酶联免疫吸附法测定猪肉中的盐酸克伦特罗

本文介绍了酶联免疫吸附法测定猪肉中的盐酸克伦特罗的方法.利用盐酸克伦特罗试剂盒对猪肉组织中残留的盐酸克伦特罗用酶标仪进行测定分析.该法操作简便快速,是保证肉品卫生安全较好的检测方法.     

液质联用测定饲料中的β-兴奋剂

对饲料中盐酸克伦特罗和莱克多巴胺的液质联用检测方法进行了研究。采用0.5%钨酸∶甲醇（80∶20）提取试样中的盐酸克伦特罗和莱克多巴胺,用Oasis MCX小柱净化,4 mmol/L乙酸胺溶液∶乙腈（80∶20）为流动相,用PDA检测器分离测定。盐酸克伦特罗和莱克多巴胺的检测限分别为1.05μg/kg和1.37μg/kg,平均回收率为89.7%和84.4%。该方法操作简单、结果准确,可用于测定饲料中盐酸克伦特罗和莱克多巴胺的含量。     

盐酸克伦特罗在动物血浆与组织间残留量的相关性分析及其在体内的残留分布规律研究

采用高效液相色谱分析法,对饲喂含有不同浓度盐酸克伦特罗饲料(4、8、12 mg/kg)的猪体组织(肝脏、肾脏、肌肉)和血浆中盐酸克伦特罗含量进行检测,分析盐酸克伦特罗在猪体内的残留分布,探讨盐酸克伦特罗在血浆中的含量与猪体内组织的残留含量的相关性.研究结果表明:饲料中盐酸克伦特罗添加量与组织和血浆中残留量均呈线性相关关系;同一浓度的盐酸克伦特罗添加量,在猪组织和血浆中的残留量分布:肝脏＞肾脏＞肝脏＞血浆;建立的血浆与组织间残留量的回归方程具有较高的可靠性.     

快速检测尿液中盐酸克伦特罗残留技术评价

为明确盐酸克伦特罗残留快速检测技术的准确性和可靠性,采用色谱定量验证方法,对目前常用的试剂盒和金标卡检测尿液中盐酸克伦特罗残留技术进行了评价。结果表明,试剂盒检测灵敏度较好,最低为0.29 μg·L-1,最高值1.04 μg·L-1,能达到仪器检测限要求,满足目前国家的判定限。但试剂盒的检测变异系数较大,结果的稳定性有待改进。试剂盒准确性较高,但含量在1 μg·L-1时,容易出现假阳性和假阴性问题,需要经质谱法作进一步确证,总体假阳性和假阴性问题不明显。金标卡检测限相对较高,在尿液中盐酸克伦特罗含量>3 μg·L-1时,准确度较好,但无法满足国家控制限要求,需要进一步改进技术,提高检测限。     

酶联免疫吸附法测定家禽配合饲料中氯霉素含量结果探析

为验证酶联免疫吸附法(ELISA)对家禽配合饲料中氯霉素(CAP)含量检测的实用性,根据氯霉素残留酶联免疫检测试剂盒操作说明对样本进行前处理,以0.1μg/kg、0.3μg/kg、0.5μg/kg浓度的氯霉素标准溶液进行空白添加回收实验,结果回收率在70%～120%以内,变异系数在5%以下。实验结果表明所使用的ELISA试剂盒能够满足检测饲料中氯霉素残留的需要,适合用于基层工作中大规模筛查氯霉素残留量。     

克伦特罗残留检测试剂盒条件的优化及其应用

以CL-OVA为包被抗原,抗克伦特罗单克隆抗体为一抗,组建检测克伦特罗的竞争EL ISA试剂盒。以方阵滴定确定包被抗原最佳浓度(0.72μg.孔-1),抗克伦特罗单克隆抗体(2F12)最佳稀释度(1∶2 000),并建立EL ISA标准曲线,确定最小检测量为0.25 ng.mL-1。用该方法检测动物模型仔猪尿样中的盐酸克伦特罗,结果表明:停药后第1~7天尿样均为阳性,2周后有少量猪仍为阳性,而阴性对照猪尿样均为阴性。这表明建立的试剂盒对克伦特罗残留的检测具有广阔的应用前景。     

