棉花总RNA的快速提取方法

介绍了一种适合于棉花各种组织的RNA提取方法。它具有简便、快速等特点，且所提取的RNA样品质量较高，可直接用于cDNA合成、RNA dut blot等分子生物学操作。     

用CTAB-PVP法提取棉花各组织总RNA的研究

针对棉花组织总RNA难以提取、不同组织的提取方法难以统一的问题，借鉴Jaakola等的越橘果实总RNA提取方法（即CTAB-PVP法），对棉花组织总RNA的提取效果进行了分析。实验结果表明：得到的棉花纤维、胚珠、叶片、胚根、花瓣、下胚轴和花药各组织的RNA完整性好，其D260／D280比值为1．7～2．0，产率30～180pg／g（鲜质量）；用开花后15d纤维的RNA为材料进行反转录，再利用RT-PCR和3’RACE技术进行克隆，各获得1个大小为542和712bp的cDNA克隆，经序列分析鉴定，这2个片段分别编码棉花微管结合蛋白和微丝结合蛋白。     

一种无需DEPC提取高质量棉花总RNA的方法

DEPC做为RNAnase抑制剂常用于RNA的提取,但其本身具有毒性,容易对操作者产生伤害并易造成环境污染。该实验以改良CTAB法为基础,提高β-巯基乙醇的浓度到10%,无需DEPC就能提取高质量的RNA。分别以不同陆地棉为材料提取了棉花的总RNA,测得OD260/OD280在1.7~2.1之间,且大部分样品都能清晰看到3条RNA条带,将此RNA反转录获得的cDNA为模板克隆到了棉花ATP合成酶β亚基基因,说明此方法提取的棉花总RNA既能满足分子生物学实验要求又大大地减少了毒害作用。     

一种棉花细胞质雄性不育系线粒体RNA的提取方法

[目的]获得高质量的棉花细胞质雄性不育系线粒体RNA。[方法]以哈克尼西棉细胞质雄性不育系黄化苗为研究对象,对棉花线粒体RNA的提取方法进行探讨。[结果]采取先分离出棉花线粒体再提取RNA的方法,最终获得了质量较好的线粒体RNA(mtRNA)。[结论]成功获得了质量较高的mtRNA。     

一种适于黄瓜不同组织总RNA提取的方法

在比较了Trizol试剂盒法、异硫氰酸胍法和改良CTAB法用于黄瓜总RNA的提取效果后,表明改良的热CTAB/酸酚法较其他两种方法能更有效地提取黄瓜总RNA,该方法能有效提取黄瓜不同器官,包括根、茎、叶、花、幼嫩果实的总RNA。该方法简单经济,能有效去除黄瓜植株不同部位的多糖和多酚类等次生物质,获得完整的总RNA。经紫外分光光度计分析,A260 nm/A280 nm比值在1.9~2.0之间,提取率在80~100μg/100mg左右。利用该法所提取的总RNA成功地对ACC合酶基因(CS-ACS1)片段进行了反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)。     

一种简单、有效的提取根瘤菌总RNA的方法

介绍了一种适合于根瘤菌及其它革兰氏阴性细菌的RNA提取方法。它具有简便、快速等特点,且所提取的RNA样品质量较高,可直接用于RT-PCR合成、Northern杂交等分子生物学操作。该方法具有实用性强、重复性好的特点。提取的RNA无DNA等污染物,并且其产量、纯度完全能满足分子克隆和基因表达研究的需要。该方法简单、快速、纯度高、完整性强,方便有效。     

一种简单有效的提取外周血白细胞总RNA的方法

[目的]介绍了一种提取动物外周血白细胞总RNA的方法。[方法]对从健康奶牛和患病奶牛中分离的外周血白细胞,采用RNAlater样品储存液进行保存。采用RNAultra总RNA提取试剂盒提取白细胞总RNA,检测其浓度和纯度,并通过RT-PCR进一步检测其质量。[结果]提取总RNA中28 S和18 SRNA条带清晰,比例适当,OD260/OD280为1.8～2.0。以提取的总RNA反转录合成的cDNA为模板,能扩增出预期长度的牛G3PDH基因序列,未见非特异性产物。采用该方法提取的总RNA质量好、纯度高,能满足cDNA文库构建、分子克隆和基因表达等研究的需要。[结论]该方法具有简单有效、实用性强和重复性好的特点,值得广泛应用。     

