牛、羊卵母细胞孤雌激活的研究

本试验主要比较了离子霉素、电脉冲两种方法激活牛、羊体外成熟卵母细胞的效率。两种激活方法中。牛胚胎卵裂率无显著差异（90．61％对94．40％，P〉0．05），而离子霉素激活胚胎的囊胚发育率极显著高于电激活方法（12．3％对2．4％，P〈0．01）。两种方法对羊胚胎的研究中，羊胚胎卵裂率无显著差异（72．4％对77．4％，P〉0．05）。但是离子霉素激活胚胎的囊胚发育率显著高于电激活方法（3．67％对10．40％，P〈0．05）。本试验中还比较了用化学激活法（离子霉素）激活牛体外成熟卵母细胞后，用SOFaa体系培养，换液与不换液对孤雌激活胚胎体外发育的影响。结果表明：在第4天不换液的胚胎卵裂率和囊胚率极显著高于换液的胚胎（11．64％对3．49％。P〈0．01）。     

牛卵母细胞的孤雌激活研究

本文探讨了透明质酸酶(HYA)的浓度和作用时间对牛体外成熟卵母细胞脱卵丘的影响,不同强度电脉冲 乙醇 6-DMAP对牛体外成熟卵母细胞的孤雌激活作用以及和乙醇 6-DMAP激活的比较。对电融合脉冲强度、脉冲次数进行了优化。结果表明:卵母细胞成熟培养22h,用0.20%HYA作用10min或0.50%HYA作用5min效果较好。在激活电压1.6kV/cm、20μs/次、间隔1s,脉冲次数为1次的条件下的激活效果较好,在此条件下与乙醇 6-DMAP激活相比较,孤雌激活胚胎的囊胚率分别为19.6%和26.9%,差异不显著。     

对牛卵母细胞孤雌激活条件优化的研究

本文探讨了HYA（透明质酸酶）的浓度和作用时间对牛体外成熟卵母细胞脱卵丘的影响,不同强度电脉冲＋乙醇＋6-DMAP对牛体外成熟卵母细胞的孤雌激活作用以及和乙醇＋6-DMAP激活的比较。对电融合脉冲强度和脉冲次数进行了优化。结果表明：卵母细胞成熟培养22h,用0．20％HYA作用10min或0．50％HYA作用5min效果较好。在激活电压1．6kV/cm、20μs／次、间隔1s,脉冲次数为1次的条件下的激活效果较好,在此条件下与乙醇＋6-DMAP激活相比较,孤雌激活胚胎的囊胚率分别为19．6％和26．9％,差异不显著。     

兔卵母细胞的孤雌激活

从电脉冲次数、脉冲强度、脉冲间隔时间三方面对兔卵母细胞的孤雌激活进行了研究。结果表明，注射HCG后16h的MⅡ期卵，用1．4kV／cm、60μs的直流脉冲电激，脉冲次数分为1、2、4、8次4组，每次间隔30min，随着电激活次数的增加，活化率从46．5％增加到95．8％(P＜0．01)，但是电激活8次后，桑椹胚率却从63．6％下降列21．2％，囊胚率从23．6％下降列2．8％(P＜0．01)；用60μs的直流脉冲电激3次，每次间隔30min，分为0．4、1．2、2．4kV／cm3组，以1．2kV／cm脉冲强度的兔卵母细胞激活较为理想，脉冲强度增加到2．4kV／cm时，卵细胞死亡率升为67．1％(P＜0．01)。用1．4kV／cm、60μs的直流脉冲电激3次，电脉冲间隔时间分为30、120、240min3组，卵细胞活化率分别为68．6％、91．5％、91．9％（p＜0．01)。     

哺乳动物卵母细胞孤雌激活的研究进展

本文对哺乳动物卵母细胞孤雌激活机制、激活方法及激活效果的影响因素等作了浅要的综述和总结。     

透明质酸酶对牛卵母细胞孤雌激活的研究

在37－39℃50mL/L CO2条件下，用含80mL/L发情牛血清及50mL/L犊牛血清的M199成熟培养液培养牛的A、B级卵丘－卵母细胞复合体（COCs)，18－22h后以无血清的TCM199培养液洗涤3次，用透明质酸酶消化吹打脱去卵丘细胞，以无血清的M199培养液洗涤3次，移回成熟培养液中培养。结果：卵细胞于成熟后第3d开始出现卵裂，第5d卵裂率达到37％，第9d囊胚率达5％－9％。表明透明质酸酶可以促使成熟的牛孤雌卵母细胞激活并发育至囊胚。     

哺乳动物卵母细胞孤雌激活的研究

研究哺乳动物卵母细胞的激活及孤雌胚发育,对了解哺乳动物早期胚胎发育、深入细致地研究核移植技术和动物克隆技术、建立生产孤雌哺乳动物品系及加速家畜育种进程等均具有重要意义。本文主要从卵母细胞孤雌激活的机制及影响因素、不同动物卵母细胞的激活、提高卵母细胞孤雌激活效果的技术途径以及对孤雌激活的研究意义和发展前景等方面作了详尽论述,为同类研究提供参考。     

