猪繁殖与呼吸障碍综合症的防治

5．1．3血清学检查可用四种方法检测血清中的PRRS病毒抗体。免疫过氧化物酶试验(IPMA)：本方法特异性和敏感性较好，但操作复杂、费用高；间接荧光抗体试验(免疫荧光染色法-IFA)：本方法可最早于感染后6d，一般于感染后两周检出抗体，抗体效价于感染后5～6周达到峰值(1：40000)；血清中和试验(SN)：因SN抗体比IFA出现     

PRV-IPMA抗体检测试剂盒的研制及其应用

本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验法（IPMA）,用于猪伪狂犬病病毒（PRV）血清抗体检测。通过对IPMA反应条件的优化,组装成PRV-IPMA诊断试剂盒,并对该试剂盒检测的敏感性、特异性、重复性及保存期等进行了试验。结果表明,IPMA检测相对于SN的敏感性为96．2％,特异性为97．7％,两者的总符合率为96．9％;该试剂盒检测的重复性好,与其它病毒参考血清无交叉反应;试剂盒可在-20℃保存12个月,用该试剂盒检测PRV人工感染猪血清,于感染后2周抗体全部阳转,健康对照组猪血清抗体检测均为阴性结果。对来自黑龙江、吉林、上海、内蒙古、河北等地采集的5个猪场后备母猪150份血清样本进行检测,PRV血清抗体阳性检出率为16．7％～50％。检测结果表明这些猪场后备猪群仍需加强疫苗免疫。该试剂盒的研制为我国PRV流行病学调查和疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。     

鸡传染性支气管炎HA和HI试验方法的研究

用传染性支气管炎(IB)红细胞凝集抑制(HI)试验对SPF鸡血清、健康鸡血清、用SPF鸡制备的IBV标准阳性血清、感染鸡血清和自然发病鸡血清及野外样品测定结果证明,本法操作简便、特异性强、敏感性高、需时短、结果易判定。IBV HI抗体于感染后3周开始出现,然后持续上升,二个月后仍呈上升趋势.本法可定性或定量检测鸡IBV抗体,特别适用于现地诊断和免疫监测。     

产蛋下降综合症病毒血清学比较研究

试验用血凝抑制(HI)试验,酶联免疫吸附(ELISA)试验,血清中和(SN)试验,荧光抗体(FA)试验和琼胶免疫扩散(AGID)试验分别对接种产蛋下降综合症(EDS)病毒后的实验感染鸡血清中的抗体进行检测,以比较5种血清学试验的敏感性。比较结果表明,前四种血清学试验分别于接种后5天首次测出抗EDS病毒抗体,其中SN和FA试验检查所有5只接种鸡全部为阳性,     

基于核衣壳蛋白的欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒双重识别酶联免疫吸附早期检测方法的建立

精确并快速地检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染对猪场至关重要。提高改善防控程序,如检测引入后备母猪、监测血清阴性猪群等,需要更加快速、敏感的检测方法。标准的血清学检测技术主要检测IgG抗体,本研究建立一种双重识别酶联免疫吸附试验(DR-ELISA)方法用于检测针对欧洲型PRRSV的特异性抗体。这种新检测方法能同时检测到PRRSV的IgM和IgG抗体,对识别猪群早期感染及因只能检测到IgG抗体的常规试验方法而造成的漏检有所帮助。DR-ELISA的基础是抗体对抗原的双重识别。本研究以PRRSV重组的核衣壳蛋白(N蛋白)作为包被和酶联抗原。为评估该方法在检测PRRSV早期感染的敏感性,连续采集并检测69头感染PRRSV猪的血清。标准检测方法的试验结果表明,其对感染后14d血清的检测敏感性很低,而DR-ELISA在感染7d可检测到阳性血清率可达88.4%,表明DR-ELISA方法在检测感染早期有很强的敏感性。为评估新检测方法的效力,进一步的研究结果表明,DR-ELISA检测欧洲型PRRSV早期感染敏感并精确。     

