粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)卵巢细胞系克隆株Tn5B_(1-4)特性的研究

通过有限稀释法由粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)Tn 5 B_1细胞系中分离出多个细胞株,经筛选获得一个理想的克隆株Tn 5 B_(1-4),该克隆株的特性不同于原细胞系Tn_5B_1。该克隆株的细胞形态一致,细胞群体倍增时间较原细胞株短.而且细胞活力强,特别是在维持粉纹夜蛾单粒包埋核型多角体病毒(Tn SNPV)的复制能力方面高于原细胞系。另外经生物测定看出,在该克隆株中增殖的病毒毒力与虫体内增殖的病毒无显著差异。     

粉纹夜蛾核型多角体病毒在同源寄主细胞系中复制和连续传代的研究

本文研究了粉纹夜蛾单粒包埋核型多角体病毒(TnSNPV)在同源寄主细胞系Tn5B_(1—4)中的生长特性。结果表明,接种36h 后,无包涵体游离病毒(TnSNPV—NOV)的增殖达到高峰;在60代的连续传递过程中,TnSNPV-NOV 毒力随传递代数的增加而减低,但不明显。传至60代时仍可保持感染力1×10~5TCID_(50)(组织感染中量)/mL;而多角体的毒力变化十分显著,前几代能使粉纹夜蛾幼虫死亡率迭95%以上,传递到30代以后产生的多角体对粉纹夜蛾的幼虫几乎失去毒力;多角体的产量也明显降低,前几代病毒在每个细胞中可达670PIB,但20代以后,每细胞中多角体的产量仅在100PIB 以下.     

6种日本核型多角体病毒对斜纹夜蛾幼虫致病性的研究

从日本引进6种核型多角体病毒(NPV),保存5年后仍对斜纹夜蛾幼虫持有致病性。其中斜纹夜蛾核型多角体病毒(福山株)、甘蓝夜蛾核型多角体病毒(芸北株)、粘虫核型多角体病毒(芸北株)、八字地老虎核型多角体病毒(那须株)均保持较强的致病力,其剩余侵染力在1/1.34~1/2.50间。甘蓝夜蛾核型多角体病毒(东京株)的致病力下降最大,剩余侵染力为1/17.5、其次为海灰翅夜蛾核型多角体病毒(埃及株),剩余侵染力为1/7.01。     

某些培养条件对甘蓝夜蛾核型多角体病毒离体增殖的影响

不同培养条件对甘蓝夜蛾核型多角体病毒 （ Ｍｂ Ｎ Ｐ Ｖ） 在同源寄主细胞系 Ｍｂ９３１１０４ 中增殖的研究。结果表明, 培养基种类、细胞密度和细胞龄期影响 Ｍ ｂ Ｎ Ｐ Ｖ 在细胞系中的增殖, 引起细胞感染率和多角体产量显著的差异。使用 Ｔ Ｃ—１００ 昆虫组织培养基, 细胞密度为３×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍ Ｌ的对数生长期的细胞接毒最适于 Ｍ ｂ Ｎ Ｐ Ｖ 的增殖, 条件培养基对该病毒在细胞系中的增殖没有显著影响。     

茶毛虫核型多角体病毒防治茶毛虫的效果及持效性

应用茶毛虫核型多角体病毒对茶园第1代茶毛虫进行了防治试验.结果表明,浓度为3×106、5×106、7×106和9×10"6PIB·mL-1的茶毛虫核型多角体病毒对茶毛虫的防治效果分别达85.6%、92.3%、94.8%和97.0%.对第2代茶毛虫的持续防治效果分别达78.7%、83.6%、91.3%和94.9%;茶毛虫核型多角体病毒浓度与茶毛虫发病死亡率之间呈显著正相关,与茶毛虫发病死亡时间呈显著负相关.     

