产气荚膜梭菌β-毒素基因的克隆与核苷酸序列分析

为了给产气荚膜梭菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）β毒素基因工程亚单位苗和细菌毒素多价基因工程苗的研制提供基因材料，用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术，从Ｂ型产气荚膜梭菌染色体基因组中扩增了９３０ｂｐ的β－毒素基因。用限制性核酸内切酶ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ对ＰＣＲ产物进行双酶切处理，然后通过Ｔ４ＤＮＡ连接酶将其定向连接于事先经同样的双酶切处理的载体质粒ｐＥＴ－２８Ｃ（＋）的多克隆位点，转化至受体菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中。经ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ双酶切分析和ＰＣＲ扩增检测，证明重组质粒ｐＥＣＢ２中含有产气荚膜梭菌的β－毒素基因。经核苷酸序列分析，明确了克隆的β－毒素基因在重组质粒中的连接向位和阅读框架是正确的。     

一种新的检测牛种布鲁氏菌抗体的方法—荧光极化法（FPA）

目前检测牛种布鲁氏菌（Ｂｒｕｃｅｌａａｂｏｒｔｕｓ）抗体常用的血清学方法有缓冲平板抗原试验（ＢＰＡＴ）、补体结合试验（ＣＦＴ）、间接酶联免疫试验（Ｉ－ＥＬＩＳＡ）和竞争酶联免疫试验（Ｃ－ＥＬＩＳＡ）。本文介绍的荧光极化法（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｐｏ...     

猪水肿病毒素A亚单位基因的克隆及表达的尝试

以聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术从大肠杆菌ＴＢ１中扩增出猪水肿病毒素（ＳＬＴ－ＩＩｅ）的Ａ亚单位基因的９６０ｂｐ。将此ＰＣＲ扩增产物（ｓｌｔ－ＩＩｅＡ）在ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ位点间克隆进质粒ｐＵＣ１８中,获得了重组质粒ｐ１８ｓｌｔ－ＩＩｅＡ,经ＭｉｃｒｏＧｅｎｉｃ ｃｏｍｐｕｔｅｒ ｐｒｏｇｒａｍ分析证明在其整个序列中含有与已发表的ｓｌｔ－ＩＩｅ序列相同的序列,说明质粒ｐ１８ｓｌｔ－ＩＩｅＡ是含有     

基因探针和PCR对鲤吉陶单极虫的检测

采用液氮冷冻研磨法破碎吉陶单极虫（Ｔｈｅｌｏｈａｎｅｌｕｓｋｉｔａｕｅｉ）孢子，按常规法提取其基因组ＤＮＡ。取ＤＮＡＥｃｏＲＩ消化产物，采用低熔点琼脂糖回收法制备大（３．０～１５．０ｋｂ）、小（０．５～３．０ｋｂ）片段，将其克隆于ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔｋｓＥｃｏＲＩ位点，经α－互补现象、酶切鉴定和虫体ＤＮＡ生物素标记探针筛选，构建了含２３个克隆的基因文库，克隆片段介于０．９～６．８ｋｂ之间；经阳性克隆标记筛选及特性分析，制备了长度为０．９ｋｂ（１９号质粒克隆片段）的探针，该探针具有较强的敏感性和特异性。对该探针两端ＤＮＡ序列进行分析，设计出１对引物。上游引物序列为：５′ＴＴＴＣＧＡＡＣＣＣＧＣＡＣＡＡＣＡＡＧ３′，下游引物序列为：５′ＴＧＡＧＴＧＧＡＴＡＧ－ＴＡＴＣＧＣＴＧＣ３′。应用该对引物对虫体进行了检测     

