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采用分级盐析和Sephadex G-50的方法分离纯化无种皮南瓜籽胰蛋白酶抑制剂,用BAPNA法进行抑制活性的测定,用SDS-PAGE法测定蛋白质的分子量,用不同的温度处理方法对它的热稳定性进行研究,并对抑制剂的Lys和Cys进行了化学修饰。结果表明在饱和度为60%的硫酸铵作用下,能够沉淀出活性较强的胰蛋白酶抑制剂,其分子量为29 512 Da,并且具有一定热稳定性,在80℃恒温处理1 h仍保持一定的抑制活性。证明了无种皮南瓜籽胰蛋白酶抑制剂是一种分子量较小的,以Lys为活性中心的具有一定热稳定性的蛋白质。 相似文献
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通过热处理、硫酸铵盐析、膜超滤及SP-Sepharose离子交换层析,从章鱼内脏中纯化得到一种胰蛋白酶抑制剂(Octopus Trypsin Inhibitor,OTI).Tricine-SDS-PAGE电泳结果显示,OTI的分子质量约为6500 u.性质分析结果表明:OTI在pH=1.0~11.0缓冲液中孵育30 min,抑制活性稳定;在100℃下加热1 h、2 h后仍分别具有90%和65%的抑制活性,具有良好的pH值稳定性和热稳定性;OTI能够显著抑制胰蛋白酶的活性,对胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶几乎无抑制活性;OTI能够有效抑制蓝圆鲹肌肉中肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(MBSP)引起的肌球蛋白降解. 相似文献
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采用去离子水抽提、硫酸铵分步盐析、亲和层析和分子筛层析等方法,从山合欢种子中得到一种胰蛋白酶抑制剂.SDS-PAGE结果表明,该抑制剂由2条多肽链构成,分子量分别为14.5和5.5 kDa.MALDI-TOF测定该抑制剂的精确分子量为19768.23 Da.该抑制剂能与胰蛋白酶形成1∶1的复合物,并且它们的结合不受SDS的影响.该抑制剂的肽指纹图谱中有7个主要的信号簇.通过串联质谱测定该抑制剂的部分氨基酸序列,比对发现与其他Kunitz蛋白酶抑制剂有较高的同源性. 相似文献
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[目的]对大豆中胰蛋白酶抑制剂进行钝化处理,降低其活性,提高大豆饲料的营养价值。[方法]采用正交试验设计对大豆中胰蛋白酶抑制剂的化学钝化法(亚硫酸钠法)和物理钝化法(微波法和超声波法)进行比较,确定最优钝化工艺条件。[结果]大豆中胰蛋白酶抑制剂的化学法钝化最优工艺条件为:Na2SO3浓度为0.03 mol/L,温度75℃,钝化时间60 min;物理微波法钝化最优工艺条件为:微波功率240 W,时间90 s,粉碎度为过60目筛;物理超声波钝化法最优工艺条件为:加水量30 ml,时间30 min,粉碎度为过60目筛。[结论]3种钝化方法处理后,大豆中胰蛋白酶抑制剂活性均明显降低。 相似文献
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[目的]从紫花芸豆中分离纯化胰蛋白酶抑制剂。[方法]以紫花芸豆为材料,采用脱脂、酸抽提、热变性、硫酸铵分级沉淀及离子交换层析和凝胶过滤层析等方法,分离纯化胰蛋白酶抑制剂。[结果]胰蛋白酶抑制剂经PAGE和IEF电泳显示单一条带。凝胶过滤法测定其表观分子量约为59kD。SDS电泳结果显示它有3个亚基,分子量分别为34、16、15kD。等电聚焦法测定其等电点为5.25。动力学的方法检测PVTT与胰蛋白酶发生不可逆抑制作用。[结论]离子交换层析和凝胶过滤层析法能快速地分离纯化紫花芸豆中的胰蛋白酶抑制剂。 相似文献
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[目的]研究紫花芸豆(Phaseolus vulgaris)胰蛋白酶抑制剂(PVTI)的部分性质。[方法]探索了不同温度、不同还原剂和变性剂处理对PVTI抑制活性和蛋白构象的影响。[结果]PVTI是一种对热稳定蛋白;部分二硫键对活性中心有重要贡献;经尿素处理,PVTI的荧光光谱没有明显变化,但残留了较少的抑制活性,推测亚基的解离影响了抑制活性而每个亚基的内部结构未受到影响;经盐酸胍处理,Trp残基完全暴露于极性环境中,整个蛋白质分子处于一种松散伸展的状态,PVTI活性全部丧失。[结论]该研究可为PVTI的功能研究及其进一步应用奠定基础。 相似文献
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茶多酚钝化大豆胰蛋白酶抑制因子(STI)的研究 总被引:1,自引:2,他引:1
探索钝化豆类中胰蛋白酶抑制因子(STI)的生物抑制方法.通过测定胰蛋白酶活性来间接反映大豆STI的活性.在探明STI对胰蛋白酶抑制效果的基础上,进行了茶多酚(TP)在不同浓度、pH值、温度和时间条件下对鲜豆奶中的STI及STI标准品(KSTI及BBI)的钝化效果.结果表明:鲜豆奶中的STI和STI标准品均对胰蛋白酶活性具有很强的抑制作用;当鲜豆奶试液、KSTI及BBI的添加浓度分别为0.5 mg/ml、28.0 μg/ml和21.0 μg/ml时,对胰蛋白酶活性的抑制程度最大,抑制率分别为86.67%、100.00%和97.94%;当TP试液与鲜豆奶试液的比例为1:2(体积比)时,TP对STI的钝化效果最好,抑制率为52.30%;当TP:KSTI为25:1(质量比)、作用温度45 ℃、pH4.5、作用时间90 min时,TP对KSTI的抑制率达83.15%;当TP :BBI为20:1(质量比)、作用温度40 ℃、pH4.5、作用时间60 min,TP对BBI的抑制率达76.58%. 相似文献