多种蚕病的症状介绍

<正>1、病毒病由病毒引起的蚕病,主要有:核型多角体病、质型多角体病、病毒性软化病、浓核病等。1)核型多角体病核型多角体病,又称血液型脓病。病原为桑蚕核型多角体病毒,杆状病毒科。春蚕期较多发生,经     

600亿PIB/g棉铃虫核型多角体病毒水分散粒剂防治加工番茄田棉铃虫田间试验效果

通过对600亿PIB/g棉铃虫核型多角体病毒水分散粒剂对加工番茄田棉铃虫的防治效果及对作物和天敌的安全性试验表明:棉铃虫核型多角体病毒能有效防治番茄棉铃虫,其药后5 d防效与5%高效氯氟氰菊酯处理相当,低于5.7%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐对照处理。药后7 d、10 d、15 d的防效均高于两个对照处理,表明棉铃虫核多角体病毒的持效期较长。     

300亿PIB/g斜纹夜蛾核多角体病毒母药的生产工艺

阐述了300亿PIB/g斜纹夜蛾核多角体病毒母药的生产工艺,包括斜纹夜蛾的人工饲养、多角体病毒的人工增殖、多角体病毒的提纯、产品的制备、加工及包装.该产品为粉剂,多角体含量为300亿PIB/g.经生物测定,当多角体病毒的接种浓度为2.0×107 PIB/mL时,斜纹夜蛾四龄幼虫的平均死亡率可达86.40％.     

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)增殖条件研究

试验研究表明：32℃温度条件下增殖病毒多角体的生产效率最高,以甜菜夜蛾为宿主,5龄幼虫是最适宜的喂毒时期,较低的喂毒剂量可以减少毒源多角体的消耗。5龄、32℃和105～106PIB·ml-1处理组合每头供试幼虫平均日产AcMN－PV多角体可达（2．30～2．32）×108个     

甜菜夜蛾核型多角体病毒对芦笋园甜菜夜蛾的田间防效

以芦笋园甜菜夜蛾幼虫为对象,开展甜菜夜蛾核型多角体病毒田间杀虫活性、持效性以及与氯虫苯甲酰胺的协同增效作用试验。结果表明,15亿PIB·mL^-1甜菜夜蛾核型多角体病毒水剂对甜菜夜蛾幼虫具有优良的杀虫活性,1 800 mL·hm^-2处理药后5 d防效达94.5%,药后10 d防效依然有75.7%,持效性较好。甜菜夜蛾核型多角体病毒与氯虫苯甲酰胺混合使用药后3和5 d的防效显著高于甜菜夜蛾核型多角体病毒或氯虫苯甲酰胺单用的防效,显著提高了速效性和综合防效。15亿PIB·mL^-1甜菜夜蛾核型多角体病毒水剂是一种新型生物农药,无毒无残留,对人畜及其他生物安全,可在生产上推广应用。     

Character of viral clones in serial passage of a nuclear polyhedrosis virus in vitro

In this paper,the character of viral clones from early and late passages after serial passages of Trichoplusia ni single nuclear polyhedrosis virus in a Tn 5B1-4 cell line is described.It demonstrated that no significant difference was observed in the infectivity of the cell culture supernatants of various passages to the cell line.The number of polyhedra produced in a cell and infectivity of polyhedra to T.ni larvae declined strikingly with the increase of passages.The polyhedra without virions began to increase from passage to passage.The result of restriction enzyme digestion showed that the DNA restriction fragments of the clones were different from wild virus DNA,although they came from a homogeneous viral DNA.The mutation of viral DNA resulted in the in crease of noninfectious polyhedra without virions and in the increase of the number of polyhedra produced in cell line as well as virulence of the polyhydrosis inclusion bodys to T.ni larvae after prolonged passages of Tn SNPV in the cell culture.     

Marc-145细胞低血清适应培养传代稳定性和无血清驯化研究

通过驯化建立无血清悬浮培养型Marc-145细胞系,分析驯化传代对细胞特性的影响,为大规模生产疫苗用的宿主细胞提供基础。采用缓降培养液中血清浓度的方法,连续传代培养50代,并用无血清培养基进行悬浮培养驯化,对传代和驯化过程中的P10、P20、P30、P40和P50代细胞的形态、倍增时间、生长曲线、染色体和对蓝耳病病毒敏感性等特性进行对比分析。研究发现,传代过程中Marc-145细胞均呈扁平多边形上皮样生长,P10代细胞倍增时间为34.15 h,P50代细胞倍增时间为36.16 h,P50代细胞倍增时间稍有延长但差异不显著。P10、P20、P30、P40和P50代的Marc-145细胞生长曲线均呈“S”形;P10代和P50代细胞染色体众数都集中在88~90条。接种病毒后,P10、P20、P30、P40和P50细胞TCID₅₀间无显著差异,表明细胞传50代后,细胞特性没有发生明显变化。P50细胞进行无血清悬浮培养48 h后,细胞密度可达到4.14×10⁶ mL^-1。     