家蚕核型多角体病毒IE-1基因启动子的克隆和序列分析

利用ＰＣＲ方法扩增了家蚕核型多角体病毒苏州株（ＢｍＮＰＶｓｕ）的ＩＥ－１启动子全序列并进行克隆和序列分析，结果表明ＢｍＮＰＶｓｕ的ＢｍＮＰＶｓｕ启动子符合真核生物启动子特点，在其序列中有典型的增强子类似元件、加帽位点、ＴＡＴＡ盒等基序。与ＧｅｎＢａｎｋ报道的其它几种ＮＰＶ病毒基因组中的ＩＥ－１启动子序列进行同源性分析表明ＢｍＮＰＶｓｕ与ＩＥ－１（家蚕核型多角体病毒Ｔ_３株）、ＡｃＭＮＰＶ（首蓿尺蠖核型多角体病毒）、ＯｐＭＮＰＶ（黄衫毒蛾核型多角体病毒）、ＬｄＮＰＶ（舞毒蛾核型多角体病毒）的同源性分别为９９．５％、９６．４％、６６．２％和５０．２％。根据各ＮＰＶ基因组中ＩＥ－１启动子序列分析了几种ＮＰＶ的进化关系。     

我国犬埃立克体病病原分离与鉴定：Ⅱ.我国病原株与其他埃立克体间 …

应用Ｃｌｕｓｔａｌｗ计算机分析软件,对我国南方基地的埃立克体病原株（Ｇｚｈ９８１）和Ｇｚｈ９８２）与基因库中其他相关埃立克体１６ＳｒＲＮＡ基因进行了匹配分析。结果表明,我国的２种分离株分别与Ｅ．ｐｌａｔｙｓ和Ｅ．ｃａｎｉｓ的遗传距离最小（０．００１）。在系统发育中,Ｇｚｈ９８１和Ｅ．ｐｌａｔｙｓ、ＨＧＥ、Ｅ．ｅｑｕｉ、Ｅ．ｐｈａｇｏｃｙｔｏｐｈｉｌａ同属一群;Ｇｚｈ９８２和Ｅ．ｃａｎｉｓ、Ｅ．ｅｗ     

猪瘟兔化弱毒囊膜糖蛋白EI基因的扩增与克隆

本试验直接从细胞培养液中提取猪瘟兔化弱毒（ＨＣＬＶ）ＲＮＡ，并根据猪瘟病毒（ＨＣＶ）Ａｌｆｏｒｔ株和Ｂｒｅｓｃｉａ株的核苷酸序列，将ＥＩ基因分两段，设计并合成了４条引物。采用反转录－多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ），成功地扩增出了ＨＣＬＶ保护性囊膜糖蛋白ＥＩ基因。以ｐＧＥＭ－Ｔ和ｐＵＣ１９为载体，将ＥＩ基因的两个片段分别进行克隆并转化到大肠杆菌ＪＭ１０１。经过分析鉴定，证明所扩增的片段为ＨＣＬＶＥＩ基因     

鸡传染性法氏囊病病毒野毒株VP2基因高可变区酶切位点分析

参照澳大利亚鸡传染性法氏囊病病毒（ Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ）００２７３ 毒株基因组序列设计的 １ 对引物,位于 Ｖ Ｐ２ 高可变区两端,通过 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ,扩增了 ５ 个 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 山东分离株 Ｖ Ｐ２ 基因的 ６０７～１ ０８０ 位核苷酸片段（ａａ２０３～３０６）。 Ｐ Ｃ Ｒ 产物经纯化后,分别用 Ｄｒａ Ⅰ、 Ｓａｃ Ⅰ、 Ｓｓｐ Ⅰ、 Ｐｓｔ Ⅰ和 Ｓａｕ３ Ａ Ｉ共 ５ 种限制性内切酶（ Ｒ Ｅ）进行消化处理,结果 ５ 个分离株均为 Ｄｒａ Ⅰ（－ ）、 Ｓａｃ Ⅰ（－ ）和 Ｓａｕ ３ Ａ Ｉ（＋ ）, Ｌ Ｃ２ 和 Ｔ Ａ 株为 Ｓｓｐ Ⅰ（＋ ）, Ｌ Ｃ１ 和 Ｊ Ｎ 株为 Ｓｓｐ Ⅰ（－ ）, Ｌ Ｃ１ 和 Ｌ Ｃ２ 株为 Ｐｓｔ Ⅰ（＋ ）, Ｊ Ｎ、 Ｌ Ｌ 和 Ｔ Ａ 株为 Ｐｓｔ Ⅰ（－ ）;５ 个分离株的酶切图谱与美国变异株迥异,而 Ｔ Ａ 株与日本超强毒株 ９０１１ 相类似。５ 个分离株与现用疫苗株对比,至少在 Ｖ Ｐ２ 可变区内存在着一定的差异,这可能是 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 接种免疫鸡群仍然暴发 Ｉ Ｂ Ｄ 的原因之一。     