检测猪流行性腹泻病毒S1蛋白抗体的间接ELISA方法

为了建立检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)抗体的间接ELISA方法,初步分析PED灭活疫苗免疫母猪所产仔猪的血清母源特异抗体动态,笔者应用重组PEDV部分纤突(spike,S)蛋白作为检测抗原,建立了基于PEDV S1蛋白的间接ELISA抗体检测方法,并用该方法检测了产前4周用PED灭活疫苗免疫母猪的初乳、分娩当天血清及其仔猪1、7、14、21、28和35日龄(d)时血清中的PEDV抗体。结果显示:建立的间接ELISA方法能够特异地检测PEDV抗体,与猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒及猪轮状病毒的抗血清无交叉反应;敏感性高于免疫过氧化物酶单层试验(immunoperoxidase monolayer assay,IPMA),与IPMA检测结果的符合率为97.14%;批内和批间重复性试验的变异系数小于10%。免疫母猪初乳、分娩当天血清中的PEDV抗体阳性率为100%,初乳比血清中的平均抗体水平低;1d仔猪血清PEDV抗体阳性率为50%,平均抗体水平低,与初乳中的抗体水平接近,7d以后所有仔猪血清全部转为PEDV抗体阴性。建立了检测PEDV抗体的间接ELISA方法;产前用PEDV灭活疫苗给怀孕母猪免疫1次时,其所产仔猪血清中的母源特异抗体阳性率和抗体水平低,且维持时间短暂。     

猪肺炎霉形体血清抗体检测的研究

用单辐射溶血试验(SRHT)和绵羊红细胞间接血凝试验(IHAT)检测了猪霉形体肺炎患猪的特异性血清抗体.感染后第一周.以 SRHT 未检出血清抗体,以 IHAT检出30%;感染后第二周,两种方法的检出率分别为50%和70%;感染三周后,检出率达100%和97.28%,假阳性率为3.85%和零.在感染三周后的血清中,两种试验方法的结果高度一致。述两种方法简单、快速、敏感、特异,具有较高的应用价值。     

检测猪伪狂犬病血清抗体的斑点酶联免疫吸附试验方法的建立和评价

以斑点酶联免疫吸附试验(简称 Dot-ELISA)检测128份接种伪狂犬病病毒(PRV)前后的实验猪血清及49头份现地猪血清,并与微量病毒中和试验(MIVN)作比较.结果,Dot-ELISA 能检出抗 PRV 特异抗体,与MIVN 的检出符合率为95.9%,两种方法无显著性差异(P>0.05).Dot-ELISA 检出人工感染猪血清抗体的时间(接毒后第5天)早于 MIVN(接毒后第9天).Dot-ELISA 检测猪血清 PRV 抗体,具有特异性强、敏感性高、快速简便等优点,适合于大批检疫和流行病学调查.     

应用间接ELISA检测鸡病毒性关节炎抗体的研究

用本试验建立的抗鸡病毒性关节炎(AVA)抗体的间接 ELISA 方法检测了实验感染 AVA 病毒(AVAV)的鸡血清、自然感染鸡血清及 IBD,ND 和 MD 病鸡血清,证明其具有较高特异性.通过对鸡实验感染 AVAV 后不同时期的检测表明.间接 ELISA 可在感染后6天检出血清特异性抗体,且不同时期检出率均高于 AGID 法,并可在2小时内报告试验结果.适用于 AVAV 抗体的常规检测.用该法对来自南京、海宁、长春等地鸡场的162份血清进行检测,阳性率为10.5%.     

副鸡嗜血杆菌人工感染鸡血清凝集抗体动态观察

在检测鸡传染性鼻炎 ( IC)抗体的血清学方法中 ,血清平板凝集试验 ( SPA) ,不但操作简便快速 ,还具有较高的敏感性和特异性 ,因此是生产中较为常用的鸡传染性鼻炎抗体检测手段之一。为给本方法在疾病诊断中的应用提供进一步的参考 ,作者对A、C型副鸡嗜血杆菌人工感染鸡感染后 0～ 1 1周的血清 SPA抗体的动态变化进行了测定 ,现将试验情况报告如下。1　材料与方法1 .1　菌株与参考血清　标准株 0 0 83( A型 )、Modesto( C型 )来自美国菌种保藏中心。地方分离株 Hp8、H1 8为本实验室保存。阴、阳性对照血清 :本实验室保存 ,阴性血清采自…     