Rapid identification of nonessential genes of herpes simplex virus type 1 by Tn5 mutagenesis

The large genome of herpes simplex virus type of (HSV-1) encodes at least 80 polypeptides, the majority of which have no recognized function. A subgroup of these gene products appears to be nonessential for virus replication in cell culture, but contributes to the complex life cycle of the virus in the host. To identify such functions, a simple insertional mutagenesis method has been used for selective inactivation of individual HSV-1 genes. The bacterial transposon Tn5 was allowed to insert randomly into cloned restriction fragments representing the entire short unique (US) region of the HSV-1 genome. Of the 12 open reading frames that were mutagenized with Tn5, mutant derivatives of US2, US4, and US5 were recombined into the virus. These three genes proved to be nonessential for HSV-1 replication in Vero (African Green monkey kidney) cells and the US4 gene appeared to be involved in viral pathogenesis in the central nervous system of mice. This rapid mutagenesis procedure should prove useful in exploring the entire HSV-1 genome as well as the genomes of other complex animal viruses.     

抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体的制备与鉴定

为了制备抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)的单克隆抗体(MAb),本试验将Vero细胞中增殖的PEDV超速离心纯化,作为免疫原免疫BALB/c雌性小鼠,采用常规的淋巴细胞杂交瘤技术和PEDV重组S蛋白为基础的间接ELISA方法,制备并筛选能稳定分泌PEDV特异性抗体的杂交瘤细胞;分别采用间接ELISA、Western blot和间接免疫荧光(IFA)试验,对单克隆抗体的亚型、特异性等生物学特性进行鉴定。结果表明,本试验成功获得了1株稳定分泌PEDV特异性抗体的杂交瘤细胞株5C3。MAb亚类鉴定为IgM,轻链为k型。杂交瘤细胞连续传至20代,细胞培养上清液和小鼠腹水抗体效价分别稳定在1∶600和1∶10 000。特异性试验结果显示,MAb不与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪伪狂犬病毒(PrV)、猪圆环病毒(PCV2)发生交叉反应。western-blot结果显示,MAb能特异性识别PEDV的重组S蛋白。IFA试验结果表明,MAb能与PEDV感染的vero细胞产生特异性荧光。说明本试验获得的MAb能特异性识别重组及天然的PEDV S蛋白,具有良好的抗原性和特异性。     

Adaptation of lymphadenopathy associated virus (LAV) to replication in EBV-transformed B lymphoblastoid cell lines

A strain of lymphadenopathy associated retrovirus ( LAV ) passaged in vitro was used to infect a lymphoblastoid cell line obtained by transformation with Epstein-Barr virus of B lymphocytes from a healthy donor. The virus produced from this line (B- LAV ) was also able to grow at a high rate in some other lymphoblastoid lines and in a Burkitt lymphoma line. This adapted strain retained the biochemical, ultrastructural, and antigenic characteristics of the original strain, as well as its tropism for normal T4+ lymphocytes. It is thus possible to grow LAV in large quantities that can be used for the preparation of diagnostic reagents. The interaction between such a human retrovirus and Epstein-Barr virus, a DNA virus, may have some implication for the pathology of the acquired immunodeficiency syndrome and related diseases.     

湘西龙山百合对小鼠B-16黑色素瘤细胞黑色素含量、酪氨酸酶活性的影响

目的 观察不同浓度湘西龙山百合提取液对小鼠B-16细胞细胞活力、黑色素含量、酪氨酸酶活性的影响。方法 选用同一传代小鼠B-16黑色素瘤细胞并分组,分别加入不同浓度百合提取液、维生素C二种溶液作用3 d后,用MTT法测定B-16细胞活力;用Maeda等的方法测定B-16细胞酪氨酸酶活性;用Victoria等的方法测定B-16细胞黑色素含量。结果 湘西龙山百合提取液对小鼠B-16细胞的酪氨酸酶活性、黑色素合成的抑制作用明显强于维生素C,组间差异有统计学意义（P<0.05）,且其抑制作用随浓度的增加而增加;同时湘西龙山百合提取液其细胞毒性作用同样强于维生素C,组间差异有统计学意义（P<0.05）。结论 百合提取液对B-16细胞的生长、酪氨酸酶活性和黑色素合成的抑制作用强于维生素C,其抑制作用与浓度呈正相关。     

