卵黄抗体对ETEC粘附仔猪小肠上皮细胞的体外抑制作用研究

采用热抽提法提取 4种肠毒素性大肠杆菌菌毛蛋白 :K88、K99、F41和 987p。分别制成单价或多价的菌毛蛋白白油佐剂抗原 ,对产蛋鸡进行胸部肌肉分点注射免疫 ,初免后 2周加强免疫 1次。收集高效价卵黄抗体。用所获得各卵黄抗体对体外分离的初生仔猪小肠上皮细胞进行体外粘附抑制试验。结果表明 ,各种菌毛卵黄抗体均能特异地显著抑制相应大肠杆菌对仔猪上皮细胞的粘附 ,而对其他血清型大肠杆菌对肠上皮细胞的粘附无抑制作用     

卵黄抗体被动免疫防治仔猪产肠毒素大肠杆菌性腹泻

用ETECK88+菌株C83907对120日龄待开产蛋鸡进行免疫,获得高免卵黄抗体粉。选用3日龄和21日龄的杜×长×大三元杂交早期断奶仔猪,人工感染C83907大肠杆菌,口服含抗产肠毒素大肠杆菌抗体的卵黄粉进行被动免疫。结果显示,3日龄仔猪服用抗ETEC卵黄抗体粉后,72h腹泻停止,而服用普通蛋黄粉组却仍然腹泻并且有66.7%的死亡率;服用抗ETEC卵黄抗体粉的21日龄仔猪仅有短暂腹泻现象,存活率100%,试验期间总体质量有所增加,而对照组表现严重腹泻伴有脱水现象,试验期间有部分猪只死亡;临床应用表明,喂以3g和5g抗ETEC卵黄粉组的治愈率与抗生素治疗组相当。研究结果表明,卵黄抗体对早期断奶仔猪有一定的促进生长和防止腹泻的效果。     

鸡卵黄抗体对产肠毒素埃希氏大肠杆菌纤毛的亲和力

利用产毒素埃希氏大肠杆菌灭活苗或提纯Ｋ９９毛免疫鸡和奶捉后制备鸡卵黄抗体，奶牛血清抗体和乳清抗体，用ＥＬＩＳＡ竞争法测定鸡或牛体内产生的抗Ｋ９９纤毛抗体的亲和力，卵黄抗体能对免疫奶牛血清和乳清抗体产生强烈的竞争，抑制４０－８０％抗体的吸附，结果表明免疫鸡抗体与免疫奶牛抗体的亲和力有差异，因此，免疫鸡卵黄抗体，除了可预防某些传染病外，还可通过亲和层析法提纯某些生物活性物质（如纤毛抗原）的有效配体。     

产蛋鸡抗大肠杆菌F4菌毛的血清抗体和卵黄抗体消长规律的研究

从浙江省10多个规模化猪场采集仔猪断奶腹泻病料,分离致病性大肠杆菌。血清学和PCR方法鉴定菌毛型主要为F4和F18。挑取1株致病性和菌毛表达较强的F4阳性菌株,接种改良M inca培养基培养,热抽提法分离菌毛并纯化菌毛蛋白。将50只蛋鸡随机分5组,分别肌注1 mL免疫原/只:A组菌毛蛋白(250μg/只),B、C和D组菌毛蛋白(250,50,10μg/只) 弗氏佐剂,E组为空白对照。21 d加强免疫。定期采血分离血清,水稀释法和饱和硫酸铵盐析法分离卵黄抗体。ELISA法检测血清和卵黄抗体效价。结果表明,F4菌毛蛋白具有良好的免疫原性:在弗氏佐剂的辅助下,二免后21 d抗体效价达最高峰,血清和卵黄抗体效价分别为4.7 lg和4.4 lg,二免后56 d血清和卵黄抗体效价仍维持在4.0 lg;另外二免后21 d,10μg/只免疫剂量与50μg/只及250μg/只相比,诱导产生的卵黄抗体效价之间差异不显著(P>0.05)。     

鸡抗大肠杆菌血清抗体和卵黄抗体变化规律研究

用猪源大肠杆菌四价(K88、K99、987P、F41)灭活疫苗免疫蛋鸡,微量凝集法定期检测蛋鸡血清抗体和卵黄抗体的效价。结果表明,血清抗体比卵黄抗体出现早,免疫蛋鸡血清中和卵黄中4种抗体的消长规律基本相似,但不同抗体水平之间存在明显的差异,整个试验期间血清抗体水平均比卵黄抗体水平高。     