动物性食品中4种药物残留的检测

为了解北京地区动物性食品中兽药残留情况,随机抽查北京京郊几家猪场、鸡场和商场,检测4种药物(盐酸克伦特罗、氯霉素、磺胺类、氯羟吡啶)的残留情况。盐酸克伦特罗检测采用酶联免疫法(ELISA),取206份猪肝、240份猪尿测定盐酸克伦特罗残留,阳性数分别为19、23,阳性率分别为9.22％、9.58％;氯霉素检测采用酶联免疫法,取150份鸡肝测定氯霉素残留,阳性数为15,阳性率为10.00％。磺胺类药物和氨羟吡啶检测采用高效液相色谱法(HPLC),取50份猪肝、50份鸡肝测定磺胺类药物残留,结果全为阴性;取100份鸡肝测定氯羟吡啶残留,结果全为阴性。检测结果不容乐观。     

免疫芯片法追溯检测克伦特罗用药史研究

以雄性皖浙花猪毛发、尿液为检测材料,以免疫芯片为检测手段,考察克伦特罗残留规律。结果表明,免疫芯片法检测动物毛发样品的检测限和定量限分别为0.15、0.50 ng/g,回归方程为:y=-0.391x3+12.576x2-141.88x+867.84,r2=0.999 4,线性范围为0.5~16.0 ng/g,回收率为65.2%~81.4%,休药期42 d仍能检测出毛发中克伦特罗残留。免疫芯片法检测动物尿液样品的检测限和定量限分别为0.20、0.60 ng/m L,回归方程为:y=-0.107 1x3+6.179 5x2-110.33x+839.37,r2=0.992 3,线性范围为0.6~16.0 ng/m L,回收率为61.5%~72.2%,休药期7 d基本不能检测出克伦特罗残留。免疫芯片法检测动物毛发克伦特罗残留快速、简单、准确,适合规模化检测,可用于克伦特罗用药史追溯性检测。     

ELISA检测盐酸克伦特罗残留时的问题及控制对策

酶联免疫吸附试验(ELISA)是一项筛查兽药盐酸克伦特罗残留的新技术。系统介绍了盐酸克伦特罗残留的检测原理、试验操作时容易出现的失误,针对性地提出了规范操作、适时孵育、准确读板等8项控制对策。     

GC-MS法测定猪肝、猪尿中盐酸克伦特罗残留量的研究

采用乙酸乙酯提取、利用盐酸克伦特罗易溶于酸性溶液的特点进行液液分配、固相萃取相结合的方法提取组织中残留的盐酸克伦特罗,用双三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)衍生化,毛细管气相色谱/质谱联用(选择离子检测模式,检测离子M/Z为862、122、622、77)对衍生化物进行检测分析。结果显示,不同添加浓度的盐酸克伦特罗在猪肝中的平均回收率在85%~95%,批内变异系数在4.8%~8.2%,实际检出限:猪肝为0.30μg/kg,猪尿为0.25μg/L。     

动物组织中β-兴奋剂类药物多残留酶联免疫检测方法的建立

应用直接竞争酶联免疫吸附技术,建立了一种快速检测动物组织中β-兴奋剂类药物多残留的方法,并对其技术性能进行了评价。结果表明,该方法的IC50浮动范围为0.4～0.7μg/L,对组织样本的检测限为0.5μg/kg;样本添加回收率为72.9%～103.5%,变异系数为5.8%～14.1%;可用于检测克仑特罗、沙丁胺醇、塞布特罗、妥布特罗、克仑潘特、溴布特罗、溴氯布特罗、马喷特罗。     

盐酸克伦特罗的检测方法研究进展

近年来,食品安全问题受到越来越多的社会关注.盐酸克伦特罗（CL）最初作为临床上支气管扩张剂用于治疗哮喘、支气管炎等.CL属于β-肾上腺素类兴奋剂,在动物饲料中加入CL可以明显提高动物的瘦肉率,因此不少商家大量使用它来提高肉畜的品质.然而,残留在动物体内的CL会使食用的人出现不同程度的中毒情况,严重时可导致食用者死亡.目前国内外检测CL残留含量的常用方法有气相色谱-质谱联用法（GC-MS）、高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GS）、酶联免疫吸附测定法（ELISA）、毛细管电泳法（CE）、胶体金免疫测定法（CGIA）等.综述了近年来国内外几种检测CL残留含量的方法.     