大鹅观草的染色体组组成

以大鹅观草（ＲｏｅｇｎｅｒｉａｇｒａｎｄｉｓＫｅｎｇｅｔ．Ｓ．Ｌ．Ｃｈｅｎ）与竖立鹅观草（Ｒ．ｃｉｌｉａｒｉｓｖａｒ．ｊａｐｏｎｅｎｓｉｓ（ｈｏｎｄａ）Ｂ．Ｒ．Ｌｕ，Ｙｅｎｅｔ．ｙａｎｇ２ｎ＝２８，ＳＳＹＹ）犬草（Ｅｌｙｍｕｓｃａｎｉｎｕｓ（Ｌ．）Ｌ，２ｎ＝２８，ＳＳＨＨ）拟鹅观草（Ｐｓｅｕｄｏｒｏｅｇｎｅｒｉａｓｐｉｃａｔａ（Ｐｕｒｓｈ）Ａ．ｌｏｖｅ，２ｎ＝２８，ＳＳＳＳ）三个种进行杂交，对亲本     

早期隔离断奶法的技术措施

早期隔离断奶法（ＳｅｇｒｅｇａｔｅｄＥａｒｌｙＷｅａｎｉｎｇ，简称ＳＥＷ）是指给２１日龄前的仔猪断奶的方法。近几年深受欧美和亚洲一些养猪发达国家重视。美国约有３０％的猪场采用，日本自１９９５年开始以农林水产省为中心进行开发研究、推广。１　实行ＳＥＷ的优点可以防止母猪某些疾病特别是一些慢性疾病对仔猪的垂直感染。表１　采取不同早期断奶日龄可能排除的病原体病原体断奶日龄链球菌病（ＳｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓｓｕｉｓｔｙｐｅⅡ）萎缩性鼻炎（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）巴氏杆菌病（Ｐａｓ…     

鸡减蛋综合征病毒DNA结合蛋白的基因结构及同源分析

从中国发病鸡群中分离的鸡减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）ＡＡ－２株，经常规方法提取其病毒核酸后，构建了限制性内切酶ＰｓｔⅠ及ＨｉｎｄⅢ水解片段的基因文库。对其中ＨｉｎｄⅢ－Ｆ片段（５２．９～５８．９ｍｕ）的正反２条链的序列测定发现，其反链存在１个编码容量为３８７个氨基酸（ａａ）的开放读码框架（ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ，ＯＲＦ），经Ｇｅｎｅｂａｎｋ／ＥＭＢＬ同源搜寻后证实其编码产物为ＥＤＳＶ的ＤＮＡ结合蛋白（ＤＢＰ）。与其他腺病毒ＤＢＰ的氨基酸序列进行同源比较，其Ｎ端同源性在１９．０％～４６．２％之间，Ｃ端同源性在２７．７％～６０．４％之间。腺病毒ＤＢＰ的３个保守序列ＣＲ１，ＣＲ２，ＣＲ３在ＥＤＳＶＤＢＰ中有较大变化，但ＥＤＳＶＤＢＰ的锌指框架（Ｚｎ２＋ｆｉｎｇｅｒｍｏｔｉｆ）却保留了对其功能必需的残基。     

