞数较对照组显著提高;进一步分析发现,与对照组相比,1.0μmol/L PD可显著降低细胞内活性氧水平,提高抗氧化基因GPX4、SOD1表达水平,显著提高细胞内总谷胱甘肽含量。综上,成熟液中添加1.0μmol/L PD可提高细胞内抗氧化基因的表达以及提高谷胱甘肽含量,降低细胞内的活性氧含量,从而有利于牛卵母细胞的成熟以及早期胚胎发育。     

白藜芦醇和淫羊藿苷对绒山羊精液冷冻品质的影响

为了解不同浓度白藜芦醇和淫羊藿苷对绒山羊精液冷冻品质的影响,本实验采集6只2岁左右、体况良好的晋岚绒山羊精液,混合后分别加到50+0μmol/mL、50+90μmol/mL、50+50μmol/mL、90+50μmol/mL、0+50μmol/mL白藜芦醇和淫羊藿苷中进行冷冻,解冻后利用CASA分析仪、流式细胞仪和酶标仪分别评估不同冷冻配方对精子活力、细胞结构完整性、抗氧化酶含量以及脂质过氧化物含量的影响。结果表明：0+50、50+90、90+50、50+0组解冻后精子活力、顶体完整率和质膜完整率高于50+50(P<0.05),但前3组之间差异不显著,其中50+90组效果最好;精子解冻后各组间DNA完整性差异不显著;50+90组超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、过氧化氢酶（Catalase,CAT）活力显著高于50+50组、90+50组和0+50组,而与50+0组差异不显著;50+90组的MDA含量显著低于50+50,与其他组差异不显著。以上结果表明,在冷冻-解冻过程中,50μmol/mL白藜芦醇+90μmol/mL淫羊藿可以有效提高精子解冻后活...     

淫羊藿苷诱导mESCs分化为心肌样细胞的研究

本研究探讨了淫羊藿苷(Icariin,ICA)对小鼠胚胎干细胞(Mouse embryonic stemcells,mESCs)定向分化为心肌样细胞的效果。试验以mESCs分化培养液为空白对照组,分别添加淫羊藿苷10-6mol.L-1(ICA1)、10-7mol.L-1(ICA2)、10-8mol.L-1(ICA3)3个剂量为试验组,对诱导后培养4周的mESCs采用免疫细胞化学法鉴定诱导后细胞中肌动蛋白T(cTnT)的表达,并计算心肌样细胞分化率;采用RT-PCR鉴定诱导后mESCs中心肌特异性基因MLC-2v、α-MHC、β-MHC、Nkx2.5、GATA-4的表达。结果在诱导后细胞中有心肌特异性蛋白cTnT表达;ICA2组分化率显著高于对照组和其他剂量组;且诱导后细胞有心肌特异性基因MLC-2v、α-MHC、β-MHC、Nkx2.5、GATA-4表达。结果表明,ICA可在体外诱导mESCs定向分化为心肌样细胞,10-7mol.L-1ICA为最佳诱导浓度。     

山羊腔前卵泡卵母细胞体外发育与体外成熟的研究

通过比较3种培养基、5个培养系统和4种培养方法对卵母细胞生长率的影响,结果发现,就卵母细胞生长率而言。以MEM HEPES培养液＋5％FCS＋40μg/mlFSH 20ng/ml IGF-1 2mmol/L cAMP 2mmol/L次黄嘌呤培养系统为佳。在腔前卵泡体外培养过程中,12个卵泡经腔期发育,约占同等培养条件下卵泡九的2％（12／603）。培养卵泡经腔期发育并未改善其卵母细胞的成熟率（0／12）。腔前卵泡卵母细胞经过不同时间的体外培养,发现经12和14d培养结不的卵母细胞中,有81％（47／58）生发泡明显迁移至质膜下;培养14d的卵母细胞中,约16．4％（9／55）产生pbI但不排出,因而在胞质中见到极体;;培养16d得到1枚排出pbI的孤雌激活卵;同时发现培养16－18d卵母细胞退化率明显增高（P＜0．01）。推测山羊腔前卵泡卵母细胞体外培养的适宜时间为16d。     

乙草胺对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

【目的】研究乙草胺对小鼠卵母细胞体外成熟的影响,为研究体内乙草胺对卵母细胞质量的影响提供参考。【方法】将收集的卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes, COCs)置于含有不同浓度(0(对照组)、10、50、100、130、200μmol/L)乙草胺的体外成熟培养液中培养14 h,统计卵母细胞第一极体排出率,进行体外受精后,统计体外受精胚胎的囊胚率,筛选出适宜于卵母细胞体外培养的乙草胺浓度。将COCs在对照组和筛选出的适宜浓度的乙草胺组成熟培养液中培养14 h后,利用DCFH-DA检测卵母细胞活性氧(ROS)水平;利用CellTracker^TM蓝色染料检测卵母细胞谷胱甘肽(GSH)水平;利用JC-1染色法检测卵母细胞线粒体膜电位水平(mitochondrial membrane potential, MMP);利用实时荧光定量PCR检测卵母细胞内凋亡相关基因的表达水平,利用Hoechst 33342染色检测体外受精胚胎的囊胚细胞总数,用Fluorescein-dUTP染色法检测囊胚细胞凋亡率。【结果】与对照组相比,100、130、20...     

