日本结缕草离体培养及高频率植株的再生

以日本结缕草(Zoysia japonica)叶片作为外植体进行离体再生研究。结果表明:叶片愈伤组织诱导的最佳培养基是MS 1.5mg.L-12,4-D 0.5mg.L-16-BA 26g.L-1蔗糖 5.0g.L-1琼脂,诱导率为65.36%,无性世代增殖倍数高达9.56;正交试验和方差分析筛选出不定芽分化的最佳培养基为MS 3.0mg.L-1BAP 0.5mg.L-1NAA 1.5mg.L-1AgNO3 35g.L-1蔗糖 6.5g.L-1琼脂,分化率为67.30%,增殖系数为8.67;生根培养基选用1/4MS 0.2mg.L-1IBA 0.3mg.L-1NAA 28g.L-1蔗糖 4.5g.L-1琼脂,生根率为89.60%。     

结缕草高效再生体系的建立

为了获得结缕草的转基因再生植株,从而利用转基因技术改造结缕草,建立草坪草的遗传转化体系,研究了不同培养基、激素浓度及光照条件对结缕草愈伤组织诱导、分化和植株再生的影响,建立了结缕草再生体系。结果表明,在愈伤组织诱导阶段,不同培养基(MS培养基和NB培养基)在同一激素质量浓度下,愈伤组织诱导率差别不大;而同一培养基不同激素浓度间愈伤组织诱导率存在一定差别,以添加2 mg/L的2,4-D处理诱导率较高;光培养和暗培养条件下愈伤组织诱导率差别不大。在愈伤组织的分化阶段,MS培养基远远优于NB培养基,MS培养基上愈伤组织有60%～70%能产生胚性愈伤并得到再生植株,而NB培养基上愈伤组织全部变成绿色的硬块状,并伴随许多毛状根生成,最终不能得到再生植株;暗培养条件下愈伤组织的分化率(55%)和植株再生率(47%)大大高于光培养(10%,7%)。     

野生细叶结缕草再生体系的建立

以适合南方地区夏季种植的采自泰国北部的一种野生的细叶结缕草为供试材料,以匍匐茎节为外植体建立其再生体系．结果表明：在MS基本培养基上添加5．0mg／L2,4-D和NB培养基上添加0．2mg／LIAA所产生的愈伤组织最好,而添加2．0raM-2,4-D＋1．0mg／LBA时分化效果最好,1／2MS＋0．5mg／LNAA培养基最适于生根．     

虎舌红茎尖高频再生体系的建立

以虎舌红(Ardisia mamillata Hance)幼嫩茎尖为外植体,采用正交设计及方差分析对影响虎舌红植株离体培养的因素进行了优化研究。结果表明:最佳愈伤组织诱导培养基为MS 2,4-D0.7mg/L 6-BA0.2mg/L 蔗糖28g/L 琼脂6.0g/L;不定芽诱导最佳培养基为MS NAA0.2mg/L CPPU0.4mg/L 蔗糖30g/L 琼脂6.0g/L,分化率为96%,增殖率为5.5;最佳生根培养基为1/2MS NAA0.4mg/L IBA0.3mg/L 蔗糖26g/L 琼脂5.0g/L,生根率为93%。     

中华结缕草茎尖的组织培养和快繁技术研究

应用正交设计法研究了植物生长调节剂、硝酸银和活性碳等对中华结缕草(Zoysia sinica Hance)幼嫩茎尖愈伤组织的诱导、不定芽分化和生根培养的影响。结果表明:利于中华结缕草愈伤组织诱导的培养基为MS 0.15 mg/L NAA 1.0 mg/L6-BA 27 g/L蔗糖 5.5 g/L琼脂,诱导率为56.8%;MS 0.5 mg/L2,4-D 1.0 mg/L CPPU 4.0 mg/L AgNO3 29 g/L蔗糖 6.5 g/L琼脂作分化和增殖培养基效果最好,分化率为68.42%,增殖率为6.3;利于生根的培养基为1/2 MS 0.4 mg/L IBA 0.3 mg/L NAA 1.5 mg/L活性碳 25 g/L蔗糖 7.0 g/L琼脂,生根率为95.1%。移栽基质为蛭石 珍珠岩 腐叶土(1∶1∶1)效果最好,成活率99.5%,且苗生长健壮。     

结缕草成熟胚愈伤组织的诱导及再生体系的研究

以结缕草的成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织诱导进行植株再生。结果表明在MS+2,4-D(2.0mg/L)+VB1(4mg/L)的培养基中,成熟胚可较高频率的诱导产生愈伤组织,诱导率为43.20%,但愈伤组织质量较差。将其在降低2,4-D浓度和添加6-BA,ABA的继代培养基中继代培养,可明显改善愈伤组织质量,增加胚性愈伤。筛选继代的胚性愈伤组织置于分化培养基MS+6-BA(1.0mg/L)+KT(2.0mg/L)+NAA(0.1mg/L)中,分化率45.6%。本研究建立了一套有效的以成熟胚为外植体结缕草组织培养再生体系。     