新城疫病毒融合蛋白裂解位点基因的分离克隆及在原核细胞中的表达

用ＳＰＦ鸡胚繁殖新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４６Ｅ９株（强毒）、ＬａＳｏｔａＥ４株（弱毒），对病毒进行纯化，抽提ＲＮＡ。用１对均为２７个碱基的引物进行ＲＴ－ＰＣＲ，扩增出了２个毒株的融合蛋白裂解位点（Ｆｃ）基因。将Ｆｃ基因定向克隆入ｐＵＣ１８的ＥｃｏＲＩ和ＳａｌⅠ位点之间，获得２个毒株Ｆｃ基因克隆ｐＵＣＦ４６Ｆｃ和ｐＵＣＬａＦｃ，用ＥｃｏＲＩ／ＳａｌⅠ双酶切法、ＰｓｔⅠ单酶切法、ＰＣＲ法和核酸探针法对其进行了鉴定。将鉴定好的ＬａＳｏｔａＥ４Ｆｃ基因定向导入表达载体质粒ｐＢＶ２２１，获得重组子ｐＢＶＬａＦｃ。ＰＣＲ和内切酶酶切法鉴定表明，Ｆｃ插入的位置和方向都正确无误。用Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α通过热诱导法进行了表达。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ法检测了表达产物。结果表明，有１条能够与ＮＤＶ多抗反应的特异条带，分子量约１５７００，与预期大小一致，说明是Ｆｃ基因的表达产物     

蓝舌病病毒单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定

以纯化的蓝舌病病毒（ＢＴＶ）１１型ＶＰ７免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,动用淋巴细胞杂交瘤技术,借助间接ＥＬＩＳＡ筛选,获得了３株分泌抗ＢＴＶ１１ ＶＰ７的群特异性单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株,命名为Ｃ１２Ｄ９、Ｂ４Ｆ３、Ｅ１Ａ７。这３株杂交瘤细胞株连续传代３个月再经液氮冻存６个月后复苏培养,仍能稳定分泌特异性ＭｃＡｂ。３株ＭｃＡｂ均具有ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性,其中Ｃ１２Ｄ９株上清液的ＥＬＩＳ     

荒漠猫血液蛋白质和酶多态性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对５只荒漠猫（Ｆｅｌｉｓｂｉｅｔｉ）血液中的血红蛋白（ＨＢ），运铁蛋白（ＴＦ），亲血色蛋白（Ｈｐ）以及乳酸脱氢酶（ＬＤＨ），淀粉酶（ＡＭＹ），酯酶（ＥＳ）和碱性磷酸酶（ＡＬＰ）的多态性进行了研究。结果发现，被检荒漠猫的ＴＦ，Ｈｐ，ＲＢＣ－ＬＤＨ，Ｓ－ＥＳ和Ｓ－ＡＬＰ共５个基因座存在多态性，ＨＢ，ＲＢＣ－ＡＭＹ，Ｓ－ＡＭＹ，Ｓ－ＬＤＨ，ＲＢＣ－ＥＳ和ＲＢＣ－ＡＬＰ共６个基因座为单态，表明荒漠猫的血液蛋白质和酶具有颇大的遗传变异性     

马立克氏病病毒Rispens株和RL株B抗原基因的分离、克隆及初步酶切分析

将马立克氏病病毒（ＭＤＶ）血清Ⅰ型Ｒｉｓｐｅｎｓ株和ＲＬ株分别接种于原代鸡胚成纤维细胞，待出现８０％以上细胞病变后收获，经蛋白酶Ｋ消化，酚、氯仿抽提，乙醇沉淀细胞和病毒的总ＤＮＡ（ｔｏｔａｌＤＮＡ）。以此为模板，根据已发表的Ｂ抗原基因核苷酸序列设计１对引物，通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增出１条约２．８５ｋｂ的特异性条带，斑点杂交证实其为Ｂ抗原基因。双酶切消化后，克隆到质粒ｐＵＣ１９中。酶切分析表明，在这２株病毒的Ｂ抗原基因上，ＨｉｎｄⅢ、ＥｃｏＲＶ、ＢａｍＨＩ、ＥｃｏＲＩ的酶切位点分布与超强毒ＲＢＩＢ株、标准强毒ＧＡ株的完全相同。     