Effects of 105 traditional Chinese medicines on the detection of β-agonists in medicine extracts and swine urine based on colloidal gold immunochromatographic assay

Colloidal gold immunochromatographic assay(CGIA) is commonly used for the on-site detection of β-agonists that are sometimes used illegally as feed additives in swine diets. However, few studies have evaluated the causes of false-positive results that sometimes occur when applying CGIA in agricultural settings. In this study, we investigated if this false-positive phenomenon is related to the addition of certain traditional Chinese medicines(TCMs) to swine feed. We established and verified an extraction method for TCMs, and then applied CGIA to detect β-agonists in the extracts of 105 TCMs and in the urine of swine dosed with TCMs, respectively. Liquid chromatography-tandem mass spectrometry was used to validate the results of the urine samples tested positive for β-agonists using CGIA. The results were also verified using TCMs and colloidal gold test strips produced by different manufacturers. The extracts of Citri Reticulatae Pericarpium Viride, Citri Reticulatae Pericarpium, Magnoliae Officinalis Cortex, Chaenomelis Fructus, and Rhodiolae Crenulatae Radix Et Rhizoma were tested positive for β-agonists. Meanwhile, the addition of Citri Reticulatae Pericarpium Viride and Citri Reticulatae Pericarpium to swine feed resulted in false-positive results for β-agonists in swine urine. The results provide a new way to explain false-positive CGIA results and provide valuable information for livestock feeding programs.     

克仑特罗在猪肝脏中残留检测的ELISA法研究

本研究旨在用ELISA试剂盒建立一种简便、可靠的猪肝脏中克仑特罗残留的检测方法。添加了适量克仑特罗标准工作液的肝脏样品同 5倍 0 .1mol/L的盐酸溶液匀浆 ,冻藏、解冻后离心。上清液用正已烷萃取脂溶性杂质 ,再用氢氧化钠溶液调节pH至 1 2。用异丁醇提取待测药物 ,将提取液在 6 0℃用氮气吹干。用 1mL试剂盒中的稀释液将残渣溶解后 ,用ELISA法在 4 50nm处检测克仑特罗的含量。该方法的线性范围为 0 .1 3～ 5.3ng/mL ,回归方程为y=- 1 .80 0x 2 .2 85,相关系数r=0 .997,最低检测限为 0 .1 3ng/mL ,最低可定量限为 0 .2 5ng/g,浓度为 0 .2 7、0 .53和 1 .0 6ng/g时的回收率分别为 6 8.9%、72 .7%和 77.4 % ,CV <2 0 %。本法的可靠定量限低于克仑特罗在动物肝脏中的最高残留限量 ,且回收率和变异系数均能满足残留检测的要求 ,是一种较简便、可靠的克仑特罗在猪肝脏中残留的快速检测方法     

克仑特罗CLEIA试剂盒与ELISA试剂盒的比较分析

用研发的克仑特罗化学发光酶联免疫（CLEIA）试剂盒与克仑特罗酶联免疫（ELISA）试剂盒进行检测效果比对,结果显示,CLEIA试剂盒检测时间为33 min,而ELISA试剂盒则需要50 min,CLEIA试剂盒方法要比ELISA试剂盒方法更节省时间;CLEIA试剂盒IC50为400 ng·L-1,对猪尿和猪肉的最低检测限分别为201 ng·L-1和907 ng·kg-1,而ELISA试剂盒IC50则为1252 ng·L-1,对猪尿和猪肉的最低检测限分别为235 ng·L-1和993 ng·kg-1,CLEIA试剂盒方法的灵敏度要高于ELISA试剂盒方法的灵敏度。综合分析得知：CLEIA法比ELISA法灵敏度更高、反应时间更短。     