非洲菊不同组织总RNA提取

以非洲菊为材料,采用Trizol试剂法、改良的异硫氰酸胍法、CTAB法和尿素—氯化锂法,提取非洲菊的花、花蕾、叶、花梗和根的总RNA。所得RNA经1%琼脂糖凝胶电泳以及紫外分光光度计分析,结果表明Trizol法和改良的异硫氰酸胍法适用于花和根组织,尿素-氯化锂法对花蕾和叶组织RNA有较好的提取效果,而花梗组织RNA最好采用CTAB法。     

一种大量提取猕猴桃不同组织高质量总RNA的方法

在CTAB法的基础上,经过多方面改进,提取了"红阳"猕猴桃7种组织(果实、雄花、雌花、叶片、种子、皮、根)的总RNA。利用琼脂糖凝胶电泳和超微量核酸蛋白测定仪检测了该方法和试剂盒法提取的RNA的完整性、纯度和浓度。结果显示:采用这两种方法提取到的猕猴桃不同组织的总RNA,能检测到18S和28S两条清晰完整的条带,A_(260)/A_(280)值在1.8～2.0间,A_(260)/A_(230)值大于2.0。进一步的RT-PCR验证结果表明采用这两种方法提取到的RNA质量较高,均达到了分子生物学实验的要求。因此,本文改良的CTAB法适用于猕猴桃各组织高质量总RNA的大量提取。     

一种大量提取猕猴桃不同组织高质量总RNA的方法

在CTAB法的基础上,经过多方面改进,提取了"红阳"猕猴桃7种组织(果实、雄花、雌花、叶片、种子、皮、根)的总RNA。利用琼脂糖凝胶电泳和超微量核酸蛋白测定仪检测了该方法和试剂盒法提取的RNA的完整性、纯度和浓度。结果显示:采用这两种方法提取到的猕猴桃不同组织的总RNA,能检测到18S和28S两条清晰完整的条带,A₂₆₀/A₂₈₀值在1.8～2.0间,A₂₆₀/A₂₃₀值大于2.0。进一步的RT-PCR验证结果表明采用这两种方法提取到的RNA质量较高,均达到了分子生物学实验的要求。因此,本文改良的CTAB法适用于猕猴桃各组织高质量总RNA的大量提取。     

棉纤维总RNA提取方法的比较与分析

【目的】筛选适合棉纤维总RNA的提取方法,并对其进行改良,以满足转录组和表达谱测序要求。【方法】采用三种方法提取棉纤维总RNA,即改良的热硼酸法、Trizol法和离心柱试剂盒法。【结果】改良的热硼酸法提取的棉纤维总RNA质量最好,同时对该方法的改良更适合不同时期相同棉花品种和相同时期不同棉花品种棉纤维总RNA的提取。【结论】通过比较棉纤维总RNA的提取方法,发现改良的热硼酸法提取棉纤维总RNA质量最好,且对该方法的改良提取的总RNA更能够满足转录组和表达谱测序的要求。     

玉米总RNA的小量快速提取

以玉米幼苗的根、茎和叶为材料,采用改良尿素法,分别提取其总RNA。提取的总RNA,经凝胶电泳检测,28SrRNA和18SrRNA带型完整;经紫外分光光度计检测,A260／A280值接近2．0;将RNA反转录合成cDNA,可用于RT-PCR分析。本方法在提取过程中不使用液氮,且提取的玉米总RNA质量好、纯度高。     