影响牛卵母细胞孤雌激活胚胎发育的因素

卵母细胞体外成熟后孤雌激活发育是一个新兴的研究方向,影响牛卵母细胞孤雌激活发育因素很多,国内此方面的报道较少,文中就牛卵母细胞体外成熟后孤雌激活胚胎发育的影响因素进行总结。旨在为研究体外孤雌胚发育和孤雌胚胎的培养提供参考。     

哺乳动物卵母细胞孤雌激活的研究进展

本文概述了卵母细胞孤雌激活的研究历程,并从激活机制、激活方法及影响因素等方面对孤雌激活的研究意义和发展前景进行了综述。     

哺乳动物卵母细胞孤雌激活的研究进展

本文主要从卵母细胞孤雌激活机制、方法及影响因素,对孤雌激活的研究意义和发展前景等方面作一综述。     

不同哺乳动物卵母细胞孤雌激活的研究进展

卵母细胞孤雌激活是核移植的关键技术之一，卵母细胞激活率的高低直接影响核移植的效率。作者主要对卵母细胞孤雌激活的机制、激活途径及不同哺乳动物卵母细胞孤雌激活进行概括性的分析。     

大鼠卵母细胞孤雌激活方法的研究

本试验以Wistar大鼠为动物模型,研究了单独应用乙醇、电刺激、 6-DMAP以及乙醇/6 DMAP、 电刺激/6-DMAP 对大鼠卵母细胞激活的影响。结果表明,单独应用电刺激、乙醇、6-DMAP均能激活大鼠卵母细胞,但激活率较低,卵母细胞的发育不能超过2-细胞阶段。单独应用电刺激时,相同的场强条件下,电刺激2次的激活效果明显优于电刺激1次的激活效果,并且电刺激场强在100 V/mm时卵母细胞的激活率最高。乙醇或电刺激联合6-DMAP激活大鼠卵母细胞,激活率和后期囊胚发育率都明显优于单独使用1种激活方法激活的效果。     

小鼠卵细胞体外成熟培养及孤雌激活

[目的]利用小鼠卵母细胞体外成熟培养及3种激活方法（乙醇激活、氯化锶激活、乙醇-氯化锶激活）对小鼠卵母细胞进行了孤雌激活研究。[方法]小鼠经注射孕马血清促性腺激素（PMSG）48h后,摘取卵巢获得3级未成熟卵母细胞．在成熟培养液（M199100mL＋丙酮酸钠2．2mg＋抗100IU／mL＋LH2IU／mL＋FCS10％）中对小鼠未成熟卵细胞进行体外成熟培养,获得的成熟卵母细胞分别在乙醇、氯化锶、乙醇一氯化锶不同激活剂中激活,[结果]A级卵母细胞成熟率为79％．B级卵母细胞成熟率为70％,C级卵母细胞成熟率为55％。A级卵母细胞使用氯化锶激活率可达80．0％,为最佳方法。[结论]A级卵母细胞成熟培养效果最好。孤雌激活氯化锶激活效果高于乙醇．．     

小鼠卵母细胞氯化锶激活条件

以昆明小鼠为试验对象，研究了氯化锶（SrCl2)浓度，激尖处理时间以及卵龄对卵母细胞SrCl2孤雌活化的影响。hCG注射后18h的小鼠卵母细胞在1.6,5.0,10,20mmol/L SrCl2的激活液中处理10min，各组间的激活率（原核期卵母细胞的比例）无显著性差异（P＞0．05）。10，20mmol/L SrCl2组发育至2－，4－细胞期比率（59．26％，20．37％，63．79％，20．69％）同于1．6，5．0mmol/L 组（20．63％，9．26％，47．06％，7．84）（P＜05）。只有20mmol/L组的少数激活卵母细胞（3．45％）发育至桑椹胚阶段。10，20mmol/L SrCl2组处理20，40，60min，2组间的活化率无显著性差异。处理40min,20mmol/L组的桑椹胚和囊胚发育率（64．44％，22．22％）均显著高于10mmol/L组（30．36％，11．61％），处理60min,10mmol/L组的桑椹胚和囊胚发育率（84．68％，46．77％）均显著高于20mmol/L组（67．46％，28．57％），10mmol/L SrCl2处理，20，40，60，180，360min，其活化率和2－细胞的发育率无显著性差异。60，180min处理组的囊胚发育率（49．58％，47．59％）差异不显著，但2者均显著高于20，40，360min组（4．50％，12．24％和35．53％），后3者组间差异显著。随卵龄的增加，活化率显著增加。hCG注射后16h卵母细胞的活化率（77．78％）显著高于14h的卵母细胞（29．63％），而hCG注射后18h卵母细胞的活化率（49．19％）又显著高于16h的卵母细胞，hCG注射后18，20h卵母细胞的活化率差异不显著（94．19％，85．90％）。hCG注射后14，16，18h卵母细胞激活后的囊胚发育率（6．71％，27．78％，47．67％），各组间差异显著。但hCG注射后20h卵母细胞激活后的囊胚发育率（39．74％）显著低于18h的卵母细胞。     

