水稻RNA原位杂交体系的优化

为了能准确、快捷地追踪目标基因在水稻中的表达,并提供在不同植物中基因表达的研究基础,优化了水稻RNA原位杂交体系。以卡诺固定液处理材料,原位杂交结果显示:细胞边界清楚,标本背景清晰,检测信号强。设置了0、15、25、35和45 min 5个消化时间梯度,消化时间是25 min的试验结果显示:杂交信号分布于整个受检表面,信号可检测性强,并在不同组织结构中信号强弱不同。以根尖为材料,杂交液A的检测信号符合分布规律,杂交液B验证反义探针检测信号较弱,杂交液C验证反义探针检测信号进一步减弱,并伴随着验证正义探针信号增强。以叶片为试验材料,杂交液A和B的原位杂交结果差异不大,而杂交液C验证反义探针信号减弱,验证正义探针信号增强。结论:水稻RNA原位杂交体系的固定液为卡诺固定液,最佳消化时间为25 min,杂交液为杂交液A。     

荧光原位杂交在作物遗传育种研究中的应用

荧光原位杂交是一种原位杂交新技术，具有快速，灵敏，准确和有效等特点，它采用生物示记探针，能够将特定的ＤＮＡ或ＲＮＡ序列直接定位于染色体上，该文就荧光原位杂交技术在作物遗传育种研究中的应用进行综述，主要包括以下方面：１）检测重复ＤＮＡ序列及多拷贝基因家族；２）鉴定异源多倍体物种中的异源染色体或染色体片段；（３）检测和定位低拷贝或单拷贝ＤＮＡ序列。随着一些新技术的发展，ＦＩＳＨ技术将会在作物育种的更多     

高质量花生根尖细胞染色体制片方法研究

为了能快速获得用于染色体分带或者荧光原位杂交的高质量花生根尖细胞染色体制片,通过选择适当粗细的花生侧根,经过对二氯苯浸泡预处理,卡诺氏固定液固定后,直接用45%醋酸烘烤压片,得到了细胞平整、染色体分散的根尖细胞染色体制片。与HCl解离压片的方法相比,该方法中试剂对染色体影响微小。与酶解去壁低渗法相比,该方法没有酶解去壁低渗的过程,不需要用果胶酶和纤维素酶等较贵重试剂,节约了时间和成本,提高了制片效率。该方法不仅适用于花生,也适用于芝麻、水稻、玉米、大豆、青豆、番茄等多种植物。     

水稻OsRbohB基因原位杂交载体的构建 及其在花药中的表达分析

为研究水稻呼吸爆发氧化酶基因OsRbohB在花药中特定的表达模式,构建了原位杂交探针载体Pbsk-OsRbohB,通过体外转录获得DIG标记的原位杂交探针,以不同发育时期的水稻花药为材料进行原位杂交试验.结果发现,OsRbohB基因主要在水稻花药发育第8～10期的绒毡层和小孢子中表达,在第9期达到高峰,第10期开始下降.推测OsRbohB主要参与水稻花药早期的发育,该研究为进一步研究OsRbohB基因在水稻活性氧产生中的作用提供参考.     

适于荧光原位杂交的大薯叶片染色体制片技术

为克服利用根尖制备染色体标本的局限性,拟通过优化酶解去壁低渗法中的材料幼嫩程度、预处理方法以及酶解时间,建立大薯嫩叶染色体制备技术体系。结果表明:取刚展开的大薯嫩叶,用0.002 mol·L?1 8?羟基喹啉于4 ℃下预处理2 h,用3.5%纤维素酶和1.75%的果胶酶混合溶液于37 ℃下解离1 h,能获得较好的大薯染色体制片。最后,以大薯45S rDNA 序列为探针,对有丝分裂间期和中期细胞进行荧光原位杂交检测,杂交信号清晰稳定。本研究建立的适于荧光原位杂交的大薯嫩叶染色体制备技术可为分子细胞遗传学研究提供一种简便实用的细胞学方法。     

家蚕基因组文库的构建

家蚕（Ｂｏｍｂｙｘｍｏｒｉ）单倍体（ｎ＝２８）的碱基数为４．８×１０￣５ｋｂ。从５龄第３天的家蚕后部丝腺中提取总ＤＮＡ，用ＭｂｏⅠ部分酶解所得的ＤＮＡ片段克隆在载体入Ｃｈａｒｏｎ４０上。重组分子经体外包装形成活的噬菌体颗粒，得到的重组噬菌体数为２．５５×１０￣５ｐｆｕ，达到了建库的要求。用ＤＩＧ标记的探针进行原位杂交鉴定以及小样提取ＤＮＡ酶切检测插入片段，均显示了该基因文库的真实性。     