固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法同时测定羊肉中3种β-兴奋剂

利用固相萃取-高效液相色谱-串联质谱技术,建立了羊肉中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇3种β-兴奋剂的测定方法。样品经乙酸铵缓冲溶液提取后,用MCX固相萃取柱净化,以甲酸-乙腈和甲酸-乙酸铵缓冲溶液为流动相,梯度洗脱,采用HPLC-MS/MS电喷雾正离子(ESI+)电离,多反应监测(MRM)模式检测,外标法定量。结果表明,3种β-兴奋剂在2-100 ng/mL范围内均具有良好的线性关系,相关系数不低于0.998 8,加标回收率为91.3%～103.8%,相对标准偏差为2.5%-5.7%。该方法准确、灵敏、高效、环保,适用于羊肉中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇3种β-兴奋剂的同时测定。     

Utilization of Chinese Herbal Feed Additives in Animal Production

The experimental knowledge on efficacy,possible modes of action and aspects of application of Chinese herbs as feed additives for animal production are reviewed in this article.Chinese herbs commonly contain protein,carbohydrate,fat,vitamins,and mineral which are necessary nutrients to the growth of animal.Polysaccharide,organic acid,alkaloids,and essential oils involved in Chinese herbs can improve the immune function of livestock.Currently,numerous studies have demonstrated anti-oxidative and anti-microbial efficacy and the assumption that Chinese herbs may improve the flavor of meat,which has been confirmed by some observations,but the mode of this action is still unclear.Moreover,several observations support the hypothesis that herbal feed additives may favorably affect gut functions (e.g.,enzyme activity,microbial eubiosis) in vitro.Such effects may explain a considerable number of practical studies with livestock reporting improved production performance after providing herbal feed additives.In summary,available evidence indicates that herbal feed additives may have the potential to add to the set of non-antibiotic growth promoters for use in livestock,such as organic acids and probiotics.However,a systematic approach toward the efficacy,mode of action and safety of herbal compounds used as feed additives for animal production seems to be required in the future.     

β-肾上腺素能激动剂对肥育猪生产性能的影响

本试验采用饲养试验及活体测定的方法，对20头杜长大三元杂交肥育猪（体重60千克左右）进行试验，试验组日粮中添加SPPM的肾上腺素能激动剂（Clenbuterol）。结果表明，在相同的营养水平和饲养管理条件下，试验组猪比对照组背膘厚降低14．8％，眼肌面积增加9．7％．日增重提高9．4％。     

克伦特罗和生长激素对猪的生长及胴体组成的影响

将 36头试验猪分成 4组 :β 肾上腺素能激动剂处理组即克伦特罗处理组 (1kg饲料添加克伦特罗 3mg ,连续 2 8d)、生长激素处理组 (按 1kg体重每日注射 0 1mg生长激素 ,连续 2 1d)、克伦特罗和生长激素混合处理组及空白对照。试验结束后 ,测定猪的胴体组成 ,结果表明 :克伦特罗处理组和生长激素处理组的日增重分别比对照组提高 17%和 19% ,而混合处理组的日增重则下降 38% ,饲料摄入量下降 39% ;克伦特罗处理组背最长肌面积增加 19% ,背膘厚下降 2 3% ,与之相比 ,生长激素能加强猪的基础合成代谢 ,因而胴体成分没有明显改变 ;克伦特罗和生长激素混合处理组的活重减轻 ,胴体和内脏的比例下降 ,胴体明显瘦于对照组 ,但最长肌面积相等。结果还表明 β 肾上腺素能激动剂和生长激素对猪的饲料摄入量和胴体组成有互作效应 ,有关机理还需进一步研究。     

酶联免疫法检测猪肝中β-兴奋剂残留的不确定度分析

[目的]分析酶联免疫法检测猪肝中β-兴奋剂的不确定度,探讨各因素对检测结果的影响。[方法]参考JJF1059-1999《测量不确定度评定与表示》和CNAS-GL06《化学分析中不确定度的评估指南》规定的基本方法和程序,分析了影响测量不确定度的来源,并对各不确定度分量进行了评估。[结果]当猪肝中β-兴奋剂含量为187.64 ng/kg时,其扩展不确定度为6.68 ng/kg(k=2)。[结论]影响检测结果不确定度的主要因素为回收率和标准曲线拟合,在实际测量过程中严格控制试验条件可提高酶联免疫检测的准确性和可靠性。