山羊卵母细胞孤雌激活及孤雌胚的体外培养

为了比较不同的激活方法对卵母细胞孤雌激活的影响,以及培养液(CR1aa)中添加不同类型的血清对孤雌激活胚体外发育的影响。采用Eth 6-DMAP、A23187 6-DMAP和Ion 6-DMAP三种方法激活山羊卵母细胞,Eth 6-DMAP组孤雌激活胚的卵裂率和囊胚率(35.2%和4.8%)显著低于A23187 6-DMAP组(68.9%和24.1%)和Ion 6-DMAP组(88.1%和48.0%),表明以Ion 6-DMAP激活最为理想。在培养液(CR1aa)与颗粒细胞共同培养条件下,分别添加100 mL/L的发情牛血清(OCS)、胎牛血清(FBS)和新生牛血清(NCS)。添加OCS和FBS后,孤雌胚囊胚率分别为48.1%和45.0%,显著高于添加NCS组(26.0%)。表明OCS、FBS和NCS能有效的提高孤雌胚的体外发育能力,尤其是对提高孤雌胚的囊胚发育能力更佳。     

牛孤雌生殖胚与体外受精胚体外发育比较

从卵巢采集的卵丘-卵母细胞复合体(COCs)经体外成熟培养24 h后,随机分为2组分别用于孤雌激活与体外受精.在相同培养条件下,比较孤雌生殖胚与体外受精胚的发育率和发育速度.结果表明将牛孤雌生殖胚与体外受精胚分别置于mSOFaa和mBECMaa培养液中培养,卵裂率(89.3%vs.80.1%;83.2%vs.82.5%)、囊胚发育率(27.5%vs.24.0%;28.9%vs.21.9%)和孵化率(58.7%vs.56.7%;51.5%vs.53.3%),均无显著差异(P＞0.05);孤雌生殖胚与体外受精胚在体外发育的速度基本相同.对孤雌生殖胚胎进行培养可以代替体外受精胚胎筛选最佳体外培养系统.     

猪卵母细胞体外成熟和孤雌激活参数研究

本研究比较了按不同方法贮藏的培养液对猪卵母细胞体外成熟及成熟后孤雌激活对胚胎发育的影响。此外,还探索了针对初情期前母猪体外成熟卵母细胞和孤雌激活方案。结果如下：①1.4 kv/cm、100 μs、1DC电激活后,卵母细胞死亡率明显高于2.0 kv/cm、30 μs、1DC和2.0 kv/cm、60 μs、1DC处理组,但激活后胚胎卵裂率和囊胚率相似;②使用钙离子载体和6-二甲基氨基嘌呤（Ionomycin+6-DMAP）处理后,胚胎卵裂及囊胚率都明显不如电激活处理;③6次独立试验结果证明：经4℃冷藏和-20℃冷冻保存的培养液用于猪卵母细胞培养,其体外成熟率、孤雌激活后的卵裂率及囊胚发育率无显著差异（P＞0.05）。说明成熟卵在2.0 kv/cm、30 μs、1DC或者 2.0 kv/cm、60 μs、1DC电击参数激活下可以降低死卵率;按本试验设计的电激活方案处理初情期前母猪成熟卵优于化学激活;在-20℃冷冻保存猪卵母细胞成熟液是可行的。      

猪体外成熟卵母细胞孤雌激活和胚胎培养的研究

以猪体外成熟卵母细胞为实验材料,研究了不同激活方法、激活时间以及是否添加滋养层细胞的条件对猪成熟卵母细胞体外培养的影响。结果表明,Ionomycin+6-DAMP+CB法卵裂率高,且差异显著;使用6-DMAP激活3h的卵裂率要低于4h和5h组,且差异显著;在卵裂率、8细胞率和囊胚率上,添加滋养层细胞组与未添加滋养层细胞组之间无显著差异,但添加vero细胞后效果略好。     

小鼠卵母细胞孤雌激活试验

应用两种激活方法(乙醇和离子霉素 6-DMAP)激活和三种培养液(CZB，KSOM，M199)对90只小鼠卵母细胞进行了孤雌激活研究。结果显示，离子霉素结合6-DMAP的激活效果高于乙醇；三种培养液中，以CZB激活效果较为理想。在随后的卵母细胞发育率方面，CZB、KSOM和M199三者之间的差异极为明显，以CZB最高，KSOM次之，M199的发育率最低。