鸡抗猪大肠什菌卵黄抗体的研制

将引起仔猪严重发闰贩产肠毒素性大肠杆菌Ｋ８８，Ｋ９９，９８７Ｐ三个菌株，制成大肠杆菌三价菌苗，免疫接种健康产蛋鸡，制成鸡抗猪大肠杆菌高免卵黄液，并用以对仔猪大肠杆菌病进行预防和治疗，取得了理想的效果。     

抗猪大肠杆菌卵黄抗体变化规律及在体外对大肠杆菌生长的影响

试验研究抗猪大肠杆菌卵黄抗体变化规律及在体外对大肠杆菌生长和对肠黏膜细胞上粘附的影响。试验选用 30周龄海兰褐壳蛋鸡 2 4 0只 ,试验时间 80d。以K88、K99和 987P 3种大肠杆菌混合液为免疫原 ,免疫原中K88、K99和 987P的细菌数分别为 2 .5× 10 9、2 .5× 10 9、2 .5× 10 10 CFU/mL。免疫剂量为 0 .5、1.0、1.5、2 .0mL/只 ,在试验鸡胸腹部肌肉、分多点注射 (每点约 0 .2mL) ,每个免疫剂量免疫健康蛋鸡 5 0只 ,4 0只蛋鸡作对照 ,以个体为单位 ,每天收集鸡蛋 ,4℃保存。在每次免疫 5d后 ,翅静脉采血、分离血清 ,- 2 0℃保存。用盐析法和冷冻干燥法制备抗猪大肠杆菌卵黄抗体粉 ,配制不同蛋白含量的卵黄抗体溶液 ,用体外法研究卵黄抗体对大肠杆菌生长及对肠黏膜细胞粘附的影响。试验结果表明 :最佳免疫剂量为 1.0mL/只 ,卵黄与血清中的抗体水平没有差异 ;在大肠杆菌培养液中 ,添加蛋白含量为 0 .5mg/mL抗猪大肠杆菌卵黄抗体溶液时 ,大肠杆菌的生长受到抑制 (P <0 .0 5 ) ,不同卵黄抗体间没有交叉反应 ;蛋白含量为 0 .2 5mg/mL的抗猪大肠杆菌卵黄抗体溶液对大肠杆菌在肠黏膜细胞上的粘附有抑制作用 (P <0 .0 5 )。     

鸡抗猪产肠毒素性大肠杆菌卵黄抗体的应用

产肠毒素性大肠杆菌与仔猪腹泻的致病过程密切相关。卵黄抗体具有价格便宜、制作简单等优点,能降低腹泻的发生率和严重程度,是防治仔猪大肠杆菌性腹泻的一种新方法。本文就国内外鸡抗猪产肠毒素性大肠杆菌卵黄抗体的应用作了简要介绍。     

鸡抗大肠杆菌O126卵黄抗体理化特性的研究

自1893年Patterson发现亲代鸡通过鸡卵向幼雏转移抗体以后，科学家们对各种抗原引起的产蛋鸡产生的特异性抗体在卵黄中的蓄积状况进行了许多研究，发现从卵黄中可以获得大量特异性的多克隆抗体。早期对卵黄抗体(Egg yolk Immunogloblin，IgY)的研究主要用于确定鸡对某些疾病的免疫力。目前，卵黄抗体的应用已经扩展到人类的某些疾病防治中。本研     

抗大肠杆菌K88卵黄粉对断奶仔猪生长和腹泻的影响

采用单因子随机化设计,将60头健康断奶仔猪按体重和性别一致的原则分成3个组,每组4个重复,每个重复5头猪。各组仔猪分别采食3种试验日粮(基础日粮;基础日粮+卵黄粉0.1%;基础日粮+卵黄粉0.3%)。结果表明,添加含抗大肠杆菌K88的卵黄粉可显著提高断奶仔猪的生产性能,其中断奶后前2周的平均日增重分别比对照组提高了11.34%和1.03%,饲料报酬分别改善4.65%和7.44%。添加卵黄粉也显著降低断奶仔猪采食量,添加0.1%卵黄粉增加仔猪采食量6.35%,0.3%的卵黄粉则使采食量降低6.35%。结果还显示,使用含抗大肠杆菌抗体K88的卵黄粉添加剂显著降低了腹泻率,改善断奶仔猪健康状况。     