大穗结缕草愈伤组织诱导及植株再生研究

为获得大穗结缕草离体繁殖的最佳条件,以大穗结缕草不同器官作为外植体,MS为基本培养基,研究了不同消毒方法对外植体除菌效果的影响,不同外植体以及不同激素组合对愈伤组织诱导及分化的影响。结果表明:在光强1 500~2 000lx,16h光照/8h黑暗,(23±2)℃培养条件下,大穗结缕草外植体,经70%酒精浸泡45s,0.1%HgCl2浸泡8min,污染率低,易于愈伤组织的诱导。以种子胚作为外植体最有利于愈伤组织的培养,愈伤组织诱导的最佳培养基是MS+2,4-D(2.0 mg·L-1)+6-BA(0.2 mg·L-1)+TDZ(1.0mg·L-1)。     

结缕草愈伤组织诱导的影响因素

结缕草是广泛应用于城市绿化和运动场建坪的一类暖季型草坪草。本综述结合国内外结缕草愈伤组织的诱导和再生体系建立的研究动态,从结缕草愈伤组织诱导的影响因素、目前存在的问题和发展前景上加以探讨,希望对结缕草再生体系和基因工程体系完善提供一定的参考方向。     

沟叶结缕草组织培养表面灭菌方法的筛选

[目的]为建立沟叶结缕草再生体系奠定基础。[方法]以沟叶结缕草带芽茎段为外植体,通过正交试验研究0.1%升汞、5%次氯酸钠、75%酒精和预处理方法等因素对外植体成活率的影响,筛选最佳表面灭菌方法。[结果]各因素对外植体成活率的影响顺序为0.1%升汞>5%次氯酸钠>75%酒精>预处理方法,而0.1%升汞和5%次氯酸钠对其影响分别达到极显著和显著水平。沟叶结缕草组织培养的最佳表面灭菌方法为:先用5 g洗洁精加水冲洗2次,再使用5%次氯酸钠(滴入3滴100%吐温80),振荡灭菌10 min;最后用0.1%升汞(滴入3滴100%吐温80),振荡灭菌10 min。[结论]可用杀菌剂、抗生素等对外植体进行预处理或将抗生素加入培养基中,起到杀菌和抑菌的作用。     

结缕草品种(系)的抗寒性鉴定

以14个结缕草品种(系)为试验材料,以马尼拉和天鹅绒为对照,用电解质渗透法作为指标,比较它们的抗寒性。结果发现:与天鹅绒相比,除了引自中国台湾的Z095的抗寒性较差外,其它几个国产品种(系)的抗寒性都较强;与马尼拉相比,引自中国山东枣庄的Z116的半致死温度与其相同,国外引进品种的抗寒性则较差或与其接近。     

结缕草遗传多样性研究进展

为使目前我国使用的草坪草种主要依靠引进国外草种 ,以及由此而导致的引进种在生物学方面对当地生境不适应性和出现生态学问题的局面得以扭转 ,该文对国内外有关结缕草遗传多样性的研究概况和方法进行了系统的收集和论述 .分析发现 ,对结缕草在生态学、形态学、生理学、种子学和种质资源等方面进行了不同程度的研究 ,但缺乏系统性和深入性 ,特别是在遗传多样性方面的研究较少 .因此 ,建议加强对结缕草遗传多样性的基础理论研究 ,确定种质中心 ,从而有效地保护利用种质资源和选育新品种     

日本结缕草成熟种子愈伤组织诱导及植株再生的影响因子分析

 【目的】优化日本结缕草的组织培养体系，提高其植株再生率，建立高频植株再生体系。【方法】以日本结缕草的成熟种子为外植体，分析激素、基本培养基、培养条件、脯氨酸、Cu2+等因子对愈伤组织诱导及植株再生的影响。【结果】（1）培养基中添加脯氨酸能提高愈伤组织诱导率，而BA降低愈伤组织的诱导率，低浓度的NAA(0.1～0.2 mg·L-1)能促进愈伤组织的形成，愈伤组织诱导的最佳培养基为ND＋2,4-D 3.0 mg·L-1＋NAA 0.2 mg·L-1+L-Pro 500 mg·L-1，愈伤组织诱导率达57.3%；（2）愈伤组织继代的最佳培养基为MSD+ 2,4-D 1.0 mg·L-1；（3）愈伤组织分化的最佳培养基为MSD＋NAA 0.3 mg·L-1+KT 0.5 mg·L-1+BA 0.05 mg·L-1 + L-Pro 500 mg·L-1，分化率达36.7%。【结论】优化了日本结缕草的组织培养体系，初步找到了影响其成熟种子愈伤组织诱导及植株再生的主要因子。     

不同生境对结缕草种子产量的影响

研究了青岛胶州不同生境下野生结缕草种子产量性状的变化.结果表明:阳坡的生殖枝和营养枝的单株重量和整体重量均比平地和崖边上的高;阳坡光照强度大,结缕草生殖枝数最多,明显多于平地和阴坡,且与两者在0.01水平上有差异;阳坡、东西缓坡、平地上结缕草抽穗数、抽穗率较高,未火烧、林间的较低.平地上的结缕草草层高度、生殖枝高度、叶片长宽、花序长度与人行道(人在草地上踏出的小路)上的在0.01水平上有差异;人行道上的结缕草种子数/花序、成实率较高,花序长度最短,千粒重最小,且后两者均分别与其他生境的在0.01水平上有差异.     