胡杨、柽柳总RNA提取方法的建立

以胡杨和柽柳的叶片为材料，建立了一种从植物组织中快速分离总RNA的方法。该方法具有三个显著的特点：RNA提取周期短，应用改进的LiCl沉淀RNA方法，仅需l0min即可；方法简单易行，仅需要几种常用试剂，操作步骤简单；提取的RNA杂质少，得率高，并能在提取过程中较有效抑制RNA的褐化效应。RNA质量可以满足cDNA文库构建、DDRT—PCR等要求。     

大白菜总RNA快速有效的提取方法

采用改良的TE-3D法提取大白菜根、茎、叶的RNA,用phenol-TE-3D溶液裂解细胞,用体积比24∶1的氯仿/异戊醇溶液萃取RNA,6 mol.L-1氯化锂沉淀RNA。提取的RNA完整、无降解,成功地进行了反转录和PCR扩增试验。     

改良热酚法快速提取棉花不同组织RNA

[目的]以改良热酚法快速提取棉花不同组织的RNA。[方法]以陆地棉(Gossypium hirsutum L.)新陆早26为材料,在冷酚法的基础上对RNA的提取方法进行改进。[结果]利用改良热酚法获得的RNA不仅完整性极好、浓度高且无多糖多酚污染,可用于cDNA末端快速扩增(RACE)、Northern Bloting、基因芯片分析及转录组分析等研究。[结论]该方法不但适用于提取棉花叶片总RNA,而且在根、花冠、花药、发育的纤维中均能获得高质量的RNA,同时节约成本,操作简便,对环境污染小。     

适于cDNA-AFLP的黄瓜幼叶总RNA快速高效提取方法

为了快速高效地提取黄瓜幼叶总RNA,满足于cDNA-AFLP实验的要求。对Trizol试剂提取总RNA的方法进行了改进,所提RNA经琼脂糖电泳检测,其28S、18S、5S 3条带清晰,完整性好,每0.1g幼叶可获得RNA 100~150μg,产率高;经反转录、双链cDNA合成和cDNA-AFLP检测,证实提取的RNA能满足反转录和cDNA-AFLP对RNA质量和数量的要求。     

果树果实总RNA提取方法的改良研究

植物总RNA的提取尽管已成为一种常规的技术,但由于果树果实材料的特殊性,其RNA的提取至今没有一种比较理想的技术和方法。本研究在以往CTAB方法的基础上,对其进行改良以探讨一种适于果实总RNA提取的通用方法,从而为果实分子生物学研究奠定基础。研究结果表明,在提取缓冲液中加入PVP和β-巯基乙醇,使其终浓度分别为16%和3%,在匀浆上清液中加入1/3体积5 mol/L KAC(pH4.8),可有效地提高RNA提取的质量。利用改良后的CTAB法成功地从苹果、桃、草莓和葡萄果实中提取出总RNA。经过紫外、电泳、反转录分析结果表明,该改良的CTAB法是一种适合果实总RNA提取的首选方法。     

烟草不同组织总RNA的提取方法初探

【研究目的】寻找烟草各个组织总RNA最佳的提取方法。【方法】以烟草K326的根、茎、叶、蕾、花和种子为材料,分别采用试剂盒法、Trizol法和CTAB法提取烟草6个组织总RNA进行对比。【结果】烟草不同组织总RNA提取方法有所不同,试剂盒法和Trizol法只能提取出根、茎、叶、蕾和花的总RNA,而不能提取种子总RNA;CTAB法能提取出6个组织的RNA。3种方法提取的RNA质量好,均能满足RT-PCR以及后续实验的要求。【结论】试剂盒法较Trizol法和CTAB法简单、快捷,适合于烟草除种子以外其余组织总RNA快速提取,CTAB法适合烟草所有组织总RNA提取。     

一种适合提取枣果实总RNA的方法

多糖许多理化性质与RNA十分相似,很难将它们分开,而污染了多糖的RNA样品无法用于进一步的分子生物学研究。针对枣果实多糖含量高的特点,作者开发了一套适宜提取枣果实总RNA的方法——改良SDS法。采用该提取方法可有效去除多糖、酚类化合物、蛋白质等物质的影响,获得质量高、无杂质污染、完整性好的枣果实总RNA。