产肠毒素大肠杆菌K88ab/K88ad菌毛操纵子fae全基因的克隆、表达及生物学活性的初步研究

为研究K88ab/K88ad菌毛对细胞的黏附作用,本研究分别以产肠毒素E.coli (ETEC) K88ab C83901株和K88ad C83903株基因组DNA为模板,采用PCR技术扩增这两种K88菌毛操纵子fae基因(均约7.9 kb).将其分别克隆于表达质粒pBR322中构建pBR-K88ab和pBR-K88ad重组质粒,并将其分别转化至不含任何菌毛的E.coli SE5000株中.该重组菌能够分别与鼠抗K88菌毛阳性血清和抗K88菌毛单克隆抗体(MAb)产生凝集反应;在电镜下观察到重组菌表面大量表达K88菌毛.采用热抽提法提取其体外表达的K88ab和K88ad菌毛,SDS-PAGE电泳检测结果显示,菌毛蛋白的分子量约为26 ku.玻板凝集试验和western blot结果表明:重组表达的K88ab及K88ad菌毛与K88+参考株菌毛均能够被抗K88菌毛阳性血清和MAb识别.以猪小肠上皮细胞系IPEC-J2为模型进行黏附和黏附抑制试验,结果表明表达K88菌毛的重组菌及K88+参考株均能够黏附于IPEC-J2上皮细胞表面;而且阳性血清和MAb能够有效抑制重组菌或K88+参考株对猪小肠上皮细胞系的黏附结合.     

外援特异性卵黄抗体在防治仔猪大肠杆菌病中的应用

近年来由于对食品安全高度关注,对动物性食品中各种违禁药物的监测越来越严格,对于开发与使用安全、无残留、对环境无污染的新型饲料添加剂就显得尤为重要。本文就此着重介绍一种使用安全,无药物毒副作用,抗菌作用优良,对防治仔猪大肠杆菌效果显著的新型"绿色"饲料用添加剂-卵黄抗体。在实际生产中,卵黄抗体来源广泛-可从利用特定抗原多次免疫产蛋母鸡,使机体产生相应的特异性抗体,并转移、贮存在卵黄中,经提取纯化而获得;提高仔猪免疫力;降低仔猪腹泻率;降低初生仔猪死亡率均有较好的效果。随着人们对卵黄抗体认识和研究的不断深入,生产成本的降低以及标准化生产措施的施行,卵黄抗体必将有广阔的应用前景。     

重组大肠杆菌K88ab和K99蛋白制备的鸡卵黄抗体的效力评价

为探索以重组大肠杆菌K88ab和K99蛋白为免疫原制备鸡卵黄抗体的可行性,本研究利用基因工程技术,在大肠杆菌中高效表达重组K88ab和K99蛋白。分别以重组蛋白和提取的天然菌毛为免疫原制备抗K88ab和K99菌毛的鸡卵黄抗体,并对抗体效价、特异性以及抗体的预防和治疗效果进行了检测和比较。试管凝集反应结果显示,以重组蛋白为免疫原制备的鸡卵黄抗体效价最高可达1∶2 560,与用天然菌毛为免疫原制备的鸡卵黄抗体的效价基本一致。该抗体分别与K88ab+和K99+大肠杆菌发生特异性凝集,并能分别有效抑制K88ab+和K99+大肠杆菌对新生仔猪肠上皮细胞的吸附。临床应用结果显示,本实验制备的卵黄抗体对仔猪黄痢和仔猪白痢的预防有效率为100%,保护率为91%;治疗有效率为100%,治愈率为87%。实验结果表明该卵黄抗体对仔猪黄痢和仔猪白痢具有良好的预防和治疗效果。     

鸡抗猪大肠杆菌卵黄抗体的变化规律研究

蛋鸡受抗原刺激后会在体内产生特异性免疫球蛋白并被转移和贮存在卵黄中,这种免疫球蛋白被称为卵黄抗体(Yolk Immunoglobulin,IgY)[1].自从1893年Klemperer发现卵黄中富含抗体以来,卵黄抗体就一直被认为是一种很有前途的免疫球蛋白,人们将其应用于预防仔猪大肠杆菌病收到了满意的效果.试验的目的在于研究鸡抗猪大肠杆菌卵黄抗体的变化规律,以便能更好地指导以后的生产实践.     