淫羊藿甙对小鼠免疫功能影响的研究

为了研究淫羊藿甙(ICA)对小鼠免疫功能的影响,试验将100只6周龄健康SPF级昆明系小鼠随机分为2组,分别灌服淫羊藿甙和生理盐水,并在试验第0,1,4,7,10,13,16,19天采血进行红细胞、白细胞分类计数及血红蛋白含量的测定;同时制作血涂片进行ANAE+T淋巴细胞的检测;取脾脏、肠系膜淋巴结和胸腺进行组织学观察。结果表明:ICA能增加血液中红细胞、白细胞数量,提高血红蛋白浓度和ANAE+T淋巴细胞比率,但对免疫组织结构的影响则未见眼观变化。说明ICA对小鼠免疫功能具有一定的调节作用,但这种功能的发挥不以免疫组织的结构改变为基础。     

淫羊藿苷对大鼠腺垂体细胞合成分泌CTH的影响

通过腺垂体细胞的原代培养技术和半定量RT-PCR技术观察淫羊藿苷对大鼠腺垂体合成分泌GTH的影响。建立了腺垂体细胞总RNA的提取、FSH和LH特异基因的PCR扩增的体系和条件,并以β-actin为内参照与FSH和LH特异基因进行多重比较。结果淫羊藿苷能提高大鼠腺垂体细胞中GTHmRNA的水平,但并非与剂量呈线形关系,中剂量组(60μl/l)时大鼠腺垂体细胞中GTHmRNA的水平最高,与低剂量组(30μl/l)和高剂量组(100μl/l)差异显著。表明淫羊藿苷不但能通过直接作用与性腺来发挥“壮阳”的作用,而且其对垂体细胞也有刺激作用。     

猪卵泡卵母细胞体外成熟与冷冻保存

研究了激素、猪卵泡液、不同类型血清对猪卵泡卵母细胞体外成熟的影响 ;比较了卵泡直径小于 2 mm、2～ 5 mm和大于 5 mm的卵母细胞体外成熟能力的差异 ,并对不同发育阶段猪卵母细胞的冷冻保存进行了研究。结果表明 :猪卵母细胞体外培养 4 8h时 ,培养的前 2 4 h培养液中加入激素 ,后 2 4 h去掉激素 ,卵母细胞的 A级成熟率 (5 1.73% )和总成熟率 (83.2 5 % )最高 ,极显著高于前 2 4 h不加激素 ,后 2 4 h添加激素培养的成熟率 (P<0 .0 1) ;也显著高于不含激素的培养液连续培养 4 8h的成熟率 (P<0 .0 5 ) ;但与添加激素连续培养 4 8h的成熟率差异不显著 (P>0 .0 5 )。在体外成熟培养液中 ,添加 10 % (体积分数 ) ECS的成熟率 (72 .86 % )显著高于添加 10 % (体积分数 ) NCS的成熟率(6 2 .2 1% ) (P<0 .0 5 ) ,而添加 10 % p FF则抑制卵母细胞的体外成熟。随着卵泡直径的增大 ,卵母细胞体外成熟能力逐渐增强。采用程序冷冻保存方法 ,成熟卵母细胞的成活率 (35 .5 9% )显著高于培养前 (2 4 .6 4 % )和培养 2 4 h(2 3.36 % ) (P<0 .0 5 )。培养 2 4 h(77.2 2 % )和培养成熟 (72 .81% )的卵母细胞解冻后的形态完整率均显著高于培养前(5 3.2 4 % ) (P<0 .0 5 )     

猪卵泡卵母细胞体外成熟研究现状

猪卵泡卵母细胞体外成熟研究现状孟庆刚李光鹏曹允考（东北农业大学动物科学系１５００３０）１引言随着哺乳动物胚胎工程技术的发展，人们对猪卵母细胞体外成熟的研究也取得了很大的进展。关于猪卵母细胞体外成熟的理论和培养技术也日渐成熟。相信随此项技术的发展，人们...