Dot—ELISA检测猪血清中伪狂犬病病毒抗体方法的建立和评价

建立了检测猪血清中伪狂犬病病毒(PRV)特异抗体的斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA),并通过对人工感染和自然感染猪血清以及野外试验猪血清的检测与微量血清中和试验(MSN)作了比较。结果表明, Dot-ELISA具有特异性和敏感性,能检测出猪血清中PRV特异性抗体,与MSN检出符合率在95％以上。经统计分析,差异不显著(P>0.05)。Dot-ELISA可检出早期感染猪血清中PRV抗体,可应用于猪伪狂犬病的临床实验诊断。     

检测猪脑心肌炎病毒重组非结构蛋白2C间接ELISA方法的建立

以猪脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)重组非结构蛋白2C作为包被抗原,确定间接ELISA反应的最佳工作条件;通过病毒阻断试验和交叉试验检验方法的特异性;通过与血清中和试验比较,确定方法的敏感性;通过对试验感染猪的血清2C抗体产生动态的检测,分析建立方法用于EMCV感染早期诊断的意义。结果显示,建立的间接ELISA方法能够特异地检出EMCV感染猪的血清2C抗体,与猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等的抗血清没有交叉反应;与血清中和试验检测结果的符合率为95.7%(22/23),相对敏感性为90.9%(10/11);仔猪感染EMCV后第4天,应用建立的间接ELISA方法即能够检出血清中的特异性2C抗体。结果表明,建立了可以替代血清中和试验的基于EMCV重组非结构蛋白2C的间接ELISA方法。     

应用几种血清学诊断方法检测猪伪狂犬病血清抗体的比较试验

我们分别应用乳胶凝集试验(LAT)、琼脂免疫扩散试验(AGID)、血清中和试验(SN)3种诊断方法，对45份猪血清样品进行了猪伪狂犬病血清抗体检测，以进口试剂盒ELISA诊断方法为标准，对这3种血清学检测结果进行了比较分析。结果表明：LAT、AGID的可重复性均为100％；SN的准确性、敏感性、特异性均最为理想；LAT的敏感性较好，准确性和特异性稍差；AGID的准确性、敏感性、特异性均较差。     

利用单克隆抗体检测猪瘟疫苗抗体的酶联免疫吸附试验

应用抗猪瘟兔化弱毒单克隆抗体通过亲和层析法纯化省瘟疫化弱毒抗原建立的酶联免疫吸附试验(简称 HCLY-MAb-ELISA)检测了12份来吃初乳仔猪的血清、235份猪瘟兔化弱毒疫苗安检用的猪的血清和226份免疫前后不同时期的猪血清抗,并以常规兔体血清中和试验(兔体 SN)进行了相关性分析.结果表明,该法敏感性高,特异性强,与兔体 SN 呈显著正相关(r=0.8032、P<0.05).本法可准确反应免疫猪群的抗体也答水平,且快速简便,易于推广。     

用酶联免疫吸附试验检测牛传染性鼻气管炎病毒抗体的敏感性和特异性

应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测牛血清中牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)抗体的技术已经得到了发展。我们用ELISA方法检测从无IBR病毒牛群中采集的304份血清,其特异性为100%;检测经鼻内疫苗接种免疫后采集的62份牛血清,其诊断敏感性在免疫后第一个月为27.4%,第六个月为100%,检测标准血清中和抗体滴度≥1:2的303份牛血清,其敏感性为100%;463份随意诊断样品经比较试验证明ELISA检出血清阳性牛(61.6%)比标准血清中和试验(49.9%)要高。因此,我们认为ELISA具有技术上的优越性,可以作为一种常规诊断试验来检测牛血清中IBR病毒抗体。     

应用斑点-ELISA 检测猪瘟血清抗体的研究

应用牛病毒性腹泻病毒(BVDV)orngonC_(24)株作抗原,混合纤维素微孔滤膜作固相载体,制备检测猪瘟(HC)抗体的快速诊断膜,进行斑点-ELISA(Dot-ELISA)试验.结果,以 HC 高免血清和自然感染 HC 猪阳性血清作阻断试验,证明了本方法的特异性:猪轮状病毒阳性血清、猪流行性腹泻阳性血清、猪细小病毒阳性血清及断奶后未注射任何疫苗的健康猪血清均为阴性;断奶前后和未注苗仔猪血清几何平均效价低于1:40;注苗猪效价为1:70～1:160;注苗后又爆发,流行 HC 场的猪血清效价为16:10～1:320;未注苗爆发 HC 场的猪血清抗体效价与未注苗猪相似。本法特异性强、敏感性高、操作简便快速,适于现地 HC 免疫监测及流行病学调查.     