ETEC K88菌毛蛋白抗体PPA-ELISA检测方法的建立

以纯化的大肠埃希菌K88菌毛蛋白为包被抗原,建立了检测大肠埃希菌K88IgG抗体的间接ELISA方法。确定了间接ELISA的最适反应条件,即最佳抗原包被浓度为1μg/mL,兔抗体稀释倍数为1∶10,猪抗体稀释倍数为1∶100,确定最佳封闭液为50g/L脱脂奶粉,最佳封闭时间为0.5h,血清反应时间0.5h,二抗反应时间1h,底物室温反应时间为15min,阴阳性临界值兔血清为0.33、猪血清为0.45。证实该间接PPA-ELISA方法特异性强、重复性好、敏感度高,可以作为疫苗效力检验和流行病学调查的参考方法。     

大肠杆菌多价卵黄抗体的研制及其体外抑制作用

由肠毒素性大肠杆菌（Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC）引起的新生仔猪腹泻是一种常见病,传染快且致死率高。20世纪90年代以来人们应用卵黄抗体防治仔猪大肠杆菌病取得满意效果。本试验的目的是试图研制出高效价的多价卵黄抗体,并观察和分析该卵黄抗体在体外试验中,能否有效地抑制相应ETEC对仔猪小肠上皮细胞的粘附。     

特异性IgY抗仔猪断奶腹泻机理的研究概况

针对仔猪断奶腹泻（Post—weaning Escherichia coli diarrhea，PWECD）这一仔猪断奶后的常见病和多发病的病原特异性，阐述了利用K88和F18等特异性菌毛作为抗原免疫产蛋母鸡制备的抗PWECD特异性卵黄抗体对大肠埃希氏菌引起的断奶仔猪腹泻的作用机理。认为，特异性IgY用于防治PWECD，具有安全、高效、成本低、产率高、稳定性好，无药物残留，不会产生耐药性，符合现代动物管理理念等诸多优点，是一种能有效防治PWECD的绿色生物制剂，应用前景广阔。     

鸡抗猪大肠杆菌血清抗体和卵黄抗体消长规律及其相互关系的探讨

用猪源大肠杆菌单价(K88)与三价(K88、K99、987P)灭活疫苗分别免疫产蛋母鸡,定期检测母鸡血清和卵黄的抗体效价。结果表明,两种疫苗免疫母鸡的卵黄抗体和血清抗体的消长规律基本一致,但前者比后者上升和下降期有所滞后;血清抗体水平比卵黄抗体水平平均约高21 8以上,两者间的差异极显著(P<0 01)。     

大肠杆菌表达的融合蛋白K88ac-STⅡ的免疫效果

产肠毒素大肠杆菌（enterotoxigenic escherichiacoli，ETEC）是引起幼畜腹泻的病原菌，感染病畜发病快，死亡率高。研究表明，病原菌ETEC的致病过程包括菌毛粘附因子对小肠上皮细胞的粘附和致腹泻毒素的产生，其中，菌毛粘附是其致病的始动因素，毒素是其致病的直接原因。所以，研制针对菌毛和毒素的多价疫苗理论上可以有效地预防幼畜腹泻。据调查，     

鸡卵黄抗体防治仔猪大肠杆菌性腹泻的研究概况

仔猪大肠杆菌性腹泻主要是由产肠毒素性大肠杆菌(EnterotoxigenicEscherichiacoil,ETEC)引起的仔猪的一种常见病,严重影响养猪业的发展。目前对该病的防治除加强综合性预防措施以外,生产上多采用ETEC的多价疫苗和基因工程苗免疫母猪,通过提高初乳中的抗体水平,来预防哺乳仔猪产肠毒素大肠杆菌性腹泻。然而母乳中的抗体保护作用是有限的和暂时的,在断奶后短期内将消失。应用高免血清治疗该病也是一种极为有效的方法,但血清价格昂贵,且易导致过敏反应。因此应用抗ETEC卵黄抗体治疗和预防新生和断奶仔猪腹泻的研究在国内外一直倍受瞩目。…