2001年APEC会议的主题 新世纪、新挑战:参与、合作、促进共同繁荣

１．什么是ＡＰＥＣ？ＡＰＥＣ是亚太经济合作组织的英文简称，其英文全称是ＡｓｉａＰａｃｉｆｉｃＥｃｏｎｏｍｉｃＣｏｏｐｅｒａｔｉｏｎ。２．何时成立？１９８９年１１月，首届亚太地区部长级会议在澳大利亚首都堪培拉举行，亚太地区１２个国家的外交、经贸部长参加了会议，ＡＰＥＣ由此诞生。３．都有哪些成员？中国何时加入？ＡＰＥＣ创始国有１２个，即澳大利亚、美国、加拿大、新西兰、日本、韩国、菲律宾、马来西亚、新加坡、文莱、泰国和印度尼西亚。１９９１年１１月，经与ＡＰＥＣ反复磋商，在＂一个中国＂原则和区别主权和国…     

鸡大肠杆菌病多价灭活苗的菌种选择和冻干保藏

８０年代以来，鸡大肠杆菌病（ｃｈｉｃｋｅｎｃｏｌｉｂａｃｉｌｌｏｓｉｓ）几乎遍及所有的商业鸡群，给养鸡业带来较大的直接和间接经济损失。根据鸡致病性大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）易产生耐药性和抗原血清型多样性的特点，辽宁省益康生物制品厂自１９９４年起，为试制鸡大肠杆菌病中草药佐剂多价灭活疫苗，进行了系统鉴定和筛选，并对菌种冻干保存条件进行了研究，现报道如下。１　材料鸡致病性Ｅ．ｃｏｌｉ冻干菌种Ａ、Ｂ、Ｃ，由中国兽药监察所提供；斜面菌种ＳＥ，由解放军农牧大学提供。ＳＢ１－２、Ｂ２－１及其他菌株，为本地区病…     

家禽数量性状的DNA标记

家禽数量性状的ＤＮＡ标记严华祥译Ｊ．ＨＩＬＬＥＬ著自从１９８０年Ｂｏｔｓｔｅｉｎ等人采用ＲＦＬＰ作为一种新的遗传标记（Ｂｏｔｓｔｅｉｎ等，１９８０），１４年来ＤＮＡ标记领域发生了一场革命（Ｃｈｕｍａｋｏｖ等，１９９２；Ｗｅｉｓ－ｓｅｎｂａｃｈ等，１９...     

鸵鸟支原体病的诊治

１９９６年１２月某鸵鸟养殖场鸟群中发生以咳嗽、呼吸困难、气管罗音等呼吸道症状和腿部病变运动障碍为主的疾病．易感鸟龄为５～１２周龄，发病率２８．４％（２３／８１），病死率８．７％（２／２３），淘汰率３．７％（３／８１）。经流行病学、临床症状、病理解剖和血清学试验分析，确诊为支原体病（Ａｖｉａｎｍｙｃｏｐｌａｓｍｏｓｉｓ）。通过药物治疗试验证明，壮观霉素（ＵＮＩＳＰＥＣＴ）、百病消（Ｂａｙｔｒｉｌ）、强力米先（ＵＮＩＭＹＣＩＮ）、红霉素（Ｅｒｙｔｒｏｍｙｃｉｎ）和泰乐菌素（Ｔｙｌｏｓｉｎ）等药物治疗有效。     

桑始叶螨生物学特性研究

桑始叶螨生物学特性研究孙绪艮，周成刚，刘玉美，朱淑杰（山东农业大学）螨类中对桑树危害较大的是叶螨。山东地区桑树上发生的叶螨种类主要有朱砂叶螨（ＴｅｔｒａｎｙｃｈｕｓｃｉｎｎａｂａｒｉｎｕｓＢｏｉｓｄｕｖａｌ）和桑始叶螨（Ｅｏｔｅｔｒａｎｙｃｈｕｓｓｕ...