黄花菜染色体制片及荧光原位杂交技术体系的建立

[目的]黄花菜(Hemerocallis citrina Barni)是我国特有的经济型蔬菜,目前急需加速分子育种进程,开发遗传学平台。本文旨在优化黄花菜染色体制片技术,构建黄花菜荧光原位杂交体系,为遗传图谱与物理图谱的整合提供技术基础。[方法]以大同黄花菜(H.cv.‘DatongHuanghua’)为研究材料,分别对中期根尖细胞和粗线期花粉母细胞的制片方法进行优化,同时以拟南芥45S rDNA和5S rDNA序列为探针,筛选和优化黄花菜荧光原位杂交体系技术参数。[结果]中期染色体制片最佳体系:2.9μg·mL~(-1)浓度的八羟基喹啉溶液处理4 h,混合酶液(纤维素酶∶果胶酶=2∶1)37℃酶解160 min;粗线期染色体制片最佳体系:采集4～5 mm龄段花蕾,卡诺固定液4℃固定24 h后,混合酶液(纤维素酶∶果胶酶=2∶1)37℃酶解220 min,使用改良火焰干燥法,均可得到理想制片。采用直接标记法对45S rDNA和5S rDNA探针序列进行荧光标记,结果显示杂交信号清晰稳定,背景干扰小。[结论]本研究构建并优化了黄花菜染色体制片技术及荧光原位杂交体系,可为黄花菜细胞遗传学研究和基因组研究的深入开展提供技术基础。     

荧光原位杂交技术及其研究现状

从荧光原位杂交探针的类型、探针的标记方法、探针和染色体的杂交、染色体显带、荧光显微镜检测等方面介绍了荧光原位杂交技术,并对荧光原位杂交技术目前的发展状况进行了阐述.     

小麦—簇毛麦杂种染色体的DNA原位杂交研究

以生物素标记的族毛麦基因组ＤＮＡ作探针与小麦－簇毛麦杂种双二倍及异附加系染色体进行原位杂交，旨在探索一种鉴定小麦中簇毛麦染色质的分子细胞遗传学方法。首先试验了标记的簇毛麦ＤＮＡ与小麦ＤＮＡ之含量比对原位杂交效果的影响，发现探针混合液中不加未标记的小麦ＤＮＡ时，获得的原位杂交结果较理想。在八倍体小麦－簇毛麦双二倍体（２ｎ＝５６）中，１４对簇毛麦染色体出现明显的棕褐色原位杂交信号，而小麦染色体不显标记     

用斑点杂交及原位杂交技术检测鸡白细胞介素1β产生细胞

根据已报道的６种哺乳动物白细胞介素１β（ＩＬ－１β）的ｃＤＮＡ序列保守区设计合成一段互补ＤＮＡ。制备ＡＴＰ标记的ＤＮＡ探针,采用斑点杂交及原位杂交技术对感染了禽脑脊髓炎病毒（ＡＥＶ）的鸡脑组织中ＩＬ－１βｍＲＮＡ进行检测,结果表明杂交反应均呈阳性。     

浸种处理防治稻瘟病的药剂筛选

<正> 水稻种子带菌是秧田发病的一个重要侵染来源。稻种处理过去主要采用广谱性的西力生或赛力散等有机汞制剂。七十年代开始,发现有机汞制剂对人、畜会积累中毒,国内外均禁止使用,并研制代替汞制剂的种子消毒剂。近年,我国推广抗菌剂401或402浸种。根据我们的试验,早稻用抗菌剂401或402浸种48～72小时有较好的消毒效果,但     

活性炭在水稻花药培养中的作用

对活性炭在水稻花药培养多级成苗植株的生根壮苗中以及对一次成苗诱导率、分化率和绿苗率的效应进行了初步研究。结果表明,０．１％活性炭对一次成苗的诱导率、分化率和绿苗率具有抑制作用,６种基因型的平均诱导出愈率、分化率和绿苗率分别只有４．４９％、１４．１５％、和０．８１％,而没有添加活性炭的可达１０．７２％、２５．１９％和３．２０％。但活性炭对水稻花培多级成苗植株的生根壮苗有明显的促进作用,可使花培苗的苗高、根长、根数和鲜重比对照分别增加２３．１％、４６．７％、９３．９％和２９．３％．本文还简要讨论了活性炭的作用机理,认为活性炭在水稻花粉植株的生根壮苗培养中可以改进培养基与外植体之间的代谢平衡,从而促进花粉植株的生长发育。     