猪圆环病毒2型免疫过氧化物酶单层细胞试验抗体检测试剂盒的研制及应用

本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验（Immunoperoxidase monolayer assay,IPMA）,用于猪圆环病毒2型血清抗体检测,通过对IPMA反应条件的优化,组装了诊断试剂盒。研究结果表明,用IPMA检测猪圆环病毒2型人工感染猪血清,于感染后3周抗体阳转,第3周～10周抗体阳性检出率为92.8%（52/56）,对照组猪血清抗体检测均为阴性（33/33）。试剂盒在-20℃稳定保存18个月与其他几种猪病毒参考血清无交叉反应,与用重组蛋白抗原建立的rcELISA符合率为89.2%。对来自黑龙江、吉林、河北、上海、内蒙古、云南、江西等地猪场健康成年猪血清480份和发病猪血清424份进行了检测,抗体检出率分别为91.7%和79.2%,表明我国猪群中猪圆环病毒2型污染相当严重。该试剂盒的研制为我国PCV2流行病学调查和疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。     

三种血清学方法检测弓形体抗体的比较

对IHA、IFA及ELISA三种方法检测弓形体抗体作了比较。感染兔血清首次检出抗体时间及阳性兔数:IHA为感染后第5天(1/15)、IFA为第6天(1/15)、ELISA为第4天(8/15);达全阳性时间分别为感染后第13、15及6天,GMT分别为4693、1301及8192。对照兔血清的假阳性率均为1.42％。三法检测猪血清的阳性率分别为42.0、41.0及44.0％。结果表明,三法均具有高度的敏感性和较高的特异性,其中以ELISA法最为灵敏,IHA法操作简便,两法均适用于现场血清学调查。     

单抗阻断ELISA检测流行性出血病病毒特异性抗体

应用流行性出血病(EHD)群特异性单克隆抗体(1G9/C9)建立了检测EHD病毒血清抗体的高度敏感和特异的阻断ELISA(B-ELISA),该法能检出所有6种参与试验的EHD血清型高免参考血清中存在的阻断抗体,而不受19种南非和8种澳大利亚蓝舌病病毒(BTV)血清型参考抗血清的影响。与间接ELISA(I-ELISA)相比,EHD B-ELISA检测EHD特异性敏感性更高。同时用BTV和EHD B-ELISA检测试验血清和田间血清的BTV和EHD血清抗体滴度。结果表明:只有B-ELISA对相应的血清群特异性抗体敏感,即便是继发和混和感染另一种病毒亦如此。     

几种布鲁氏菌病检测方法比对结果分析

为比较几种常用布鲁氏菌病(简称布病)检测方法特性,在某疫苗免疫的奶牛场随机选取40头奶牛,采集血清和奶样各40份,然后对采集的血清进行虎红平板凝集、试管凝集、胶体金、酶联免疫吸附试验(iELISA和cELISA)和琼脂扩散方法检测,对采集的奶样进行病原学检测(qPCR)和抗体检测(胶体金)。结果显示:4种国标方法(虎红平板凝集、试管凝集、iELISA和cELISA)检出的阳性样品数量有较大差距,分别为16、6、23和33份,其中经试管凝集试验检出的阳性血清,经其他3种国标方法也检测为阳性;通过胶体金法检出阳性血清数(9份)略高于试管凝集试验,且血清及牛奶样品经胶体金检测结果基本一致;琼扩法检出12份阳性血清,且显示抽检奶牛中存在野毒感染;qPCR和胶体金试纸条对采集奶样的检测结果有较大差距,经qPCR检测仅1份样品呈阳性。结果表明:国标方法中,试管凝集试验特异性最高,iELISA和cELISA敏感性较高;病原学检测临床样品检出率较低,琼脂扩散试验敏感性有限,胶体金法敏感性适中,操作简便,适合布病免疫奶牛场自检。本研究为牛场布病不同检测目的方法选择提供了参考。