基于PK15细胞的猪圆环病毒2型全悬浮培养工艺

【目的】筛选1株适合PCV2病毒生产的悬浮细胞株,摸索PCV2悬浮生产工艺（病毒种毒来源、MOI及收获时间）,为大规模悬浮培养技术制备疫苗提供试验依据。【方法】使用有限稀释法对PK15原细胞稀释后接种于96孔板,每2 d观察细胞生长和形态,待细胞90%长满后,将细胞从96孔板陆续扩至24孔板、12孔板、6孔板,最后到方瓶,筛选3株可贴壁生长的、形态较好的PK15克隆。3株克隆（PK15-1C8、2F11、1E5）按照1×10⁶细胞/mL的密度,直接接种在PK15的无血清培养基中,并置于37℃,5%二氧化碳,120 r/min的摇床培养箱中继续培养,每天监测细胞密度和活率,每3 d传代,使细胞逐渐适应悬浮环境,驯化为可全悬浮、无血清培养的悬浮细胞株;细胞传代稳定并建库后,接种PCV2病毒,通过对比3株悬浮克隆细胞培养PCV2病毒含量的差异,筛选1株克隆细胞,用于生产PCV2;针对不同种毒（来源于贴壁细胞或悬浮细胞）,摸索感染MOI（0.1、0.2、0.5）及收获时间（48、72、96、120h）,确定PCV2最佳生产工艺。【结果】（1）贴壁细胞置于无血清培养基中,适应至第2代时细胞即可呈悬浮生长,连续传至11代,细胞生长稳定,按照1×10⁶/mL接种细胞,细胞生长72h时细胞密度可达到10×10⁶/mL,活率在95%以上,倍增时间为20h左右;（2）3株悬浮细胞使用相同条件,分别接种PCV2病毒后,PK15-1C8克隆细胞的病毒含量可达到10^6.4TCID₅₀/mL,克隆PK15-2F11（10^5.5TCID₅₀/mL）、PK15-1E5（10^5.6TCID₅₀/mL）,3株克隆细胞病毒含量均高于原克隆（10^4.7TCID₅₀/mL）,但PK15-1C8克隆细胞的病毒含量更高且更稳定,确定为后续研究用细胞;（3）使用贴壁细胞来源的种毒（10^6.4TCID₅₀/mL）感染PK15-1C8克隆细胞后,最优工艺为接毒时细胞密度1×10⁶/mL,以0.1MOI接毒,接毒后72h收获,最高病毒含量为10^6.5TCID₅₀/mL。以来源于悬浮细胞的种毒（10^6.3TCID₅₀/mL）感染细胞后,病毒含量较贴壁细胞来源种毒更高,最高可达10^7.3TCID₅₀/mL,其最优工艺为接毒时细胞密度1×10⁶/mL,以0.2MOI接毒,接毒后72h收获。【结论】通过对PK15细胞进行单克隆筛选,驯化悬浮、3株悬浮细胞接种PCV2后病毒含量的对比,确定一株病毒含量最高的悬浮细胞,并以此悬浮细胞为基础进行PCV2生产工艺摸索,建立了全悬浮无血清培养的PK15-1C8细胞增殖PCV2工艺,该工艺首次使用悬浮细胞扩增PCV2病毒为种毒进行接毒,最高病毒含量可达10^7.3TCID₅₀/mL,可用于工厂化疫苗生产。     

Engineering herbicide tolerance in transgenic plants

The herbicide glyphosate is a potent inhibitor of the enzyme 5-enolpyruvylshikimate- 3-phosphate (EPSP) synthase in higher plants. A complementary DNA (cDNA) clone encoding EPSP synthase was isolated from a complementary DNA library of a glyphosate-tolerant Petunia hybrida cell line (MP4-G) that overproduces the enzyme. This cell line was shown to overproduce EPSP synthase messenger RNA as a result of a 20-fold amplification of the gene. A chimeric EPSP synthase gene was constructed with the use of the cauliflower mosaic virus 35S promoter to attain high level expression of EPSP synthase and introduced into petunia cells. Transformed petunia cells as well as regenerated transgenic plants were tolerant to glyphosate.