不同土壤水分条件下断茎处理对克隆植物结缕草表型可塑性的影响

通过断茎处理,研究在不同土壤水分条件下克隆植物结缕草的水分生理整合作用对表型可塑性的影响。结果表明,在土壤水分均质和异质环境下,与断茎处理相比,保持匍匐茎的连接对结缕草的形态学指标均有促进作用;断茎处理均降低了分枝强度;在土壤水分异质和均质环境下,在结缕草克隆植株内存在水分生理整合,而且整合的方向既有从基部到梢部的向顶传输,又有从梢部向基部的向基传输,即水分传输是双向的。     

以基因枪法转化日本结缕草获得转基因植株

将含有DREB1A和gus基因的双基因载体质粒包裹在金粉上,以基因枪轰击日本结缕草胚性愈伤组织,以gus基因的瞬时表达研究日本结缕草基因枪转化参数.结果表明, 在1 100 psi压力下6 cm的轰击距离、每皿轰击2次的转化效果最好,而金粉和质粒用量对转化效率影响不显著;经过筛选和再生培养,检测到gus基因的稳定表达,并获得日本结缕草潮霉素抗性株系,PCR-Southern杂交证实外源DREB1A基因已整合到日本结缕草基因组中.      

施氮肥对播种和分栽结缕草种子产量及其构成因素的影响

 2001～2003年在山东省胶州市研究了施肥对不同建植方式(植株分栽、种子播种)结缕草种子产量及其产量构成的影响。结果表明，植株分栽和种子播种建植结缕草种子田，第3年可取得同样的种子生产效果；适量的施氮肥可提高结缕草单位面积生殖枝数，种子播种和分栽小区均施氮肥30 kg·ha-1 (秋季20 kg·ha-1 +春季10 kg·ha-1) 效果最好，其生殖枝数分别为3 343和2 941个/m2，随着施氮肥水平的提高，生殖枝数并未增加，反而降低；施氮肥能增加结缕草的穗长、小穗数/生殖枝、种子数/生殖枝、千粒重及结实率；适量施氮肥可提高结缕草种子产量，以播种和分栽小区施氮肥30 kg·ha-1（秋季20 kg·ha-1 +春季10 kg·ha-1）种子产量最高，分别达到844.50和874.65 kg·ha-1；分栽结缕草种子田生产的种子要比播种种子田的种子千粒重大，而且穗轴长。结缕草种子的适宜收获期为盛花期后第36天 (6月15日前后)，此时种子含水量为26%～28%。     

芥蓝高频离体再生体系的建立

以'尖叶芥蓝'、'中花粗心芥蓝'和'迟花芥蓝'3个品种为材料,研究苯基噻二唑脲(TDZ)预处理、不同激素配比、基因型和外植体类型对不定芽再生的影响,建立芥蓝离体高频再生体系.结果表明:3个品种中,'中花粗心芥蓝'再生能力最强;不同外植体类型中再生率由大到小依次为:下胚轴、带柄子叶、子叶块;不定芽再生的最佳激素组合为0.2 mg·L-1NAA+6 mg·L-16-BA;以此激素组合为基础,下胚轴经0.5 mg·L-1TDZ浸泡30 min预处理接种在分化培养基(MS+0.2 mg·L-1NAA+6 mg·L-16-BA+8 g·L-1琼脂+30 g·L-1蔗糖)上不定芽再生率最高,达98.5%.     

黄瓜高频再生体系的建立

【目的】建立黄瓜的高频再生体系,为黄瓜种质的遗传转化奠定基础。【方法】分别以华北型黄瓜种质26号、欧洲型黄瓜种质14-1为材料,研究不同激素组合、AgNO3质量浓度、苗龄、子叶切割方式及外植体接种方式对黄瓜子叶节不定芽诱导的影响。【结果】华北型黄瓜种质26号再生的最适激素组合为4.0mg/L 6-BA+0.3mg/L IAA+1.0mg/L AgNO3,再生率与再生系数分别可达85.00%和2.51;欧洲型黄瓜种质14-1再生的最适激素组合为3.0mg/L 6-BA+2.0mg/L ABA+1.0mg/L AgNO3,再生率与再生系数分别可达86.70%和2.77;5d苗龄的黄瓜子叶作为外植体时诱导不定芽的状态最佳;切除子叶端部2/3且基部附带有1mm子叶柄、以叶背向下子叶柄微插入的方式进行接种再生效率最高。【结论】建立了黄瓜种质14-1和26号材料的高频再生体系,再生率均可达85%以上。