活性炭在不同水稻组合花药培养中的作用

对活性炭在不同水稻组合花药培养中的效应进行了研究。结果表明,除组合V20B/02428外,活性炭能显著增加水稻组合的苗高、根长、根数和鲜重,有利于花培苗的生长与分化。     

水稻T-DNA插入启动子捕获系的初步筛选

利用农杆菌介导法将含报道基因β-glucuronidase(GUS)无启动子的转化载体pCAMBIA1300GUSAHyg导入籼稻明恢86获得水稻启动子捕获系.水稻启动子捕获系潮酶素抗感分离比χ2分析表明:39个水稻启动子捕获系中有28个为单T-DNA位点插入.2 653个水稻启动子捕获系报告基因GUS表达检测结果表明...     

花药离体培养研究进展

花药培养在植物离体培养中占有重要地位。自1964年首次利用曼陀罗的花药培养得到绿色植株后,先后在烟草、水稻、小麦、大麦和玉米等作物上取得成功,园艺作物大白菜、小白菜、甘蓝型油菜、芜菁、结球甘蓝、石刁柏、枣、草莓等的花培也取得成功,尤其在水稻和小麦上的进展更是突飞猛进。通过花药培养可以得到单倍体植株,在杂交育种、抗性育种与诱变育种具有重要意义,并能克服远缘杂交育种中的不育性和分离性。     

提高同源四倍体粳稻花培效率的不同因素分析（英文）

通常水稻花药培养以二倍体作为材料,因此研究四倍体水稻的花培效率很有研究及应用的意义。本实验以四倍体原种零轮、02428及其二倍体做 为材料,共设计3组22种培养基配方,分别研究碳源浓度、琼脂浓度、基本培养基类型和激素对诱导率的影响。结果显示6％的蔗糖和0.75％的琼 脂浓度的组合对于四倍体水稻的诱导效率最佳;以蔗糖为碳源的N6和NB培养基更适合四倍体水稻花药培养;激素浓度为0.5 mg/L的情况下,四倍 体材料的诱导效果是二倍体材料的2倍,激动素对于零轮的效果较好,而6－苄基腺嘌呤对于02428的效果较好。总体来说在相同的培养基条件下, 二倍体和四倍体的诱导率存在明显的差异,但是同一培养基条件下不同品种之间的诱导率没有统一模式,说明基因型是花药培养中的一个关键影 响因素。 因此对于特定材料花培诱导率的提高需要考虑多种因素的影响。     

液体培养基在水稻花药培养中的应用研究

采用两种培养方式(液体培养基诱导法、固体培养基诱导法)对水稻花药进行培养,结果表明,液体培养基诱导法与固体培养基诱导法培养时间相当,但液体培养基诱导法的出愈率及绿苗分化率均提高10%左右,由此认为,液体培养基诱导法是提高水稻花药培养效率的可行方法。     

戊聚糖酶处理混合糠对其营养价值的影响

采用自行研制的戊聚糖酶制剂处理混合糠１５ｋｇ，采用气相色谱法分析其酶处理效果，并用２头回直肠吻合术生长猪和８只５６日龄长沙黄肉仔鸡进行消化代谢试验。结果表明：混合糠经酶制剂处理后，戊聚糖降解率平均达５０％左右，且ＮＤＦ下降了１．１９％，ＡＤＦ和ＡＤＬ分别提高了２．７７％和０．６０％。生长猪消化试验结果表明，酶处理混合糠后，其ＤＭＤ、ＮＤＦＤ、ＡＤＦＤ分别提高了４．３６％、２．１４％、１３．３３％（Ｐ＜０．０１）和６．０９％（Ｐ＜０．０５）。肉鸡代谢试验结果表明，酶处理混合糠后，其ＤＭＤ、ＮＤＦＤ、ＡＤＦＤ和ＡＤＬＤ分别提高了１．１６％、３．１７％、２１．１４％（Ｐ＜０．０１）和７．２９％（Ｐ＜０．０５）；但可消化能（猪）和表现代谢能（鸡）却分别下降了０．４２ＭＪ／ｋｇ和０．８４ＭＪ／ｋ