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为建立CpTI基因定性PCR检测方法,通过数据库查询和测序获得CpTI基因序列,设计特异性定性PCR引物,对引物、PCR反应条件和反应体系进行优化,并对检测方法的特异性、灵敏度等进行分析试验。结果表明,CpTI基因特异性定性PCR检测方法选择退火温度为58℃,引物浓度为0.4μmol/L较好,该方法能够特异性检测样品中CpTI基因,检测灵敏度达0.05%(质量比)。该方法符合农业转基因生物产品成分检测标准对特异性、灵敏度、重复性的要求,可为抗虫转CpTI基因植物生物安全管理提供技术支撑。 相似文献
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探索大豆中胰蛋白酶抑制剂有效、快速的钝化方法.通过正交试验设计研究温度、时间、亚硫酸钠浓度对抑制因子的钝化影响,采用酚红法和国家标准法(GB/T8622-2006)对钝化后大豆中脲酶活性进行定性、定量检测.最优钝化工艺条件为:温度75℃、时间60 min、No2SO3浓度0.03 mol·L-1.亚硫酸钠法是一种简便、... 相似文献
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Hebei Province is one of the main distribution areas growing wild soybean( Glycine soja ) in China. In this study, 461 seed samples,collected from 18 natural populations in this province, were used to electrophoretically observe the change in forms and their frequencies of the Kunitz trypsin inhibitor protein (KTI)in individual populations and geographical areas. Allelic frequencies accounted for 85% for Tia and 15% for Tib in the total samples. Twelve populations examined were polymorphic at the KTI locus, accounting for over 50% in the populations investigated. Four populations, 22% of all the populations, were found to have natural cross-pollination with varied heterozygote rates of 3% -5.5%, and the average was 1% in the total sampies. Geographically, the mean Tib frequency in the north areas was higher than in the south, and higher in the mountainous area than in the plain areas. The populations in a lake ecological environment (Baiyangdian Lake) were almost monomorphic. No obvious relationship between the frequency and the geographical distance was observed. In addition, we first found a mutation for the absence of the KTI in wild soybean. 相似文献
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采用阴离子交换层析和凝胶过滤层析方法,从海南红肉菠萝蜜种子中分离纯化得到胰蛋白酶抑制剂,命名为AHTI.结果表明:该蛋白有抑制胰蛋白酶水解小肽底物的活性作用,由相对分子质量分别约为28.8 kD和16.4 kD的亚基组成的多聚体.AHTI具有稳定的胰蛋白酶抑制活性,对胰蛋白酶的抑制活性与其浓度成正比,AHTI对温度、pH的耐受性较强,2种因素对其胰蛋白酶抑制活性影响较小. 相似文献
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以大豆基因组DNA为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)技术克隆了大豆胰蛋白酶抑制剂基因KSTI3的全长DNA片段,并将其构建到pMD18-T vector上。核苷酸序列测定结果表明:该基因片段全长654 bp,与已发表的KSTI3基因序列同源性达99%。将反义 正义基因片段插入到pBI121 35S启动子下,构建重组质粒pBIKSTI3。通过冻融法将该重组质粒转入根癌农杆菌EHA105中,获得了植物表达载体。 相似文献
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豇豆胰蛋白酶抑制剂(cowpea trypsin inhibitor,CpTI)来自豇豆的可食用部分,由于其具有抗虫谱广且昆虫不易对其产生耐受性的特点,cpti基因被作为抗虫植物基因工程一个重要的候选基因。目前,cpti基因已经被转到烟草、水稻、棉花和番茄等多种作物中。本文介绍了CpTI的特性、抗虫机理、基因工程研究进展,以及转cpti基因水稻的安全性研究,并对蛋白酶抑制剂的分类和安全性问题做了相关介绍。CpTI在分类上属于Bowmun-Birk家族,大量医学研究表明,该家族蛋白质对于癌症的预防和辅助治疗都有积极作用,对人体不存在任何危害。 相似文献